猪肉中安眠酮、地西泮检测方案(气质联用仪)

SSL-CA14-517 Excellence in ScienceGCMS-250 上海市徐汇区宜州路180号华鑫天地二期C801栋 咨询电话：021-34193996http：//www.shimadzu.com.cn GCMS 法检测猪肉中安眠酮和地西泮的含量 GCMS-250 摘要：使用岛津GCMS-QP2020气质联用仪，建立了猪肉中安眠酮和地西泮含量的分析方法。结果表明，在0.5~100ng/mL 浓度范围内线性良好，线性相关系数R²均在0.9999 以上。对5 ng/mL 的标准溶液连续6针进样，峰面积的相对标准偏差小于4%。安眠酮和地西泮的最低检出限分别为0.04和0.05 ng/mL。加标浓度为1， 10和50 ug/kg时，平行试验3次，猪肉中安眠酮和地西泮的回收率在 70.8~115.1%之间，该方法前处理简单、灵敏度高，满足动物性食品中安眠酮和地西泮含量检测的要求。 镇静剂是指对中枢神经系统有抑制作用，可起到减轻或消除动物狂躁不安，使其恢复安静的一类药物。个别牲畜饲养者因经济利益的驱使，在畜禽饲养过程中添加此类药物以达到牲畜镇静催眠增重催肥，缩短出栏时间的目的。但镇静剂在动物源性食品中残留，会对人体中枢神经系统等造成不良影响，因此许多国家将此类药物列为禁用药物。2002年我国农业部235号公告规定地西泮允许作治疗用，但不得在动物性食品中检出；安眠酮禁止使用，并在动物性食品中不得检出。 目前，国内外报道的镇静剂类药物残留的检测方法 实验部分 1.1仪器 GCMS-QP2020气质联用仪 1.2分析条件 色谱柱： SH-Rxi-5Sil MS(30 mx0.25 mm ×0.25 pum) 进样口温度：290℃ 进样方式：不分流(1 min) 高压进样：200kPa 进样量：：1pL 载气：氦气 主要有酶联免疫法(ELISA)、液相色谱法、气相色谱质谱法和液相色谱串联质谱法。其中 ELISA 方法结果需要其他方法进行确证， LC法灵敏度较低，无法满足对禁用药物检测的要求， LC-MS/MS 仪器成本太高。而GCMS具有灵敏度高，准确性好等特点，可进行多残留定性定量检测。 本文使用乙腈提取猪肉中残留的地西泮和安眠酮，正己烷除脂，采用 C18固相萃取小柱净化后，气相色谱质谱测定。方法操作简便快捷，灵敏度高，准确性好，适用于猪肉中地西泮和安眠酮的残留检测。 表1：1安眠酮及地西泮保留时间及SIM参数 No. 化合物 CAS号 保留时间(min) 定量离子 定性离子 1 安眠酮 72-44-6 11.363 235.1 283.1、221.1、241.0 2 地西泮 439-14-5 13.833 256.0 91.1、217.1、250.1 1.3标准溶液配置 精密称尔安眠酮和地西泮标准品各10 mg于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成浓度为 1 mg/mL 安眠酮和地西泮标准储备液，-20℃以下保存。采用逐级稀释法分别配制浓度为0.5、1、5、10、50和100ng/mL 的混合标准溶液用于标准曲线制作。 1.4样品前处理 称取样品2.0g于离心管中，加乙腈20 mL，水浴超声5 min， 4000 r/min 离心 10 min， 取上清液于鸡心瓶中，于50℃旋蒸至近5mL， 加正己烷7.5 mL， 混匀静置，弃上层液。取下层液，于50℃氮气吹至1mL，加水4mL，混匀备用。 C18柱依次用甲醇3mL和水3mL活化，取备用液过柱，用50%甲醇水溶液3mL洗涤，用70%甲醇水溶液3mL 洗脱，收集洗脱液，于50℃氮气吹干，用乙腈200 uL 溶解残余物，供气相色谱-质谱分析。 