雷尼替丁中亚硝基化合物检测方案(液质联用仪)

The world leader in serving science 药物基因毒性杂质分析检测解决方案雷尼替丁中的N-亚硝基化合物 药物中的杂质是指药物中存在的无治疗作用、或影响药物的稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质。近期，基因毒性杂质风波再起，这一次的主角是雷尼替丁， FDA已在某些企业Zantac(雷尼替丁)等药物中发现N-nitrosodimethylamine (NDMA)N-二甲基亚硝胺可疑杂质，并正在研究确定受污染成分的来源及其在这些药物中的风险，为此多家药企启动了雷尼替丁类药物的全球召回。雷尼替丁中发现的基因毒性杂质为N-亚硝基二甲胺(NDMA)，此类杂质并不是第一次出现，2018沸沸扬扬的沙坦类药物也涉及到该基因毒性杂质。 近日， EMA发布了《EMA 建议药企采取步骤避免人用药物中的亚硝胺 (EMA/511347/2019)》文件，要求药企对所有化学合成药物的药品质量、安全性和有效性进行最终监督，以对亚硝胺的潜在污染进行风险评估。 什么是基因毒性杂质? 基因毒性杂质是指能直接接间接损伤细胞 DNA，产生致突变和致癌作用的物质。可能产生基因毒性杂质的环节包括新药合成，原料纯化，存储运输(与包装物接触)等。 DNA的损伤 人类基因组是由大约3X109个碱基组成的序列，只有四种碱基，即腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)和胸腺嘧啶(T) 基因毒性杂质N-亚硝基化合物包括哪些 N-二甲基亚硝胺(NDMA)是一种致癌物，其产生是由多个因素的组合导致的，通过生产工艺中特定的步骤顺序产生。世界卫生组织国际癌症研究机构在2017年公布的致癌物清单， NDMA在2A类致癌物清单中，具刺激作用。长期接触对肝、肾有损害。N-亚硝基化合物包括： ·N-nitrosodimethylamine(NDMA) 。 N-nitrosodiethylamine (NDEA) ·N-nitrosoethylisopropylamine (NEIPA) ·N-nitrosodiisopropylamine(NDIPA) ·N-nitrosodibutylamine (NDBA) ·N-nitroso-N-methyl-4-aminobutyric acid(NMBA) 现有法规指南 。欧洲药品评审组织指南(EMEA) ·美国药典(USP) 。食品药品监督管理局(FDA) ·人用药物注册技术要求国际协调会议指南(ICH) 药物中基因毒性杂质的分析 由于待分析物的特殊性，分析方法面临多重挑挑： 。许多基因毒性杂质的化学性质很不稳定。 。检测方法缺乏灵敏度，传统分析方法的定量限在主成分的0.05%和0.03%之间。干扰大，极高浓度的原料药里同时存在的基因毒性杂质 2019年9月24日，FDA 紧急更新了雷尼替丁中 NDMA 的检测方法 方法一： 以 Orbitrap 高分辨质谱平台检测 NDMA(FY19-177-DPA-S)， 并可拓展同时检测六种N-亚硝基化合物(FY19-107-DPA-S) Thermo ScientificQExactiveM系列四极杆-静电场轨道阱高分辨串联质谱是一款组合型 Quadrupole Exactive(QE) 静电场轨道阱高分辨质谱，该类质谱系统地将四极杆母离子选择性与高分辨率和准确质量数(HRAM)Orbitrap检测相结合，提供出色性能和多功能性。 本方案充分利用 Q Exactive 静电场轨道阱高分辨质谱保持高分辨的情况下不损失定量灵敏度的特点，运用PRM(平行反应监测)及 SIM (选择离子监测)同时扫描来实现基因毒的定量；再根据QExactive 系列质谱能够实现快速正负切换的特点，方法采用正负切换进行扫描，从而达到一针同时分析6个基因毒性杂质。定量时分辨率均在35000以上，从而使方法的专属性极强，能够有效排除基质或背景的干扰。 方法灵敏度如下所示： NDMA NDEA NEIPA NDIPA NDMA NMBA LOD (ng/mL)(ppm) 0.10 0.32 0.05 0.15 0.10 0.20 0.005 0.016 0.003 0.008 0.005 0.010 LOQ(ng/mL) (ppm) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 Range (ng/mL) (ppm) 1.0-100 1.0-100 1.0-100 1.0-100 1.0-100 1.0-200 0.05-5.0 0.05-5.0 0.05-5.0 0.05-5.0 0.05-5.0 0.05-10.0 混标样品特征图谱如下图所示： 方法二： 三重四极杆质谱 TSQ Fortis 针对基因毒性物质10个N-亚硝基化合物建立稳定灵敏的分析方法。