降钙素中氨基酸检测方案(氨基酸分析仪)

LC Application Sheet生物药品肽制剂降钙素的氨基酸组成分析 Hitachi High-Tech 降钙素是由32个氨基酸组成的分子量为3432的多肽。作为此类肽制剂的一种品质评价方法，可以进行氨基酸组成鉴别。此次，使用日立LA8080氨基酸分析仪，以日本药典(*)规定的分析方法(使用3m的色谱柱)测定降钙素的氨基酸组成。本次试验所用降钙素为市售药品。 (*)： 日本药典第16版(2011年4月1日起执行) 【降钙素的结构式】 【日立LA8080氨基酸分析仪】 ■材龙标准样品测定例(系统适用性的确认) 【氨基酸标准溶液测定例(各2nmol/10uL)】 (色谱图中标记的Cys表示胱氨酸(半胱氨酸的二聚体)) 系统适用性项目 规定值 测定结果 系统性能 氨基酸洗脱顺序 依序为天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸 如左侧所示 分离度(苏氨酸-丝氨酸) 1.2以上 1.79 分离度(甘氨酸-丙氨酒) 1.0以上 1.68 分离度(异亮氨酸-亮氨酸) 1.2以上 1.59 系统的重现性 天冬氨酸、脯氨酸、缬氨酸、精氨酸的各峰面积的相对标准偏差(n=3) 均在2.0%以下 0.23%、0.63%0.13%、0.30% 【系统适用性】 洗脱顺序、分离度、面积值的相对标准偏差均得到了完全符合规定值的结果。 @沙Hitachi High-Technologies Corporation ■降钙素测定例(组成氨基酸的鉴别) 【降钙素测定例】 (色谱图中标记的Cys表示胱氨酸(半胱氨酸的二聚体)) 成分名称 规定值 (相对于Leu的摩尔比) 测定结果 天冬氨酸 (Asp/D) 1.9~2.1 2.0 苏氨酸(Thr/T) 4.5~4.9 4.9 丝氨酸 (Ser/S) 3.2~3.8 3.7 谷氨酸 (Glu/E) 2.8~3.1 3.1 甘氨酸 (Gly/G) 2.7~3.3 3.0 1/2 胱氨酸 (Cys/C) 1.5~2.5 1.9 缬氨酸 (Val/V) 0.9~1.0 1.0 亮氨酸 (Leu/L) 定为5 定为5 酪氨酸(Tyr/Y) 0.8~1.0 1.0 赖氨酸 (Lys/K) 1.9~2.3 2.0 组氨酸 (His/H) 0.8~1.1 1.0 精氨酸 (Arg/R) 0.9~1.1 1.0 氨酸 (Pro/P) 1.9~2.4 2.3 <肽含量> 项目 规定值 测定结果 肽含量 80%以上 87.9% 加热 110℃、24 hr 真空干燥 使用5mL 0.02 mol/L 的盐酸溶解 过滤 孔径0.2pm 测定样品(10uL) 其他氨基酸相对亮氨酸(Leu)的摩尔比均在规定值的范围内，得到了良好的结果。 肽含量也得到了符合规定值的结果。 ( 注意：本资料所示数据仅为测定例用数据而非可保证 仪 器性能的数据。 ) Page. Page.Hitachi High-Technologies Corporation 降钙素是由32个氨基酸组成的分子量为3432的多肽。作为此类肽制剂的一种品质评价方法,可以进行氨基酸组成鉴别。此次，使用日立LA8080氨基酸分析仪，以日本药典(*)规定的分析方法(使用3μm的色谱柱)测定降钙素的氨基酸组成。本次试验所用降钙素为市售药品。