11种毒物中定性定量分析检测方案(液质联用仪)

thermoscientific D：Dujis_projec..QC1_1ng1ppb_20425/18 15：18：47 基于公安部毒驾行业标准GA1333-2017的三重四级杆液质联用一体化解决方案 彭毅侯、徐牛生 赛默飞世尔科技(中国)有限公司上海201206 摘要 本方案是针对公安部毒驾行业标准GA1333-2017 《车辆驾驶人员体内毒品含量阈值与检验》分析要求，建立了6-单乙酰吗啡、吗啡、可卡因、苯甲酰爱康宁、四氢大麻酚、四氢大麻酸、甲基苯丙胺、苯丙胺、3，4-亚甲二氧基甲基苯丙胺(MDMA)、3， 4-亚甲二氧基苯丙胺(MDA)、氯胺酮等11种常见毒品的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测方法。使用赛默飞世尔科技三重四级杆液质联用系统UHPLC Ultimate 3000 + TSQEndura进行分析，以C18色谱柱对化合物进行分离并对质谱条件进行优化。结果表明11种化合物都有极好的保留与良好的分离，该方法去便、灵敏、准确，可用于11种国家规定管制毒品及精神类药物的同时检测。 引言 毒驾(driving under the influence of drugs ) 即吸食、注射鸦片、海洛因、甲基苯丙胺(冰毒)、吗啡、大麻、可卡因，以及国家规定管制的其他能够使人形成瘾癖的麻醉药品和精神药品后驾驶车辆，并且血液、唾液中毒品含量达到或超过规定阈值的行为。吸食合成毒品人员在吸毒后，所产生的精神极端亢奋甚至妄想、幻觉等症状，会导致驾驶人脱离现实场景，判断力低下甚至完全丧失判断。因吸毒后驾驶机动车引发的交通事故不断增多，毒驾作为危险驾驶行为已经严重威胁人们的安全；为了能够高效执法，公安部于2017年5月18日发布并实施了最新中华人民共和国公共安全行业标准 GA1333-2017《车辆驾驶人员体内毒品含量阈值与检验》，规定了车辆驾驶人员体内鸦片、海洛因、甲基苯丙胺(冰毒)、吗啡、大麻、可卡因，以及国家规定管制的其他能够使人形成瘾癖的麻醉药品和精神药品的含量阈值与检测方法，通过检测司机的唾液和血液样本即可判定其是否属于毒驾范围。 基于赛默飞世尔科技超高效液相色谱串联三重四级杆质谱联用系统，本文采用UHPLC Ultimate 3000 + TSQ Endu-ra，凭借卓越的灵敏度、稳定性与抗干扰能力，实现极好的保留，分离与完美的峰型，是一种高灵敏度、准确度与重现性的分析方法。 实验条件 仪器装置 Thermo Fisher UHPLC Ultimate 3000超高压液相色谱和TSQ Endura三重四极杆质谱仪 液相色谱方法 色谱柱： EclipsePlus C18(3.0x150mm 1.8um) 进样量：5uL 流动相A：5mM乙酸铵水溶液B：乙腈流速：0.35 ml/min 表1梯度洗脱程序 Time(min) A% B% 0.0 90 10 0.5 90 10 1.5 80 20 7.5 80 20 9.0 5 95 13 5 95 13.5 90 10 16.5 90 10 离子源：电喷雾离子源(ESI) 电离模式：正负离子切换模式 监测模式：选择反应监控(SRM) 喷雾电压：3000V(+)；2800V(-) 鞘气压力：50 Arb 辅助气压力：15 Arb 蒸发温度：350℃ 离子传输管温度：325℃ 碰撞气气力：1.5mTor 表2.化合物离子对信息 名称 电离模式 母离子 RF-lens 子离子 碰撞能 苯丙胺 (Amphetamine) 正 136.1 53 *91.1 16.8 199.1 10.2 甲基苯丙胺(Mathamphetamine) 正 150.1 64 *91.1 18.3 119.1 10.2 3，4-亚甲二氧基苯丙胺(MDA) 正 180.1 60 *163.0 10.2 135.1 18.1 3，4-亚甲二氧基甲基苯丙胺(MDMA) 正 194.1 71 *163.0 12.0 135.0 20.3 氯胺酮( Katamine) 正 238.1 84 *125.0 28.7 220.0 14.8 吗啡 (Morphine) 正 286.1 139 *200.9 26.0 吗啡 (Morphine) 正 286.1 139 *200.9 26.0 164.9 42.6 苯甲酰爱康宁(Benzoylecgonine) 正 290.1 128 *168.1 18.6 105.1 29.4 可卡因(Cocaine) 正 304.1 121 *182.0 19.3 105.1 31.8 四氢大麻酚(THC) 负 313.3 160 191.3 26 *245.3 24.0 四氢大麻酸(THC-COOH) 负 343.3 130 *245.3 30.0 191.3 29 6-单乙酰吗啡(6-Monoacetylmorphine) 正 328.1 167 *165.0 37.5 211.0 25.2 注：标“*”为定量子离子 准确称取检1.0mL(精确至0.01 mL)，匀浆，，11~5倍于检材的乙腈沉淀蛋白，涡旋1~5分钟，大于8000 rpm/min离心3~10分钟，分出上清液，过C18或蛋白过滤柱，0.22 um微孔滤膜，滤液备检。