血液、尿液、饮料中安眠药检测方案(固相萃取仪)

Reeko Applications Collection-RKFT-B001 全自动固相萃取仪-GC/MS分析血液、尿液、饮料中的安眠药 1.介绍 在刑事化验工作中，经常会遇到安眠药筛选检验，因为各种安眠药经常被犯罪分子用于麻醉抢劫、麻醉凶杀等。对于常见安眠药的提取检验，普遍采用的液-液提取法需根据药物的性质，在酸、碱条件下分别萃取净化，操作费时而且耗费大量有机溶剂。相对液-液萃取法而言，固相萃取法操作简便，所用 关键字：全自动固相萃取；高效液相色谱-串联质谱法；安眠药 2.仪器、耗材 睿科 Fotector Plus / Fotector-02HT 全自动固相萃取仪 津杨GDX-403树对(400mg/3mL) Agilent 7890A/5975C 气相色谱/质谱联用仪 色谱柱 Agient HP-5M (50mx250umx0.25um) 离心机漩涡混匀器 甲醇、乙醇、无水乙醚均为分析纯试剂实验用水直接使用自来水。 3.样品提取与前处理 3.1样品前处理 取尿样2mL于离心管中，加入 pH=6缓冲液5mL，超声5 min， 1000 r/min 离心 15 min， 将上清液置于样品瓶中， GDX-403 柱装在全自动固相萃取仪上，按图-1进行固相萃取。洗脱液浓缩至干用乙 溶剂少，回收率高，净化效果好，是很有前景的检材前处理方法。本方法采用睿科 Fotector 系列全自动固相萃取仪和津杨 GDX-403树脂柱净化尿液中的巴比妥和安定两种常见安眠药的固相萃取方法。该方法操作简便，回收率高，完全可以用于实际办案中 醇定容至1mL， 供 GC/MS 检测。 3.2固相萃取净化条件 表-1.固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 睿科 Fotector Plus 60 位 or Fotector-02HT 固相萃取柱 津杨 GDX-403 树脂(400mg/3mL) 淋洗 pH 6.0磷酸盐缓冲液，水 洗脱 无水乙醚 3.3样品净化步骤 以0.5 mL/min 的速度上样7 mL待测液，2 mL磷酸缓冲溶液润洗样品瓶，吹干小柱10 min， 最后以3mL的无水乙醚，以0.5 mL/min 的速度洗脱样品，氮吹浓缩至0.5 mL以下，定容至1mL。详细步骤见图-1。 序号 命令 溶剂 排出 流速(mL/min) 体积(mL) 时间(min) 1 清洗样品通道 无水乙醚 40 5 1.7 2 活化 CH30H 废液1 0.5 3 6.4 3 活化 H20 废液1 10 5 0.9 4 活化 缓冲液(pH=6.0) 废液1 10 5 0.9 5 上样 废液1 0.5 7 14.7 6 清洗样品瓶 缓冲液(pH=6.0) 废液1 100 2 4.7 7 清洗样品瓶 H20 废液1 100 2 4.1 8 清洗注射泵 CH30H 40 5 0.6 9 清洗注射泵 无水乙醚 40 5 0.6 10 吹干 10 11 洗脱 无水乙继 收集 0.5 3 6.4 12 气推 收集 2 5 3.1 13 结束 图-1.Fotector Plus / Fotector-02HT 尿液中安眠药固相萃取净化方法 4.检测条件 4.1气相色谱质谱联用条件 GC-MS 检测条件：进样口温度290℃，不分流进样，进样量1.0pL；载气为高纯He气，恒流模式，流速为1.0 mL/min；电子轰击电离源(EI)，离子源温度230℃，接口(传输线)温度280℃， 质量分析器温度150℃，全扫描模式(Scan)，电子 倍增器检测电压1576V. GC程序升温程序：初始温度50℃，保持1 min；以20℃/min 速度升温至 150℃， 保持2 min；以10℃/min 速度升温至300℃，保持 5 min。 4.2定量离子及保留时间 表-2.2种安眠药的保留时间及离子碎片 项目 CAS 保留时间 离子碎片 巴比妥 Barbital 57-44-3 10.218 156，141 安定 Diazapam 439-14-5 20.324 256，283 4.3标准样品色谱图 图-2.2种安眠药的色谱图(2pg/L) 5.方法可行性验证 5.1 基质影响 图-3中标准品和空白基质加标的全扫描叠加图可以看出，尿样基质非常复杂，采用全扫描干扰严重。采用 SIM模式，样品基质对测定干扰较小(图-4)，巴比妥156的检测几乎没有基质效应，但是安 定化合物256处有一定的基质抑制作用，导致样品响应值有所下降。故采用基质工作标准曲线进行定量，，l以免基质效应对检测产生影响。 图-3.尿样基质加标和标准品全扫描叠加图(黑色，标准品；蓝色，样品加标) 图-4.尿样基质加标和巴比妥选择离子(156，左)安定选择离子(256，右)扫描叠加图(黑色标品，蓝色为样品加标) 5.2样品加标回收率测试 在2 ug/mL 的加标水平下，样品经过前处理提取，萃取后，用 Fotector Plus/Fotector-02HT 全自动固相萃取仪净化，巴比妥的回收率在 91.2~96.7%之 间， RSD=2.4%(n=3)，安定的回收率在74.3~85.2%之间， RSD=5.7%(n=3)，完全满足公安系统检测对回收率的要求，回收率如表-3所示： 表-3.加标回收率(%) 化合物 定量离子 R1 R2 R3 Avg RSD 巴比妥 156 94.6 91.2 96.7 94.2 2.4 安定 256 78.2 74.3 85.2 79.2 5.7 6.结果与讨论 尿样中巴比妥和安定的检测，可取得较好的结果，完全适用于公安系统实际办案中。 6.1采用 GDX-403 树脂萃取柱，通过睿科 Fotector系列全自动固相萃取仪净化和气质联用仪检测，对 热线：箱： info@reeko.cn网址： www.reeko.cn 在刑事化验工作中，经常会遇到安眠药筛选检验，因为各种安眠药经常被犯罪分子用于麻醉抢劫、麻醉凶杀等。对于常见安眠药的提取检验，普遍采用的液-液提取法需根据药物的性质，在酸、碱条件下分别萃取净化，操作费时而且耗费大量有机溶剂。相对液-液萃取法而言，固相萃取法操作简便，所用溶剂少，回收率高，净化效果好，是很有前景的检材前处理方法。本方法采用睿科 Fotector系列全自动固相萃取仪和津杨GDX-403树脂柱净化尿液中的巴比妥和安定两种常见安眠药的固相萃取方法。该方法操作简便，回收率高，完全可以用于实际办案中。