复合维生素注射液中维生素B1、维生素B6及烟酰胺检测方案(液相色谱柱)

BP 2015方法复合维生素注射液的定量分析(1) -维生素B1、维生素B6及烟酰胺的分析 复合维生素注射液 用于营养不良及因缺乏维生素B类所引起疾患的辅助治疗，如厌食、脚气病、糙皮病等。 维生素 B1又称硫胺素，是碳水化合物代谢所需辅酶的重要组成成分。 维生素B6为多种酶的辅基，参与氨基酸及脂肪的代谢。 烟酰胺为辅酶Ⅰ及Ⅱ的组分，为脂质代谢、组织呼吸的氧化作用和糖原分解所必需。 右泛醇 (D-泛醇)又称原维生素B5，进入人体内能转化为泛酸，进而合成辅酶A，促进人体蛋白质、脂肪、糖类的代谢，保护皮肤和粘膜，改善毛发光泽，防止疾病的发生。 (以上列出组分为配方中部分成分，本数据仅介绍前三种化合物的分析，下期将介绍右泛醇的分析数据) 客户提供了复合维生素注射液样品及维生素B1、维生素B6和烟酰胺对照品溶液，并反馈在现有条件下使用 C18柱对注射液中维生素B1、维生素B6和烟酰胺进行定量分析时，烟酰胺出现杂质干扰，无法准确定量。客户希望本实验室参考 BP2015 英国药典方法，筛选合适的色谱柱对复合维生素注射液中的维生素B1、维生素B6和烟酰胺进行定量分析。 维生素B1 Thiamine chlorideM.W.：300.81 依据 BP 2015方法，流动相中添加了二乙胺和庚烷磺酸钠，本实验室分别尝试了中等极性的 CAPCELLPAK C18 MGII、高极性的CAPCELL PAK C18 AQ、高碳载量的 SUPERIOREX ODS以及低极性的CAPCELLPAK C18 UG120色谱柱分别对注射液样品进行分析。 如图1，对几款柱子分析所得结果对比后发现，能在纯水相条件下稳定使用的高极性色谱柱 CAPCELL PAK C18 AQ 所得分离效果最佳，其中，烟酰胺与前后杂质分离度在0.9以上，满足 BP方法中不低于0.8的分离度要求。 图1CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱分析所得结果 注：峰上标数字为分离度，下同。 HPLC Conditions： 色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5； 4.6 mm i.d.×250mm (柱号：A6AD 03113) 流动相： 溶液A*/甲醇/乙腈=800/100/100 流速： 1.2mL/min 柱温： 30°C 进样量： 20 pL 样注射液用0.45 pm滤膜过滤 检 PDA280nm *溶液A： 15mL冰醋酸， 2.5mL二乙胺和1.1g庚烷磺酸钠溶解至1000 mL 水中。 就该结果与客户沟通，客户希望对液相条件进行适当调整，在满足英国药典要求的基础上，进一步实现烟酰胺与其前后杂质之间的基线分离。 首先，我们考察柱温对分离的影响——分别在30℃、35℃、40℃柱温条件下考察分离效果，发现仍在原条件，即30℃条件下分离效果最佳；进一步，尝试调整流动相中有机相的比例，将原条件中各10%的甲醇和乙腈均降低至6%，如图2，烟酰胺与其先后杂质峰之间分离度均在1.70以上，能够得得基线分离的良好结果。 图2 CAPCELL PAK C18 AQ 色谱柱分析所得结果(调整条件) 图3 CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱分析所得结果(调整条件)局部放大图 HPLC Conditions： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5；4.6 mm i.d. ×250 mm (柱号： A6AD 03113) 流动相： 溶液A*/甲醇/乙腈=880/60/60 速： 1.2mL/min 柱温： 30°C 进样量： 20 pL 注射液用0.45 pm 滤膜过滤 PDA 280nm *溶液 A： 15mL冰醋酸，2.5mL二乙胺和1.1g庚烷磺酸钠溶解至1000 mL 水中。 综上实验结果，使用能在纯水相条件下稳定使用的高极性色谱柱 CAPCELL PAK C18 AQ S5； 4.6 mmi.d.×250 mm，依据BP 2015英国药典方法，通过调整流动相中有机相比例，能够实现复合维生素注射液中维生素B1、维生素B6和烟酰胺及杂质的良好分离及准确定量分析。 三耀精细化工品销售(中国)有限公司技术开发部 地址：北京经济技术开发区宏达南路5号宏达达德工业园1栋418室 邮编：100176 大阪曹達集团耀精细化工品销售(北京)有限公司 复合维生素注射液 用于营养不良及因缺乏维生素B类所引起疾患的辅助治疗，如厌食、脚气病、糙皮病等。 维生素B1又称硫胺素，是碳水化合物代谢所需辅酶的重要组成成分。维生素B6为多种酶的辅基，参与氨基酸及脂肪的代谢。烟酰胺为辅酶Ⅰ及Ⅱ的组分，为脂质代谢、组织呼吸的氧化作用和糖原分解所必需。右泛醇（D-泛醇）又称原维生素B5，进入人体内能转化为泛酸，进而合成辅酶A，促进人体蛋白质、脂肪、糖类的代谢，保护皮肤和粘膜，改善毛发光泽，防止疾病的发生。客户提供了复合维生素注射液样品及维生素B1、维生素B6和烟酰胺对照品溶液，并反馈在现有条件下使用C18柱对注射液中维生素B1、维生素B6和烟酰胺进行定量分析时，烟酰胺出现杂质干扰，无法准确定量。客户希望本实验室参考BP 2015英国药典方法，筛选合适的色谱柱对复合维生素注射液中的维生素B1、维生素B6和烟酰胺进行定量分析。使用能在纯水相条件下稳定使用的高极性色谱柱CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm，依据BP 2015英国药典方法，通过调整流动相中有机相比例，能够实现复合维生素注射液中维生素B1、维生素B6和烟酰胺及杂质的良好分离及准确定量分析。