必要时可将滤液用初始流动相稀释或氮气流挥干后用初始流动相复溶；定容至刻度，供液相色谱-串联质谱仪测定。 采用上述仪器分析方法，本文建立了三重四极杆液质联用仪(TSQ Endura) 分析11种毒物的检测方法，标准曲线(1.0 ppb， 2.0 ppb， 5.0 ppb， 10 ppb， 20 ppb， 100ppb)见图1，定量限表3，提取离子色谱图见图2，重复性见图3，由实验结果可以看出，基于Thermo Fisher TSQEndura建立的检测方法具有良好的保留与分离能力，优异的灵敏度和线性，使用常规的LC-MS兼容试剂作为流动相，简单高效，可用于标准GA1333-2017标准中规定11种毒物的日常分析检测。 Amphetamine Methamphetamine Y=56356.7+41732.3*XR2=0.9988 W：Equal 图1：11种毒物标准曲线线性范围1.0-100 ng/mL线性测试结果 化合物 保留时间 定量限 线性系数 质控回收率 重现性(N=6) 苯丙胺 (Amphetamine) 5.13 1ppb 0.9988 86.7% 3.58% 甲基苯丙胺 (Mathamphetamine) 5.65 1ppb 0.9984 82.3% 4.03% 3，4-亚甲二氧基苯丙胺(MDA) 5.31 1ppb 0.9988 107% 5.74% 3，4-亚甲二氧基甲基苯丙胺(MDMA) 5.79 1ppb 0.9995 83.4% 4.59% 氯胺酮(Katamine) 11.64 1ppb 0.9981 79.3% 1.33% 吗啡(Morphine) 4.24 1ppb 0.9958 83.8% 4.23% 苯甲酰爱康宁(Benzoylecgonine) 5.80 1ppb 0.9997 90.1% 4.26% 可卡因 (Cocaine) 10.80 1ppb 0.9993 84.3% 1.42% 四氢大麻酚(THC) 14.51 1ppb 0.9995 84.7% 4.30% 四氢大麻酸(THC-COOH) 12.20 1ppb 0.9978 92.2% 4.10% 6-单乙酰吗啡(6-Monoacetylmorphine) 6.80 1ppb 0.9998 105% 4.71% 表3：11种化合物方法学参数 图2：11种化合物定量限浓度水平基质加标提取离子色谱图 图3：LOQ水平浓度(1ppb)下同时测定氯胺酮(正模式)、四氢大麻酸(负模式)连续进样6针色谱图 总结 本次实验基于赛默飞世尔科技三重四级杆液质联用系统UHPLC Ultimate 3000 + TSQ Endura，建立了同时测定11种毒物的LC-MS/MS方法，经方法学考察灵敏度，重现性，线性范围均满足分析要求，适用于公安部毒驾行业标准GA1333-2017《车辆驾驶人员体内毒品含量阈值与检验》的测定。 1.GA1333-2017《车辆驾驶人员体内毒品含量阈值与检验》 ( 2. GDLH/T 1005-2016《生物检材中常见毒品的液质联用 定性检验方法-广东省刑事技术理化检验技术规范》 ) ThermoFisherS CIENTIFIC 热线话ww.thermofisher.com仅用于研究目的。不可用于诊断目的。◎ Thermo Fisher Scientific Inc. 保留所有权利。所有商标均为 Thermo Fisher Scientific Inc. 及其子公司的资产，除非另有指明。 本方案是针对公安部毒驾行业标准GA1333-2017 《车辆驾驶人员体内毒品含量阈值与检验》分析要求，建立了6-单乙酰吗啡、吗啡、可卡因、苯甲酰爱康宁、四氢大麻酚、四氢大麻酸、甲基苯丙胺、苯丙胺、3,4-亚甲二氧基甲基苯丙胺（MDMA）、3, 4-亚甲二氧基苯丙（MDA）、氯胺酮等11种常见毒品的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测方法。使用赛默飞世尔科技三重四级杆液质联用系统UHPLC Ultimate 3000 + TSQ Endura进行分析，以C18色谱柱对化合物进行分离并对质谱条件进行优化。结果表明11种化合物都有极好的保留与良好的分离，该方法简便、灵敏、准确,可用于11种国家规定管制毒品及精神类药物的同时检测。本次实验基于赛默飞世尔科技三重四级杆液质联用系统UHPLC Ultimate 3000 + TSQ Endura，建立了同时测定11种毒物的LC-MS/MS方法，经方法学考察灵敏度，重现性，线性范围均满足分析要求，适用于公安部毒驾行业标准GA1333-2017《车辆驾驶人员体内毒品含量阈值与检验》的测定。