食用油中多环芳烃检测方案(液相色谱仪)

ThermoSCIENTIFIC 双三元液相色谱-在线固相萃取在食品饮料中的应用 DGLC-F-A01 在线固相萃取-高效液相色谱-荧光检测法测定食用油中多环芳烃 关键词：在线固相萃取；高效液相色谱法；；荧光检测器；食用油；；多环芳烃 DGLC-F-A01 Determination of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons(PAHs) in Edible Oils by HPLC-Fluorescence detection with onlinesolid-phase extraction Key words： online solid-phase extraction； HPLC； Fluorescence detector； edible oil； PAHs 引言 多环芳烃类化合物(PAHs)是强烈的致癌物质，而食用油在其制造过程中会产生一定的多环芳烃类物质。因为苯并芘(benzo[a]pyrene) 是多环芳烃中具有代表性的化合物，欧盟规定了食用油中的苯并芘含量不得高于2.0ug/Kg"。 多环芳烃质类化合合的测定，通常使用高效液相色谱法 (HPLC)分离，采用紫外检测器2、荧光检测器34、电化学检测器以及质谱测定，经氧化反应后，还可采用LC-MS/MS进行检测，因常规方法中样品前处理采用离线固相萃取，手工操作繁琐，使其重现性受到影响。虽然已经有文献报道了在线固相萃取法分析多环芳烃类化合物，但装置极其复杂。本方法利用双三元液相系统，一套系统即可实现在线富集，大大加快了试验过程，操作简单，灵敏度高，试验成本低。 测试条件 仪器： Ultimate DGP 3600系列，包括有带在线脱气单元的双三元梯度泵；带有两个六通阀的柱温箱；荧光检测器；自动进样器。连接图见图1。 分析柱：2根SUPELCOSILTM LC-PAH (5um，4.6 mm×250mm) 富集柱： ChromSpher Pi (3.0 mm×80 mm) 柱温：40℃；柱温：30℃ 自动进样器温度：40℃ 进样量：80uL 淋洗液组成、流速及淋洗梯度条件：见表1。检测波长：见表2。 图1-1.样品富集时连接图 图1-2.冲洗富集时连接图 图1-3.分析时连接图 表1系统梯度淋洗条件 时间(min) 左泵 A-水；B-乙腈； C-异丙醇 leftvalve 右泵 A-乙腈；B-异丙醇 rightvalve 流速(mL/min) A% B% C% 流速(mL/min) A% B% 0.00 0.35 0 0 100 61 0.4 20 80 12 12.00 0.35 0 0 100 12.10 0.35 20 80 0 61 14.50 12 14.60 0.4 20 80 16.00 1.0 20 80 17.00 61 20.90 0.35 20 80 0 20.91 0.35 0 100 0 30.00 1.0 0 100 50.90 0.35 0 100 0 51.50 0.35 0 0 100 58.00 1.0 0 100 58.10 1.0 20 80 61.50 12 65.00 1.0 20 80 65.50 0.4 20 80 66.50 0.35 0 0 100 70.00 0.4 20 80 表2检测波长 时间(min) 激发波长(nm) 发射波长(nm) 0.00 256 370 27.05 256 390 29.50 240 420 33.50 270 385 37.50 290 430 51.50 305 480 53.50 290 430 样品前处理方法 将食用油试样过0.45 um滤膜，移取40uL0.25ug/mL苯并(b)屈内标物至10g食用油试样中，混匀待测。 结果和讨论方法的重现性 在橄榄油样品加加美国EPA610方法所列出的12种多环芳烃类化合物标准对照品，连续进样7次，保留时间的RSD在0.03%~0.08%之间，色谱峰面积的RSD在4.1%~6.7%之间。 线性、检出限 在上述色谱条件下进行试验，各PAHs的线性、检出限数据见表3。 表3 PAHs线性、检出限 分析物 线性范围(ug/kg) 内标浓度(ug/kg) 线性系数 检出限(pg/L) 菲 1~20 1 0.9952 0.42 蒽 1~20 1 0.9910 0.26 荧蒽 1~20 1 0.9808 1.19 芘 1~20 1 0.9905 0.69 苯并(a)蒽 1~20 1 0.9852 0.68 屈 1~20 1 0.9864 0.34 苯并(b)荧蒽 1~20 1 0.9907 0.21 苯并(k)荧蒽 1~20 1 0.9907 0.39 苯并(a)芘 1~20 1 0.9911 0.75 二苯并(a，h)蒽 1~20 1 0.9914 0.41 苯并(g，h，i)二萘嵌苯 1~20 1 0.9920 0.58 茚苯(1，2，3-cd)芘 1~20 1 0.9941 0.59 注：a——t检测估算MDL，置信度为99%时， MDL等于一定浓度的标准溶液(2ug/kg)重复测定7次的峰面积标准偏差S与对于的t值。 实际样品的分析 选取橄榄油、芝麻油进行试验，并用橄榄油进行加标回收试验，试验表明，多环芳烃的加标回收率在70%~131%。 25267 图2.食用油基质标准溶液色谱图(20ug/Kg) 图3.