结果与讨论 2.1标准溶液色谱图 100 ng/mL 的安眠酮和地西泮标准溶液 SIM图如图1所示。 图11100 ng/mL安眠酮和地西泮标样的SIM图 2.2标准曲线 用甲醇分别配制浓度农0.5、1、5、10、50和100 ng/mL 安眠酮和地西泮混合标准溶液，以浓度作为横坐标，峰面积作为纵坐标，绘制标准曲线，外标法定量。其标准曲线的方程、相关系数r²见表2。 图2安眠酮和地西泮的标准曲线 表2安眠酮和地西西的线性方程、相关系数及最低检出限(LOD) No. 化合物名称 线性方程 相关系数r LOD (ng/mL) 1 安眠酮 Y=9059.597X+5791.351 0.9999 0.04 2 地西 Y=2270.55X+457.0838 0.9999 0.05 2.3检出限、定量限 配制浓度为 1 ng/mL 的混合标样进样分析，根据 S/N=3 和10定义其检出限和定量限，安眠酮和地西泮的检出限分别为0.04和0.05 ng/mL，定量限分别为0.15和0.17 ng/mL。 2.4重复性实验 配制浓度为 5 ng/mL 的混合标液，平行测试6次。安眠酮和地西泮保留时间和峰面积的相对标准偏差分别<0.01%和4%(见下图3)，仪器精密度良好。 Data Filename Ret.Time Area Height 1 rep-5ppb-6.qg 13.832 8，716 4，971 2 rep-5ppb-5.qg 13.833 9，047 5，027 3 rep-5ppb-4.qg 13.832 8，777 5，103 4 rep-5ppb-3.qg 13.833 8，913 4.949 5 rep-5ppb-2.qg 13.833 9，392 5，331 6 rep-5ppb-1.qg 13.835 9.587 5，490 Average 13.833 9，072 5.145 %RSD 0.007919 3.841588 4.240380 图3安眠酮(1)和地西泮(2)的重复性实验结果 2.5回收率结果 在猪肉样品中加标，加标浓度为1、10及 50 ug/kg， 每个浓度平行处理三份，根据1.4所述方法进行前处理后进样，计算回收率。安眠酮的回收率在 70.8~96.1%之间，地西泮的回收率在 93.2~115.1% 之间。 表4安眠酮和地西泮的回收率结果 No 化合物 回收率% 加标1 ug/kg 加标 10 ug/kg 加标 50 ug/kg 安眠酮 96.1 70.8 83.8 2 地西泮 93.2 98.9 115.1 2.6实际样品检测 按照1.4中样品制备方法处理市场中购买的猪肉，平行测定2次，该猪肉样品中未检测出安眠酮和地西泮。 结论 使用岛津公司 GCMS-QP2020气质联用仪，建立了猪肉中安眠酮和地西泮含量的分析方法。该方法前处理操作简单，重复性好，灵敏度高。在0.5~100 ug/L 浓度范围内线性良好，相关系数R²均在 0.9999 以上。安眠酮和地西泮的最低检出限分别为 0.04和0.05 ng/mL；加标浓度为1.0~50 pg/kg时，两者的回收率在 70.8~115%之间。该方法满足猪肉中安眠酮和地西泮残留的的日常检测要求。 岛津全球应用技术开发支持中心 使用岛津GCMS-QP2020气质联用仪，建立了猪肉中安眠酮和地西泮含量的分析方法。结果表明，在0.5~100 ng/mL浓度范围内线性良好，线性相关系数R2均在0.9999以上。对5 ng/mL的标准溶液连续6针进样，峰面积的相对标准偏差小于4%。安眠酮和地西泮的最低检出限分别为0.04和0.05 ng/mL。加标浓度为1, 10和50 μg/kg时，平行试验3次，猪肉中安眠酮和地西泮的回收率在70.8~115.1%之间，该方法前处理简单、灵敏度高，满足动物性食品中安眠酮和地西泮含量检测的要求。