牛肉中氨苯砜检测方案(液相色谱仪)

使用 Agilent Bond Elut SPE 和LC/MS/MS测定牛肉中的氨苯砜 应用简报 食品检测和农业 作者 前言 Andy Zhai安捷伦科技(上海)有限公司 本文使用简单易用的 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取技术对牛肉样品进行前处理，然后采用结合 Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统的 Agilent Poroshell 120 液相色谱柱进行高效分离和高灵敏度检度，实现 ppb 级浓度的氨苯砜分析。 Yu Yang 第二军医大学 上海 材料与方法 高效液相色谱条件 色谱柱： Agilent Poroshell 120 SB-C18， 2.1 × 100 mm， 2.7 pm (部件号685775-902) 洗脱液： A) 0.1%甲酸水溶液，B)乙腈 进样量： 10pL 流速： 0.3 mL/min 梯度： 15%B， 8 min内线性变化至80%B 温度： 室温 样品瓶： 安捷伦认证样品瓶(部件号5183-2072) 系统： Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统 质谱条件 电离模式： ESI+安捷伦喷射流 气体温度： 325°C 气体流速： 10 L/min 雾化器压力： 50 psi 鞘气温度： 400 °C 鞘气流量： 12 L/min 毛细管电压： 4，500 V(ESI+) 喷嘴电压： 0V(ESI+) 系统： Agilent 6460 三重四极杆液联联用系统 本研究中分析氨苯砜优化的 MRM 离子对、碎裂电压和碰撞能量见表1. 表1.MRM 离子对和其他氨苯砜分析条件 化合物 母离子 子离子 碎裂电压 碰撞能量 极性 氨苯砜 249.1 125 24 正 249.1 125 20 正 样品前处理 首先对样品进行预处理，称取2g磨碎的牛肉置于50mL离心管，添加10mL乙腈。将离心管强力涡旋 2 min。试管中加入正己烷(5mL)， 涡旋1 min。然后，将试管在4°℃下以 5000 rpm 的速度离心5 min。丢弃所有上清液。将乙腈层转移至另一试管，添加10mL浓度为1M的盐酸水溶液。然后将试管涡旋1 min， 用于固相萃取。 图1为样品提取步骤。先后采用3mL甲醇和3mL水预处理 AgilentBond Elut Plexa PCX 小柱 (60 mg， 3mL，部件号12108603)。提取物(相当于2g样品)以1 mL/min 的速度通过小柱。当样品全部通过小柱后，用5 mL 0.1 mol/L盐酸水溶液和5mL甲醇淋洗小柱。小柱在负压(低于2.0kPa)下干燥5 min。使用5mL25%氢氧化铵的乙腈溶液对样品进行洗脱。收集洗脱液并在40°℃以下使用氮气吹干。用15%甲醇水溶液 (v：v) 溶解样品残渣并定容到1.0mL， 经 0.2 pm 滤膜 (Agilent Captiva Polyethersulfone，部件号5190-5096)过滤，然后采用 LC/MS/MS 进行分析。 图1.牛肉样品的 SPE 流程 结果与讨论 线性和检测限 将混合工作溶液加标至空白基质中，制得用于创建外标校准曲线的溶液(0.25pg/kg、0.5 pg/kg、 1 ug/kg、2pg/kg 和5pg/kg)。牛肉经过整个流程(包括预处理和SPE步骤)，得到空白基质。将各种化合物信噪比高于3：1时的浓度作为检测限 (LOD)。校准曲线和 LOD 的结果列在表2中。 表2.牛肉中氨苯砜的线性和检测限 化合物 回归方程 R² 牛肉中的检测限(ug/kg) 氨苯砜 y=5985.61x-3.53 0.9998 0.02 回收率与重现性 测定高低不同浓度度别氨苯砜的回收率(表3)。通过比较 SPE提取前加加样品的 MRM 峰面积和 SPE 提取后的加标样品(后加标) MRM 峰面积计算回收率。图2所示为低浓度氨苯砜加标于空白牛肉样品分析所得的色谱图。图3为空白样品。 表3.牛肉中氨苯砜的 SPE 提取回收率 化合物 n=6， 0.5 pg/kg n = 6， 1 pg/kg n = 6， 2 pg/kg 氨苯砜 88.9(9.7) 96.5(5.7) 92.8(3.8) 图2.牛肉样品中加标1pg/kg 氨苯砜所得的分析色谱图 图3.牛肉空白样品中氨苯砜的色谱图 结论 使用 Agilent Bond Elut Plexa PCX SPE 分析牛肉中的氨苯砜具有良好的回收率和重现性。Bond Elut Plexa SPE 联用 LC/MS/MS分析，可实现肉类样品中 ppb 级浓度以下氨苯砜的高灵敏度定量分析。 更多信息 www.agilent.com/chem/cn 这些数据仅代表典型的结果。有关我们的产品与服务的详细信息，请访问我们的网站 www.agilent.com/chem/cn 安捷伦不对本文可能存在的错误或由于提供、展示或使用本文所造成的间接损失承担任何责任。 本资料中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 C 安捷伦科技(中国)有限公司，2014 2014年6月6日，中国印刷 5991-4790CHCN Agilent Technologies Agilent Technologies 前言本文使用简单易用的Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取技术对牛肉样品进行前处理，然后采用结合Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统的Agilent Poroshell 120 液相色谱柱进行高效分离和高灵敏度检测，实现ppb 级浓度的氨苯砜分析。结论使用Agilent Bond Elut Plexa PCX SPE 分析牛肉中的氨苯砜具有良好的回收率和重现性。Bond Elut Plexa SPE 联用LC/MS/MS 分析，可实现肉类样品中ppb 级浓度以下氨苯砜的高灵敏度定量分析。