该方法在电喷雾离子化(ESI)条件下即可进行有效检测分析，试验结果优异，该方法稳定、快速、满足日常微量基因毒性物质N-亚硝胺类化合物的分析要求。 方法灵敏度如下所示： 化合物 简称 检测限 (PPB) 线性范围 5ppb RSD% 50ppb RSD% 500ppb RSD% N-二甲基亚硝胺 NDMA 1 2-1000 ng/mL 3.77 1.76 1.28 N-亚硝基甲乙胺 NMEA 1 2-1000 ng/mL 3.58 1.06 1.15 1-亚硝基吡咯烷 NPYR 0.2 0.5-1000 ng/mL 2.87 2.33 1.69 N-亚硝基二乙胺 NDEA 0.5 1-1000 ng/mL 4.9 1.61 0.73 N亚硝基哌啶 NPIP 0.5 1-1000ng/mL 4.5 2.46 0.4 N-亚削基吗啉 NMOR 0.2 0.5-1000 ng/mL 4.23 2.22 2.81 N-亚基二丙胺 NDPA 0.1 0.5-1000 ng/mL 4 2.07 1.39 N-亚硝基二正丁胺 NDBA <0.1 0.1-1000 ng/mL 2.91 1.09 0.84 N-亚硝基二苯胺 NDPhA <0.1 0.1-1000 ng/mL 4.35 1.1 1.71 二乙醇亚硝胺 NDELA 1 2-1000 ng/mL 4.91 2.8 3.73 混标样品特征图谱如下图所示： 如何应对FDA新政 赛默飞分别基于高分辨质谱 Orbitrap 平台和三重四极杆质谱平台，开发并重现了基于FDA FA19-177-DPA-S的检测 NDMA 类N-亚硝基化合物的方法，该方法灵敏、快速和稳定，具备优异的重现性，灵敏度远低于 FDA定量限要求 1ng/ml，完全满足药品日常分析中基因毒性杂质的检测要求。 公 赛默飞世尔科技 上海 成都 南京 上海市浦东新区新金桥路27号3，6，7号楼 成都市临江西路1号锦江国际大厦1406室 南京市中央路201号南京国际广场南楼1103室 邮编201206 邮编610041 邮编210000 电话021-68654588*2570 电话028-65545388*5300 电话 021-68654588*2901 生命科学产品和服务业务 上海市长宁区仙霞路99号21-22楼 邮编200051 电话021-61453628/021-61453637 沈阳沈阳市沈河区惠工街10号卓越大厦3109室邮编110013 西安 西安市高新区科技路38号林凯国际大厦 1006-08单元 电话 024-31096388*3901 邮编710075 北京 电话029-84500588*3801 北京市东城区北三环东路36号环球贸易 中心C座7层/8层 邮编100013 武汉 昆明 电话+86 108794 6888 武汉市东湖高新技术开发区高新大道生物园路 云南省昆明市五华区三市街6号柏联广场写字 生物医药园C8栋5楼 楼908单元 邮编430075 邮编650021 电话027-59744988*5401 电话0871-63118338*7001 广州 广州国际生物岛寰宇三路36、38号合景 星辉广场北塔204-206单元 邮编510000 电话 020-82401600 欲了解更多信息，请扫描二维码关注我们的微信公众账号 赛默飞世尔科技在全国有共21个办事处。本资料中的信息，说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 热线8008105118 赛默飞 赛默飞色谱 电话4006505118 官方微信 口 与质谱中国 www.thermofisher.com 本方案充分利用Q Exactive 静电场轨道阱高分辨质谱保持高分辨的情况下不损失定量灵敏度的特点，运用PRM( 平行反应监测) 及SIM（选择离子监测）同时扫描来实现基因毒的定量；再根据Q Exactive 系列质谱能够实现快速正负切换的特点，方法采用正负切换进行扫描，从而达到一针同时分析6 个基因毒性杂质。定量时分辨率均在35000 以上，从而使方法的专属性极强，能够有效排除基质或背景的干扰。