维生素C钠中注射用水溶性维生素检测方案(液相色谱柱)

数据文件名：GSP-010.lcd 注射用水溶性维生素的分析(1)-维生素C钠、烟酰胺、泛酸钠、盐酸吡哆辛、硝酸硫胺、核黄素磷酸钠 客户提供了注射用水溶性维生素粉针剂及对照品(维生素C钠、烟酰胺、泛酸钠、盐酸吡哆辛、硝酸硫胺、核黄素磷酸钠)，要求本实验室依据客户所提供方法筛选合适色谱柱，实现粉针剂中各组分物质的良好分离，同时满足方法中对分离度及理论塔板数的要求。 首先，依据客户提供的色谱条件，对对照品溶液进行分析。尝试使用不同填料类型的色谱柱，包括 CAPCELL PAK C18 MGII， AQ S5， AQ S3， SUPERIOREX ODS， CAPCELLPAKADME 及 PFP 色谱柱。 由于不同色谱柱的分离选择性不同，最终发现 CAPCELL PAK C18 MGII 色谱柱在完全按照客户提供方法的前提下能够得到最佳分离结果，对照品溶液中各组分均能够得到良好分离(如图1)，分离度均在3.0以上，满足客户1.5要求；理论塔板数按核黄素计为103983，满足客户大于15000的要求(见表1)。 1 2 4 3 6 5 6-2 图1CAPCELL PAK C18 MGII分析对照品溶液结果 1.维生素C钠2.烟酰胺3.泛酸钠4.盐酸吡哆辛5.硝酸硫胺 6，6-1，6-2核黄素磷酸钠 HPLC Conditions ： 色谱柱：CCAPCELL PAK C18 MGII S5； 4.6 mm i.d.×250mm(柱号： A4AD 06184) 流动相： A： 5 mmol/L 戊烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液 B：5 mmol/L 戊烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液/乙腈=20/80 B%1%(0min)→1%(1min)→8%(6min)→30%(34 min)→80%(39min)→1%(39.1min)0.9 mL/min 流速温度40°C检测样品 PDA210nm 储备液1：称取对照品烟酰胺 40 mg，维生素Ｃ钠113mg， 泛酸钠 16mg 置25mL容量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀。 储备液2：称取对照品硝酸硫胺 6.2 mg，盐酸吡哆辛9.8 mg， 核黄素磷酸钠9.8 mg 置于50mL容量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀。 对照品溶液：分别取储备液1、2各1mL于10mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。 进样量： 20 pL 表1 CAPCELL PAK C18 MGII 分析对照品溶液结果详表 峰号 保留时间 理论塔板数 分离度 (USP) (USP) 1 4.28 8354 2 8.77 31532 23.32 3 12.00 70650 17.09 4 12.52 92380 3.00 5 14.41 102951 10.98 6-1 15.79 100436 7.30 6 17.79 103983 9.54 6-2 23.46 184018 25.77 在上述色谱条件下，继续使用 CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱对粉针剂供试品溶液进行分析，各待测组分及相邻杂质均能够得到良好分离，结果见图2、图3及表2。 图2 CAPCELL PAK C18 MGII 分析供试品及空白溶液结果 1.维生素C钠2.烟酰胺3.泛酸钠4.盐酸吡哆辛5.硝酸硫胺 6，6-1，6-2核黄素磷酸钠 ( HPLC Conditions ： ) ( 色谱柱： CAPCELL PAK C18 MGII S5； 4.6 mm i.d . ×250mm (柱号： A4AD 06184) ) ( 流动相： A： 5 mmol/L戊烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液 ) B：5mmol/L 戊烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液/乙腈=20/80 B% 1%(0min)→1%(1min)→8%(6min)→30%(34min)→80%(39min)→1%(39.1 min) 流速0.9 mL/min温度检测样品 40°C PDA210 nm ( 取注射用水溶性维生素样品一瓶，加水溶解后移至250 mL容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀。 ) 进样量： 20pL 样品名：GSP 图3CAPCELL PAK C18 MGII分析供试品溶液结果放大图 表2 MGII分析供试品溶液结果详表 保留时间 面积 理论塔板数 分离度 (USP) (USP) 4.274(维生素C钠) 4775886 7670 -- 5.063 20547 15368 4.40 5.725 25105 15108 3.78 6.769 10907 45895 6.68 8.774(烟酰胺) 11499738 29882 12.18 9.568 32302 40357 4.04 11.322 10582 118154 10.88 12.003(泛酸钠) 504497 70102 4.35 12.522(盐酸吡哆辛) 1464206 94446 3.02 14.420(硝酸硫胺) 304510 102288 11.06 15.790 48012 99564 7.20 17.793(核黄素磷酸钠) 652945 103732 9.51 19.508 114514 159632 8.24 20.701 1114 102001 5.25 22.115 25421 138633 5.69 23.455 26571 164026 5.71 综上实验结果，使用中等极性色谱柱 CAPCELL PAK C18 MGII S5； 4.6 mm i.d. ×250mm， 严格按照客户提供条件分析，可实现注射用水溶性维生素粉针剂中维生素C钠、烟酰胺、泛酸钠、盐酸吡哆辛、硝酸硫胺、核黄素磷酸钠等各组分及杂质间的良好分离。 客户提供了注射用水溶性维生素粉针剂及对照品（维生素C钠、烟酰胺、泛酸钠、盐酸吡哆辛、硝酸硫胺、核黄素磷酸钠），要求本实验室依据客户所提供方法筛选合适色谱柱，实现粉针剂中各组分物质的良好分离，同时满足方法中对分离度及理论塔板数的要求。首先，依据客户提供的色谱条件，对对照品溶液进行分析。尝试使用不同填料类型的色谱柱进行分析。不同色谱柱的分离选择性不同，最终发现CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱在完全按照客户提供方法的前提下能够得到最佳分离结果，对照品溶液中各组分均能够得到良好分离（如图1），分离度均在3.0以上，满足客户1.5要求；理论塔板数按核黄素计为103983，满足客户大于15000的要求。