抗体药物中2-氨基苯甲酰胺糖链检测方案(液相色谱仪)

LAAN-A-LC-C030 ApplicationnNo.L483News用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行行：2015年2月 ApplicationNews 高效液相色谱 High Performance Liquid Chromatography No.L483 使用荧光检测器 RF-20Axs 高灵敏度分析2-AB 化糖链 High-Sensitivity Analysis of 2-AB Glycans by RF-20Axs Florescence Detector 因为抗体药物中的糖链直接关系到药品的安全性和有效性，因此需要对所含糖链的类型和含量进行测定。由于培养工艺条件的变化会导致抗体药物中的糖链分布不均匀，所以在生产阶段对糖链的管理非常重要。 应用报告 No.L452介绍了使用荧光检测器对氨基吡啶糖链(PA化糖链)进行分析的示例。本文将向您介绍2-氨基苯甲酰胺糖链(2-AB化糖链)的分析示例。与No. L452相同，本次分析使用了世界最高水平的高灵高度荧光检测器RF-20Axs。 ■低浓度标准溶液的分析 Analysis of Low Concentration Standard Solution 本次分析使用了 2-AB Man5、2-AB G2 和2-AB G2FS1(Prozyme)作为2-AB(2-氨基苯甲安胺)荧光标记。图1为结构式。 图1为分析条件。采用亲水相互作用色谱法(HILIC)对糖链进行了分离。图2为注入2uL(1fmol) 浓度为 0.5 nmol/L的标准溶液的测定结果。由此可知，即使进样体积为1fmol，也具有足够的灵敏度。表2为定量限(S/N=3.3)和检测限 (S/N=10)。 2-AB：2-Aminobenzamide 图12-AB化糖链的结构式 Structures of 2-AB Glycans Used in This Study 表1分析条件 装置 ：Prominence 色谱柱 ： TSKgel Amide-80 (150mm L.×2.0 mm I.D.， 3 um) 流动相 ： A：50mmol/L 甲酸铵 pH 4.4 B：乙 时间程序 ： B.Conc. 73 % (0 min) → 60%(48min)→ 0%(49-53 min) →73%(54-80min) 流速 ： 0.4mL/min (0-48 min， 58.01-80 min)， 0.2 mL/min (48.01-58 min) 柱温 ：40℃ 进样体积 ：2pL 检测器 ： Ex 330 nm， Em 420nm 流通池 ：标准池 ※流动相A的制备方法 值调节到4.4。 图22-AB化糖链1fmol的色谱图(各0.5 nmol/L， 注入2uL) Chromatogram of 1 fmol Each of 2-AB-Labeled Glycans (0.5 nmol/L each， 2 uL injection) 表2检测限与定量限Limits of Detection and Quantitation 糖链 LOD (fmol) LOQ(fmol) 2-AB Man5 0.44 1.33 2-AB G2 0.45 1.36 2-AB G2FS1 0.50 1.48 图3为重复测定6次20nmol/L标准溶液的结果，表3为保留时间和峰面积的重复性(n=6)。由此可知，重复性良好。图4为使用 1 nmol/L 到 100 nmol/L标准溶液的线性结果。由图可知，回归系数(R?)达到0.999以上，表示线性良好。 我们还对糖链混合唐品 2-AB Human IgG N-Linked GlycanLibrary(Prozyme)进行了分析。图5为将 80 nmol/L 的 2-AB HumanIgG N-Linked Glycan Library 注入2 pL (160fmol)的测定结果。 图3 2-AB化糖链各 40fmol 的色谱图(各20nmol/L， 注入2pL)Chromatogram of 40 fmol Each of 2-AB-Labeled Glycans(20 nmol/L each， 2uLinjection) 图5 2-AB Human IgG N-Linked Glycan Library160 fmol 的色谱图(80nmol/L， 注入2uL)Chromatogram of 2-AB Human IgG N-Linked Glycan Library(160 fmol of 80 nmol/L， 2 uL injection) 表3重复性 Repeatability 糖链 保留时间%RSD 峰面积%RSD 2-AB Man5 0.273 0.743 2-AB G2 0.245 0.684 2-AB G2FS1 0.196 0.589 图42~200fmol 的线性(1~100nmol/L，注入2uL) Linearity from 2 to 200 fmol (1 to 100 nmol/L， 2 pL injection) ( 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 ) ( 免责声明： ) ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ) ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ) ( 如有变动，恕不另行通知。 ) 抗体药物中糖链直接关系药品的安全性和有效性。本文介绍使用世界非常高水平的高灵敏度荧光检测器RF-20Axs检测2-氨基苯甲酰胺糖链（2-AB化糖链）。6次重复测定20nmol/L标液重复性良好。1-100nmol/L范围回归系数大于0.999.