实际样品色谱图 表4食用油中多环芳烃含量的测定及加标回收试验 PAH 橄榄油1# 橄榄油2# 芝麻油 测得值(ug/kg) 标准加入值(ug/kg) 回收率(%) 测得值 (ug/kg) 测得值 (ug/kg) 菲 37 5 120 13.2 52 蒽 4.5 5 109 3.2 6.1 荧蒽 1.0 5 112 未检出 未检出 芘 2.2 5 131 1.3 未检出 苯并(a)蒽 2.8 5 108 2.1 18 屈 4.4 5 110 3.2 5.3 苯并(b)荧蒽 未检出 5 90 未检出 未检出 苯并(k)荧蒽 未检出 5 84 未检出 未检出 苯并(a)芘 2.7 5 106 2.5 3.9 二苯并(a， h)蒽 未检出 5 84 未检出 未检出 苯并(g，h，i)二萘嵌苯 未检出 5 70 未检出 1.2 茚苯(1，2，3-cd)芘 未检出 5 82 未检出 未检出 结论 本方法使用在线固相萃取方法对食用油中多环芳烃进行测定，操作简便，减少手动操作步骤，大大提高了方法的重现性。 ( 参考文献 ) ( [1]. C ommission Regulation (EC) No. 1881/2006 of 19 December 2006， Setting Maximum Levels f or Certain Contaminantsin Foodstuffs.Official Journal of the European Union2006，49， L 364，5 - 2 4 . ) ( [2]. Saravanabhavan， G.； Helferty， A. ； Hodson， P . V.；Brown， R. S. A Multi-Dimensional High Performance L iquidChromatographic M e thod fo r Fingerprinting P o lycyclic Aromatic H y drocarbons and Their Al k yl-Homologs in theHeavy Gas Oil Fraction of Alaskan No r th Slope Crude. J. Chromatogr.， A 2007， 1156 ， 124-133. ) ( [3]. Zuin， V. G.； Montero， L.； B auer， C . ； P o pp， P. S t ir B a r Sorptive Ex t raction an d Hig h -Perfo r mance Liquid Chromatography-Fluorescence Detection for the Determination of Polycyclic A romatic Hydrocarbons in M a te Te a s. J.Chromatogr.， A 2005， 1 091，2-10. ) ( [4]. Pino， V.； Ayala， J. H.； Afonso， A.M.； Gonzalez， V.Determination of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Sea w ater by High-Performance Liquid Chromatography with Fluorescence Detection Following Micelle-Mediated Preconcentration. J.Chromatogr.， A 2002， 949， 291 - 299 ) ( [5]. Bouvrette， P； Hrapovic， S.； M ale， K. B . ； Luong， J. H . Analysis of the 16 Environmental Prot e ction Agency PriorityPolycyclic Aromatic Hydrocarbons by H igh Performance Liquid Chromatography-Oxidized Di a mond Film Electrodes. J.Chromatogr.，A 2006，1103，248- 2 56. ) ( [6]. Itoh， N.； Aoyagi， Y.； Yarita ， T. Optimization of th e Dopant for the Trace Determination of Polycyclic AromaticHydrocarbons by Liquid Chromatography/ Do p ant-Assisted Atmospheric-Pressure Photoionization/Mass Spectrometry. J . Chromatogr.， A 2006， 1 131，285-288. ) ( [7]. Lintelmann， J .； Fischer， K.； Matuschek， G.Determination of Oxygenated Po l ycyclic Ar o matic Hyd r ocarbons inParticulate Matter Using High-Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry. J. Chromatogr.，A 2006，1133，241 - 247. ) · 多环芳烃类化合物（PAHs）是强烈的致癌物质，而食用油在其制造过程中会产生一定的多环芳烃类物质。因为苯并芘（benzo[a]pyrene）是多环芳烃中具有代表性的化合物，欧盟规定了食用油中的苯并芘含量不得高于 .0 μg/Kg[ ]。多环芳烃质类化合物的测定，通常使用高效液相色谱法（HPLC）分离，采用紫外检测器[ ]、荧光检测器[ , ]、电化学检测器[ ]以及质谱[ ]测定，经氧化反应后，还可采用LC-MS/MS[ ]进行检测，因常规方法中样品前处理采用离线固相萃取，手工操作繁琐，使其重现性受到影响。虽然已经有文献报道了在线固相萃取法分析多环芳烃类化合物，但装置极其复杂。本方法利用双三元液相系统，一套系统即可实现在线富集，大大加快了试验过程，操作简单，灵敏度高，试验成本低。