血液、尿液、饮料中安眠药检测方案(固相萃取仪)

Raykol Applications Collection-RKFT-B001 全自动固相萃取-气相色谱质谱联用分析血液、尿液、饮料中的安眠药 1.介绍 在刑事化验工作中，经常会遇到安眠药筛选检验，因为各种安眠药经常被犯罪分子用于麻醉抢劫、麻醉凶杀等。对于常见安眠药的提取检验，，普遍采用的液-液提取法需根据药物的性质，在酸、碱条件下分别萃取净化，操作费时而且耗费大量有机溶剂。相对液-液萃取法而言，固相萃取法操作简便，所用 溶剂少，回收率高，净化效果好，是很有前景的检材前处理方法。本方法采用睿科 Fotector 系列全自动固相萃取仪和津杨 GDX-403 树脂柱净化尿液中的巴比妥和安定两种常见安眠药的固相萃取方法。该方法操作简便，回收率高，完全可以用于实际办案中。 关键字：全自动固相萃取；高效液相色谱-串联质谱法；安眠药 2.仪器、耗材 睿科 Fotector Plus / Fotector-02HT全自动固相萃取仪 津杨GDX-403树脂(400 mg/3 mL) Agilent 7890A/5975C 气相色谱/质谱联用仪 3.样品提取与前处理 3.1样品前处理 取尿样2mL于离心管中，加入 pH=6缓冲液5 mL， 超声5 min， 1000 r/min 离心 15 min， 将上清液置于样品瓶中， GDX-403 柱装在全自动固相萃取仪上，按图-1进行固相萃取。洗脱液浓缩至干用乙醇定容至1mL，供 GC/MS 检测。 3.2样品净化步骤 以 0.5 mL/min 的速度上样7 mL 待测液，2mL磷酸缓冲溶液润洗样品瓶，吹干小柱10 min，最后以3mL的无水乙醚，以0.5 mL/min 的速度洗脱样 色谱柱 Agient HP-5M(50 mx250 umx0.25 um) 离心机漩涡混匀器甲醇、乙醇、无水乙醚均为分析纯试剂实验用水直接使用自来水 品，氮吹浓缩至 0.5 mL以下，定容至1mL。详细步骤见图-1。 3.3固相萃取净化条件 表-1.固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 睿科 Fotector Plus/Fotector-02HT 固相萃取柱 津杨 GDX-403 树脂(400mg/3mL) 淋洗 pH 6.0磷酸盐缓冲液，水 洗脱 无水乙醚 序号 命令 溶剂 排出 流速[mL/min) 体积(mL) 时间(min) 1 清洗样品通道 无水乙醚 40 5 1.7 2 活化 CH30H 废液1 0.5 3 6.4 3 活化 H20 废液1 10 5 0.9 4 活化 缓冲液(pH=6.0) 废液1 10 5 0.9 5 上样 废液1 0.5 7 14.7 6 清洗样品瓶 缓冲液(pH=6.0) 废液1 100 2 4.7 7 清洗样品瓶 H20 废液1 100 2 4.7 8 清洗注射泵 CH30H 40 5 0.6 9 清洗注射泵 无水乙醚 40 5 0.6 10 吹干 10 11 洗脱 无水乙醚 收集 0.5 3 6.4 12 气推 收集 2 5 3.1 13 结束 图-1. Fotector Plus/Fotector-02HT 尿液中安眠药固相萃取净化方法 4.检测条件 4.1气相色谱质谱联用条件 GC-MS 检测条件：进样口温度290℃，不分流进样，进样量1.0uL；载气为高纯 He气，恒流模式，流速为1.0 mL/min；电子轰击电离源(EI)，离子源温度230℃，接口(传输线)温度280℃，l质量分析器温度150℃，全扫描模式(Scan)，，电 子倍增器检测电压1576V。 GC 程序升温程序：初始温度50℃，保持 1 min；以20 C/min 速度升温至150℃，保持2 min；以10℃/min 速度升温至300℃，保持5 min。 表-2.2种安眠药的保留时间及离子碎片 项目 CAS 保留时间 离子碎片 巴比妥 Barbital 57-44-3 10.218 156，141 安定 Diazapam 439-14-5 20.324 256，283 4.3标准样品色谱图 图-2.2种安眠药的色谱图(2pg/L) 5.方法可行性验证 5.1基质影响 图-3中标准品和空白基质加标的全扫描叠加图可以看出，尿样基质非常复杂，采用全扫描干扰严重。采用 SIM 模式，样品基质对测定干扰较小(图-4)，巴比妥156的检测几乎没有基质效应，但是安 图-3.尿样基质加标和标准品全扫描叠加图(黑色，标准品；蓝色，样品加标) 图-4.尿样基质加标和巴比妥选择离子(156，左)安定选择离子(256，右)扫描叠加图(黑色标品，蓝色为样品加标) 5.2样品加标回收率测试 在2 ug/mL 的加标水平下，样品经过前处理提取，萃取后，用 Fotector Plus/Fotector-02HT全自动固相萃取仪净化，巴比妥的回收率在 91.2~96.7%之 间， RSD=2.4%(n=3)，安定的回收率在 74.3~85.2%之间， RSD=5.7%(n=3)，完全满足公安系统检测对回收率的要求，回收率如表-3所示： 表-3.加标回收率(%) 化合物 定量离子 R1 R2 R3 Avg RSD 巴比妥 156 94.6 91.2 96.7 94.2 2.4 安定 256 78.2 74.3 85.2 79.2 5.7 6.结果与讨论 6.1采用 GDX-403树脂萃取柱，通过睿科Fotector 系列全自动固相萃取仪净化和气质联用仪 7. 解决方案的优势 本方法可实现血液、尿液及饮料样品中安眠药净化全程自动化，通过Fotector Plus/Fotector-02HT高通量全自动固相萃取仪告别人员看守及人为添加样品和溶容的烦恼，净化完可直接转移 Auto 检测，对尿样中巴比妥和安定的检测，可取得较好的结果，完全适用于公安系统实际办案中。 EVA-60 全自动平行浓缩仪浓缩，管架的兼容性解决人为转移造成的样品损失，大大节约实验室人员时间，提高净化效率，确保自动完成净化任务，同时解决手动操作不平行，易造成误差大的困恼。 热线：址：：\www.raykol.com邮箱： info@raykol.com 邮箱： info@raykol.com网址：： www.raykol.com 本方法采用睿科 Fotector系列全自动固相萃取仪和津杨GDX-403树脂柱净化尿液中的巴比妥和安定两种常见安眠药的固相萃取方法。该方法操作简便，回收率高，完全可以用于实际办案中。