掺入四氢大麻酚的混合药物中成分分析检测方案(液相色谱仪)

|技术简报WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. [技术简报 目的 使用Waters""Oasis"MCX 96孔pElution板开发一种可应用于不同的唾液收集装置的样品制备方法，用于分析含有四氢大麻酚(THC) 的混合药物组。 背景 分析唾液中的低浓度药物已成为世界各地许多法医学实验室的一项重要需求。市面上有许多唾液收集装置，使用这些装置能够以非侵入性但又符合监管要求的方式收集唾液样品，操作非常简单。这些装置能为实验室提供纯唾液样品或添加了不同防腐剂缓冲液的唾液样品。 由于收集装置未实现标准化，人们迫切需要能与所有常用收集装置配套使用，并且能萃取出所有分析物的样品制备策略。这些方案最常被用于检测THC，但是，许多其它类别的药物(例如鸦片制剂、阿片类药物、安非他命类药物和苯二氮卓类药物)也有必要进行测定，并且由于样品体积可能有限，必须使用单一样品制备方法进行处理。 图1.THC定量MRM通道的色谱图，三张图分别对应使用三种不同收集装置收集唾液并加标THC的三个样品。制备所得的样品中THC的浓度相当于纯唾液中1ng/mL的浓度。 Oasis MCX pElution能够从这些成分复杂有体积有限的基质中萃取出所有这些分析物，而且萃取效率足够高，可满足现行指导原则的要求(例如欧洲工作场所药物检测协会(EWDTS)指导原则) 解决方案 本研究所用的唾液收集装置包括：购自Sarstedt的Salivette°唾液收集装置、购自Immunalysis的Quantisal 唾液收集装置和购自Greiner Bio-One的唾液收集系统。按照每个制造商的说明书收集对照唾液样品，并加标常规唾液分析中需要测定的27种违禁药物和处方药混合物。 采用之前报道的方法2.3，使用简单的OasisMCX96孔pElution板(部件号186001830BA)方案萃取基质中的分析物。从每个收集装置移取并加载到样品板上的样品体积等于相同体积(<75uL)的纯唾液。使用双通道MRM方法(每种分析物都设有定量离子和定性离子)采集数据，并使用TargetLynx"应用管理软件处理数据。 THC的化学性质与分析物组中的其它分析物差别很大，因此，需要使用不同的色谱梯度才能满足EWDTS唾液分析指导原则中推荐的THC确认检测的2 ng/mL的cut-off值，如图1所示。 将Oasis MCX pElution板得到的洗脱液分为两等份加载到96孔样品收集板中(700pL圆孔，部件号186005837)。在氮气下挥干后，分别使用两种溶剂复溶两个等分试样。其中一份等分试样使用50%乙腈复溶，该试样专门用于分析THC；另一份等分试样使用含有0.1%空白人血浆的5%乙腈中，用于测定所有其它化合物。图2显示了所有分析物(THC除外)的色谱分离结果，其纵坐标已放大至最大程度。 为避免切换色谱柱，两种分析方法均采用同一根ACQUITY"UPLC" BEH C18色谱柱(部件号186002352)，并且使用相同的流动相，以便连续运行分析。 ( 由于唾液中的分析物浓度比其它生物基质中 的浓度更低，高灵敏度的Xevo"TQ-S micro质谱仪与ACQUITY UPLCI-Class系统(FTN) 联用非常适合这类应用。 ) 图2.显示了所有分析物(THC除外)的定量MRM通道的色谱图，唾液样品使用Immunalysis Quantisal收集装置获得。制备所得的样品中的分析物浓度相当于纯唾液中2ng/mL的浓度。突出显示的6-MAM(峰#6)、去甲丁丙诺啡(峰#13)和丁丙诺啡(峰#15)为具有EWDTS截止浓度(≤2ng/mL)的化合物。 总结 由于药物组中存在化学性质相差极大的各类化合物，加之唾液收集装置通常只能提供体积有限的样品，唾液样品分析的难度极大。使用单一的Oasis MCXpElution样品处理方法和两种UPLC-MS/MS方法，能够在15 min内成功分析包括THC的混合药物组，并且药物浓度满足现行指导原则(如EWDTS指导原则)的要求。这种样品制备方法可轻松实现自动化，从而提高样品品量。 ( 参考文献 ) ( 1. E E uropean Workplace Drug Testing Society Guidelines. http：//www.ewdts.org(accessed 29 J une 2017). ) ( 仅供研究使用。不适用于诊断。 ) 扫一扫，关注沃特世微信 Waters 沃特斯中国有限公司 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 上海：021-6156 2666 Waters、The Science of What’s Possible、Oasis、ACQUITY、UPLC、Xevo、 广州：020-28296555 pElution和TargetLynx是沃特世公司的商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400)8202676www.waters.com ◎沃特世公司。中国印刷。H TC-PDF 目的使用Waters™ Oasis™ MCX 96孔µElution™板开 发一种可应用于不同的唾液收集装置的样品 制备方法，用于分析含有四氢大麻酚(THC) 的混合药物组。背景分析唾液中的低浓度药物已成为世界各地许多法医学实验室的一项重要需求。市面上有许多唾液收集装置，使用这些装置能够以非侵入性但又符合监管要求的方式收集唾液样品，操作非常简单。这些装置能为实验室提供纯唾液样品或添加了不同防腐剂缓冲液的唾液样品。由于收集装置未实现标准化，人们迫切需要能与所有常用收集装置配套使用，并且能萃取出所有分析物的样品制备策略。这些方案最常被用于检测THC，但是，许多其它类别的药物(例如鸦片制剂、阿片类药物、安非他命类药物和苯二氮卓类药物)也有必要进行测定，并且由于样品体积可能有限，必须使用单一样品制备方法进行处理。结论由于药物组中存在化学性质相差极大的各类化合物，加之唾液收集装置通常只能提供体积有限的样品，唾液样品分析的难度极大。使用单一的Oasis MCX µElution样品处理方法和两种UPLC-MS/MS方法，能够在15 min内成功分析包括THC的混合药物组，并且药物浓度满足现行指导原则(如EWDTS指导原则) 的要求。这种样品制备方法可轻松实现自动化，从而提高样品通量。