注射用水溶性维生素中维生素B12检测方案(液相色谱柱)

注射用水溶性维生素的分析(3) -维生素B12 客户提供了注射用水溶性维生素粉针剂及维生素B12对照品，要求本实验室依据客户所提供方法选择合适色谱柱，实现粉针剂供供品溶液中维生素B12主峰同其相邻杂质峰的良好分离，进而达到准确定量的目的。 结合客户所提供的分析方法，由于流动相为高水系流动相条件，我们直接尝试能够在100%的水系流动相下使用的高极性AQ色谱柱，分析对照品溶液及粉针剂供试品溶液。分析对照品溶液，维生素B12主峰保留时间为7.25 min， 能够得到良好保留和峰形；分析供试品溶液，维生素 B12主峰同其前后相邻杂质均能够得到良好分离，分离度分别为1.80和11.02，满足方法中1.0的分离度要求(如图1)。 图1 CAPCELL PAK C18 AQ分析对照品及供试品溶液结果 注：峰上所标数字为分离度， 下同。 HPLC Conditions ： ( 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5； 4.6 mm i.d.×250 mm (A6AD 04261) ) 流动相： A：磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钾0.87 g， 磷酸二氢钾0.41 g， 加水溶解后，加乙腈125mL，加水稀释至1000mL， 磷酸调整 pH至3.0)B：水/乙乙/磷酸=499/499/2B% 0%(0min)-> 0%(13min)-> 100%(13.1min)-> 100%(28min)->0%(28.1min)->0%(38min)流速1.2 mL/min (0-13min)-> 1.5mL/min (13-28min)-> 1.2mL/min (28-38min)温度检测样品 40°C PDA360 nm ( 对照品溶液：1 取维生素B12对照品 25 mg 于 250mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精 密量取1 mL于100 mL 容量瓶中加水稀释至刻度，摇匀即得。 ) 供试品溶液：取粉针剂5瓶，加水溶解后移置 25mL容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀。 进样量： 30 uL 为使客户有更多的色谱柱选择，尝试使用中等极性的 CAPCELL PAK C18 MGII 色谱柱进行分析，也可实现供试品溶液中维生素B12及其前后杂质间的良好分离，分离度均在1.0以上，仍满足方法中1.0以上的分离度要求(见图2)。 Minutes 图2CAPCELL PAK C18 MGII分析对照品及供试品溶液结果 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 MGII S5； 4.6 mm i.d. ×250 mm (A4AD 11407) 流动相： A： 磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钾 0.87g，磷酸二氢钾0.41g，加水溶解后，加乙腈125mL，加水稀释至1000mL， 磷酸调整pH至3.0) 沉速1.2 mL/min (0-13min)->1.5mL/min (13-28min)->1.2mL/min (28-38min)温度检测样品 40°C PDA 360 nm 对照品溶液：取维生素B12对照品 25 mg 于250mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL于 100mL 容量瓶中加水稀释至刻度，摇匀即得。 供试品溶液：取粉针剂5瓶，加水溶解后移置25mL容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀。 进样量： 30 pL 综上实验结果，在客户提供的色谱条件下，使用高极性色谱柱 CAPCELL PAK C18 AQS5； 4.6 mm i.d. ×250 mm(A6AD 04261)色谱柱及中等极性色谱柱 CAPCELL PAK C18MGII S5； 4.6 mm i.d.×250 mm (A4AD 11407) 均能满足注射用水溶性维生素中维生素 B12及其相邻杂质峰之间的分离要求，相较之下， AQ柱的分离效果更佳。 注射用水溶性维生素的分析（3）——维生素B12 客户提供了注射用水溶性维生素粉针剂及维生素B12对照品，要求本实验室依据客户所提供方法选择合适色谱柱，实现粉针剂供试品溶液中维生素B12主峰同其相邻杂质峰的良好分离，进而达到准确定量的目的。在客户提供的色谱条件下，使用高极性色谱柱CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm（A6AD 04261）色谱柱及中等极性色谱柱CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm  i.d. × 250 mm（A4AD 11407）均能满足注射用水溶性维生素中维生素B12及其相邻杂质峰之间的分离要求，相较之下，AQ柱的分离效果更佳。