婴幼儿配方乳粉中α-乳白蛋白检测方案(液相色谱柱)

采用 TSKgel 色谱柱参考 DBS 32/011-2016 婴幼儿配方乳粉中α-乳白蛋白的测定 α-乳白蛋白 α-Lactalbumin 【基本信息】 α-乳白蛋白(a-La， a-Lactalbumin)广泛存在于哺乳动物(牛、山羊、骆驼、马、荷兰猪、兔等)和人的乳汁中，是由乳腺腺泡上皮合成的特殊蛋白质。 【样品预处理】 根据样品的蛋白质含量，称取含有 10 mg 蛋白质的乳粉样品(精确到0.1 mg)， 置于10 mL刻度试管中，加入8mL流动相，使样品完全溶解，如需超声应保持样品温度不高于30℃，转移至 10 mL 容量瓶，用流动相定容至刻度。取 1.5 mL 该溶液转移到具塞玻璃瓶中，加入10uL 2-巯基乙醇，旋紧瓶盖，剧烈振荡 10 s， 置于室温下2h后再进行仪器分析。制备好的样品应在48h 内测定。注3：2-巯基乙醇有毒，应在通风橱中进行操作。 【溶液配制】 准确称取25 mg(精确到0.1mg) α-乳白蛋白标准品和25 mg(精确到0.1mg)β-乳球蛋白标准品， 置于10 mL容量瓶，用水充分溶解后定容，作为α-乳白蛋白和β-乳球蛋白混合标准储备液，浓度为2.5 mg/mL。分别移取混合标准昆备液0.05 mL、0.1 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL至10mL容量瓶中，用流动相溶解并定容至刻度，配成浓度为0.0125、0.025、0.125、0.25、0.5mg/mL的标准工作溶液。标准工作溶液应现用现配。分别加入10 pL 2-巯基乙醇，旋紧瓶盖，居烈振荡10s， 置于室温下2h后再进行仪器分析。制备好的样品应在48h内测定。 注2：标准溶液中加入β-乳球蛋白是为确保β-乳球蛋白和α-乳白蛋白达到基线分离。 缓冲溶液配制：称取56.6g磷酸氢二钠、3.5g磷酸二氢钠和2.9 g乙二胺四乙酸，将其溶解到800 mL水中，测量pH， 如有必要，用50%氢氧化钠或36%盐酸将 pH调节到7.5±0.1。将溶液转移至1000mL容量瓶，用水定容至1000mL。 流动相溶液A配制：称取573g盐酸胍，置于1000 mL广口锥形瓶中，添加100 mL 缓冲溶液，再用水将该溶液稀释到约900 mL， 同时不停搅拌，用50%氢氧化钠溶液，将 pH调节到7.5±0.1。将溶液转移至1000 mL 容量瓶中，并用水定容至刻度。过 0.45 um 滤膜过滤。 【分析条件】 色谱柱： GuardSWxL (6.0 mmI.D.x4 cm)+TSKgel G3000SWxL>2(7.8 mmI.D.x30 cm×2，5 um)流动相：流动相溶液A 流速：0.5 mL/min 紫外：280nm 进样体积： 50 uL 分析结果 图10-乳白蛋白及β-乳球蛋白标准溶液色谱图 结论 采用 GuardSWxL(6.0mmI.D.x4 cm)+ TSKgel G3000SWxL>2(7.8 mmI.D.×30 cm×2，5 um)，可实现婴幼儿配方乳粉中α-乳白蛋白分离检测和定量分析。 ( 参考文献： ) DBS 32/011-2016婴幼儿配方乳粉中α-乳白蛋白的测定 参照食品安全地方标准DBS 32/011-2016，采用GuardSWXL（6.0 mmI.D.X4cm）+ TSKgel G3000SWXL X 2（7.8 mmI.D.X30cm X2，5 μm），可实现婴幼儿配方乳粉中α-乳白蛋白的分离检测和定量分析。