细辛中脂素检测方案(液相色谱仪)

细辛 (Asari Radix Et Rhizoma)中细辛脂素的测定 使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18，1.9 um色谱柱 应用简报制药 作者 摘要 Rongjie Fu安捷伦科技(上海)有限公司 同时采用亚 2 pm Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 色谱柱和传统5 pm 色普柱分析细辛(Asari Radix Et Rhizoma)中的活性化合物细辛脂素。亚 2 pm色谱柱提高了分离度，并缩短了分析时间。 前言 为控制中药 (TCM)的质量，需要使用中国药典 (CHP)中规定的 HPLC 方法测定其中主要化合物的含量。细辛脂素是中药细辛中的活性化合物，根据 CHP的规定，该化合物需要通过采用传统色谱柱的 HPLC 方法进行测定[1]。 与相同尺寸的全多孔颗粒填料相比，表面多孔颗粒填料液相色谱柱在不升高压力的前提下柱效更高。新开发的亚2 pm 表面多孔颗粒填料色谱柱具有更高的柱效及更短的分析时间。 我们将 CHP 方法从传统 Agilent ZORBAX Eclipse Plus-C18， 4.6×250 mm，5 pm 色谱柱转移到 InfinityLab Poroshell 120 EC-C18， 2.1×100 mm， 1.9 pm和2.1×150 mm， 1.9 pm 色谱柱上。分析结果有所改善，包括更高的分离度和更短的分析时间。 材料与方法 所有试剂和溶剂均为 HPLC 分分析纯级。乙腈购自美国JT Baker。 TCM 细辛和细辛脂素购自中国的制药公司。将细辛脂素溶解在甲醇中，配制成50 pg/mL 的标准溶液。 采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统进行 HPLC 和UHPLC分析，该系统包括： Agilent 1290 Infinity 二元泵 (G4220A) · Agilent 1290 Infinity 自动进样器 (G4226A) Agilent 1290 Infinity 柱温箱(G1316C) Agilent 1290 Infinity 二极管阵列检测器 (DAD)(G4212A) 表1列出了 UHPLC 系统的配置详情。表2列出了液相色谱方法参数。 表2.HPLC/UHPLC方法参数 色谱柱 流动相 流速(mL/min) 梯度 进样量(pL)样品前处理 TCC(C) DAD Agilent InfinityLab Poroshell 120 A) 水 0.42 时间(min) 0.8 称取0.5g细辛粉末，加 40 287 nm， EC-C18， 2.1×100 mm， 1.9 pm B)乙腈 入15mL甲醇。超声萃取 40 Hz (部件号695675-902) 45分钟，然后用 0.2 pm Agilent InfinityLab Poroshell 120 100 过滤器(5190-5277)过滤 EC-C18， 2.1×100 mm， 2.7 um 100 (部件号695775-902) 9 40 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18， 2.1×150 mm， 1.9 pm (部件号693675-902) A)水 B)乙腈 0.42 时间 (min) 1.2 287 nm， 40 Hz 7.8 100 10.8 100 10.95 13.5 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18， A)水 1.0 时间 (min) 10 40 287nm， 4.6×250 mm， 5 um (部件号959990-902) B)乙清 0 10 Hz 100 36.5 100 CHP 规定的方法法般是用传统4.6×250 mm， 5 pm色谱柱测定细辛中的细辛脂素含量。在 Agilent ZORBAXPlus C18， 4.6×250 mm， 5 pm 色谱柱上运行此方法，然后将方法转移到 Agilent InfinityLab Poroshell 120，1.9 pm， 150 mm 和 100 mm 色谱柱上。将线性流速加倍，以达到亚2 pm 色谱柱的最高柱效。根据色谱柱长度和流速调节梯度时间。 图1中的色谱图显示，5 pm 色谱柱为细辛脂素定量分析提供了可接受的分离度。利用 InfinityLab Poroshell120，2.1×100 mm， 1.9 um 色谱柱将分析时间从40分钟缩短至10分钟，同时细辛脂素的分离度略有提升。 通常，定量分析所需的最小分离度是1.5。