牛血清白蛋白中蛋白质序列检测方案(生物质谱)

SSL-CA14-963Excellence in Science Excellence in ScienceMALDI-009 http：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区宜州路180号华鑫天地二期C801栋 咨询电话：021-34193996Hotline： 021-34193996Building C801， No.180 Yizhou Road， Shanghai 应用台式 MALDI-TOF-MS分析蛋白质序列 MALDI-009 摘要：本文将牛血清白蛋白酶解并脱盐后，以 CHCA (a-氰基-4-羟基肉桂酸)为基质，应用岛津台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪 MALDI-8020分析，得到了酶解产物的肽指纹(PMF)图谱。以PMF图谱检索 Mascot 数据库，匹配到了有效的肽段序列信息，这些肽段归属于牛血清白蛋白(BSA)。这表明此方法可以鉴定数据库中的蛋白质。 关键词：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱MALDI-8020蛋白质序列牛血清白蛋白 MALDI-TOF-MS因其分析速度快、通量高，是分析蛋白质序列的常用手段之一。传统分析蛋白质序列的 MALDI-TOF体积较大，价格昂贵，而MALDI-8020 作为台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱，占地面积小，价格相对较低，性能与同等模式的大型质谱相比毫不逊色，同样可以较为方便地进行分析蛋白质序列。本文以牛血清白蛋白 BSA 为 例，使用胰蛋白酶酶解后，采用 MonoSpin@ C18除盐，以CHCA为基质，应用 MALDI-8020 检测酶解产物，通过 Mascot 软件检索数据库，搜库结果与理论相符，匹配到了 BSA的肽段序列，验证了 MALDI-8020 的检测结果，表明 MALDI-8020 可以满足蛋白质序列分析的要求。 实验仪器 1.1仪器 MALDI-8020台式基助辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪 1.2分析条件 调谐模式：线性正离子模式扫描范围：m/z 600-4000激光器：355nm 固态激光器激光能量：75 样品前处理 取100 ug样品，应用5mM DTT(二硫苏糖醇)和20 mM IAA(碘乙酰胺)进行还原烷基化处理后，加入2uL胰蛋白酶 (0.5 ug/uL) 37℃酶解过夜。酶解完成后采用 MonoSpin C18按照说明书进行脱盐。吸取0.5uL样品溶液和 0.5 uL CHCA (5 mg/mL) 基质溶液点靶，自然干燥后送入质谱进行分析。 结果与讨论 BSA酶解产物的一级质谱检测结果如图1所示。从结果来看，酶解产物在 m/z 600-2100之间检测到显著信号峰。将样品一级肽指纹图谱(PMF) 通过 Mascot 软件检索数据库 SwissProt (2018_12，558898条序列)(参数设置见图2)，结果如图3所示，成功匹配到蛋白质 ALBU_BOVIN(牛血清白蛋白)的部分肽段序列，与理论一致。 图1牛血清白蛋白的胰蛋白酶酶解产物的一级质谱图 图2.Mascot检索参数 1. sp|P02769ALBU BOVIN Mass： 71244 Score：1112 Expect：3.5e-006 Queries matched： 21 Serum albumin OS=Bos taurus OX=9913 GN=ALB PE=1 SV=4 Start-End Observed Mr (expt) Mr(calc) Delta 29-34 712.4700 711.4627 711.3664 0.0964 00010100010000000000 K.SEIAHR.F 66-75 1163.7800 1162.7727 1162.6234 0.1494 K.LVNELTEFAK.T 89-100 1419.9900 1418.9827 1418.6864 0.2963 K.SLHTLFGDELCK.V 118 122 658.4600 657.4527 657.3082 0.1445 K.QEPER.N 156-160 665.5300 664.5227 664.3697 0.1530 K.KFWGK.Y 161 167 927.6500 926.6427 926.4861 0.1566 K.YLYEIAR.R 168 183 2045.2900 2044.2827 2044.0206 0.2621 R.RHPYFYAPELLYYANK.Y 205 209 649.4700 648.4627 648.3265 0.1362 K.IETMR.E 236-241 689.4700 688.4627 688.3656 0.0971 K.AWSVAR.L 347-：359 1568.0000 1566.9927 1566.7354 0.2573 K.DAFLGSFLYEYSR.R 360-371 1439.9800 1438.9727 1438.8045 0.1683 R.RHPEYAVSVLLR.L 361-371 1283.9000 1282.8927 1282.7034 0.1894 R.HPEYAVSVLLR.L 402 412 1306.0200 1305.0127 1304.7088 0.3039 K.HLVDEPONLIK.Q 413 420 1068.6600 1067.6527 1067.4342 0.2185 K.QNCDQFEK.L 421 433 1479.9300 1478.9227 1478.7881 0.1346 K.LGEYGFONALIVR.Y 460 468 1166.8800 1165.8727 1165.4856 0.3871 R.CCTKPESER.M 469 482 1725.0900 1724.0827 1723.8273 0.2554 R.MPCTEDYLSLILNR.L 499 507 1138.7400 1137.7327 1137.4907 0.2420 K.CCTESLVNR.R 508 523 1881.1800 1880.1727 1879.9138 0.2589 R.RPCFSALTPDETYVPK.A 524--528 609.4600 608.4527 608.2806 0.1721 K.AFDEK.L 569 580 1399.8800 1398.8727 1398.6853 0.1874 K.TVMENEVAFVDK.C 图3.牛血清白蛋白酶解产物的一级PMF搜库结果 ]结论 Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center 本文将牛血清白蛋白酶解并脱盐后，以CHCA（α-氰基-4-羟基肉桂酸）为基质，应用岛津台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪MALDI-8020分析，得到了酶解产物的肽指纹（PMF）图谱。以PMF图谱检索Mascot数据库，匹配到了有效的肽段序列信息，这些肽段归属于牛血清白蛋白（BSA）。这表明此方法可以鉴定数据库中的蛋白质。