尿液中乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸二乙酯检测方案(液相色谱仪)

thermoscientific技术文档64970 液相色谱方法热线8008105118电话4006505118www.thermofisher.comSCIENTIFIC 采用 TSQ Quantis 分析尿液中的乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸二乙酯 ( Kristine Van Natta， Neloni Wijeratne， Claudia Martins T hermo Fisher Scientific， 圣何塞 ， 加利福尼亚 ) 采用液相色谱与三重四极杆质谱联用技术，为尿液中 EtG 和 EtS 的法医毒物学分析开发耐用灵敏的 LC-MS/MS 分析工作流程。 前言 众所周知，乙基葡萄糖醛酸苷(EtG)和硫酸二乙酯(EtS)可作为监测乙醇消耗量的生物标志物。虽然它们是乙醇的次生代谢产物，但由于半衰期较长，因此可在法医研究中被用于检测过去是否服用过酒精。 实验 样品制备 将等体积(50pL)尿液与内标化合物(5000 ng/mL EtG-d5 和 500 ng/mLEtS-d5)混合，然后用900 uL 的水稀释20倍。将5 uL样品进样至 LC-MS/MS 系统。 采用 Thermo ScientificM VanquishTM Flex HPLC 系统和Phenomenex SynergilM Hydro 反相色谱柱(100×3mm，2.5 um 粒径)进行色谱分离。流动相A和B分别为含0.1%甲酸的水和含0.1%甲酸的甲醇溶液，溶剂分别为Fisher ChemicalM OptimaM级水和甲醇。总运行时间为6分钟。 分析 EtG、EtS 及其内化内标化合物时同时监测了两种选择反应监测(SRM)离子对，用于离子比率确认(IRC).在分时选择反应监测(t-SRM)模式下进行扫描，循环时间为0.4秒。表2显示了本次分析中使用的 SRM 离子对信息。 数据分析 质谱方法 采用 Thermo ScientificM TraceFinderM 软件采集并处理数据。 采用配置加热电喷雾电离探针的 Thermo ScientificMTSQ QuantisM三重四极杆质谱仪进行分析。表1显示了质谱仪的离子源参数。 评价 通过分析校正曲线，然后同一样品重复进样六次作为质控样(QC)，测定分析精密度和准确度。通过17个不同批次人尿液中的内标信号评价基质效应。 表 1.采用 TSQ Quantis 三重四极杆质谱仪分析 EtG 和 EtS 的离子源参数。 离子源参数 设置值 喷雾电压(负离子) 2500V 鞘气 35 Arb 辅助气 10 Arb 吹扫气 0 Arb 离子传输管温度 350℃ 雾化器温度 300℃ 鞘气 35 Arb 表 2. EtG 和 EtS 的 SRM 离子对信息。 化合物 开始时(min) 结束时(min) 极性 母离子(m/z) 子离子(m/z) 碰撞能量(V) 透镜电压(V) EtS 0 2 负离子 125.062 79.817 30 75 EtS 0 2 负离子 125.062 96.889 15 75 EtS-d5 0 2 负离子 130.062 79.817 31 81 EtS-d5 0 2 负离子 130.062 98.014 15 81 EtG 2 6 负离子 221.062 74.889 14 92 EtG 2 6 负离子 221.062 84.921 16 92 EtG-d5 2 6 负离子 226.062 74.889 16 94 EtG-d5 2 6 负离子 226.062 84.921 16 94 EtG 将 EtG 和 EtS 的定量限(LOQ)定义为根据线性校正曲线反算得到的校正物浓度位于理论值20%范围内、离子比率在目标物20%范围内且重复进样的%RSD 低于20%时的最低浓度。正常尿液中 EtG 和 EtS 的 LOQ分别为 100 ng/mL 和 10 ng/mL。图1显示了各分析物在LOQ 下的提取离子流图。图2显示了两种化合物的校正曲线。 EtG 的平均离子比率=91.32 B EIS Y=4.7e-4X+1.537e-2；R^2：0.9931； Origin： Ignore； W： 1/X^2； Area 图2.正常尿液中(A) EtG和(B)EtS 的校正曲线。 重复进样校正浓度范围内的质控样品时，该方法呈现出极好的精密度。EtG 的%RSD小于 9.8%， EtS 的%RSD小于4.0%。此外，17个不同批次的正常受试尿液中未观察到明显的基质效应。图3显示了与校正样品相比，不同批次尿液的内标峰面积回收率。 图3.多批正常尿液中 EtG 和 EtS 内标的基质效应。 ·TSQ Quantis 三重四极杆质谱仪为尿液中 EtG 和 EtS的分析提供了卓越的灵敏度和耐用性。 ·采用该方法分析尿液中的 EtG 和 EtS 时，定量限分别为100 ng/mL 和 10 ng/mL。 ·该方法适用于法医毒物学分析。 众所周知，乙基葡萄糖醛酸苷（EtG）和硫酸二乙酯（EtS）可作为监测乙醇消耗量的生物标志物。虽然它们是乙醇的次生代谢产物，但由于半衰期较长，因此可在法医研究中被用于检测过去是否服用过酒精。TSQ Quantis 三重四极杆质谱仪为尿液中 EtG 和 EtS 的分析提供了卓越的灵敏度和耐用性采用该方法分析尿液中的 EtG 和 EtS 时，定量限分别为 100 ng/mL 和 10 ng/mL。该方法适用于法医毒物学分析。