使用 ZORBAXEclipse Plus-C18， 4.6× 250 mm， 5 pm 和 InfinityLabPoroshell 120 EC-C18，2.1×100 mm， 1.9 pm 色谱柱的两种方法都满足定量分析的要求。但这个分离度对于定量分析还不够高。使用更长的亚 2 pm 色谱柱可达到更高的峰容量和分离度，对关键峰而言更是如此。但是，色谱柱越长，产生的柱压更高。在本次分析析，采用了更长的 InfinityLab Poroshell 120 EC-C18，2.1×150 mm， 1.9 um色谱柱(图1)。细辛脂素的分离度从1.6显著提升到2.9，另一个小峰对的分离度从1.3提高到1.6。压力约为600 bar， 远低于 1300 bar 的柱压上限，这个压力也适用于 Agilent 1290 Infinity 液相色谱仪。更小的1.9 um 表面多孔颗粒填料色谱柱比 2.7 um色谱柱具有更高的柱效和更出色的分离度，如图2所示。 图3表明， 在 InfinityLab Poroshell 120 EC-C18，2.1×150 mm， 1.9 pm 色谱柱上运行的方法更适用于细辛中细辛脂素的定量分析。 图1.使用 Agilent ZORBAX Eclipse Plus-C18， 2.1×100 mm， 1.9 pm、Agilent InfinityLabPoroshell 120 EC-C18，2.1×100 mm， 1.9 pm 和 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18，2.1×150mm， 1.9 um 色谱柱得到的细辛分析色谱图 mAU： 图2.使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18，2.1×100mm， 1.9 pm 和 Agilent InfinityLabPoroshell 120 EC-C18， 2.1×100 mm， 2.7 pm色谱柱得到的细辛分析的色谱图对比 图3.利用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18， 2.1×150 mm， 1.9 pm 色谱柱对细辛中细辛脂素的定量分析结果 结论 亚 2 pm Agilent InfinityLab Poroshell 120 表面多孔颗粒填料色谱柱柱 UHPLC 压力下表现出了卓越性能和快速分析。与短色谱柱相比，长色谱柱可以提供更大的峰容量，从而为目标化合物测量提供足够的分离度。 更多信息 这些数据仅代表典型的结果。有关我们的产品与服务的详细信息，请访问我们的网站 www.agilent.com。 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 仅限研究使用。不可用于诊断目的。 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本资料中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 C安捷伦科技(中国)有限公司，2017 2017年4月10日，中国出版 5991-8013ZHCN Agilent Technologies 摘要同时采用亚 2 μm Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 色谱柱和传统 5 μm 色谱柱分析细辛 (Asari Radix Et Rhizoma) 中的活性化合物细辛脂素。亚 2 μm 色谱柱提高了分离度，并缩短了分析时间。前言为控制中药 (TCM) 的质量，需要使用中国药典 (CHP) 中规定的 HPLC 方法测定其中主要化合物的含量。细辛脂素是中药细辛中的活性化合物，根据 CHP 的规定，该化合物需要通过采用传统色谱柱的 HPLC 方法进行测定。与相同尺寸的全多孔颗粒填料相比，表面多孔颗粒填料液相色谱柱在不升高压力的前提下柱效更高。新开发的亚 2 μm 表面多孔颗粒填料色谱柱具有更高的柱效及更短的分析时间。我们将 CHP 方法从传统 Agilent ZORBAX Eclipse Plus-C18, 4.6 × 250 mm, 5 μm 色谱柱转移到 InfinityLab Poroshell 120 EC-C18, 2.1 × 100 mm, 1.9 μm 和 2.1 × 150 mm, 1.9 μm 色谱柱上。分析结果有所改善，包括更高的分离度和更短的分析时间。结论亚 2 μm Agilent InfinityLab Poroshell 120 表面多孔颗粒填料色谱柱在 UHPLC 压力下表现出了卓越性能和快速分析。与短色谱柱相比，长色谱柱可以提供更大的峰容量，从而为目标化合物测量提供足够的分离度。