奶粉中三聚氰胺检测方案(液质联用仪)

三重四级杆质谱仪检测奶粉中的三聚氰胺 摘要：本文建立了一种使用岛津三重四级杆质谱仪 LCMS-8030 测定奶粉中三聚氰胺的方法。样品经提取后，用超高效液相色谱 LC-30A 进行分离，：一三重四级杆质谱仪 LCMS-8030 进行定性和定量分析。三聚氰胺在 0.01~0.5 mg/L 浓度范围内线性良好，标准曲线的相关系数为 0.9998； 对 0.01 mg/L、0.1mg/L 和 0.5 mg/L 标准溶液进行精密度实验，连续6次进样保留时间和峰面积相对标准偏差分别在0.64%和4.34%以下，系统精密度良好； 0.01 mg/kg 样品添加回收率测试结果为104.0%；方法定量限为 0.005 mg/kg。 关键词：奶粉，三聚氰胺，，三重四级杆质谱仪 三聚氰胺(melamine )， 简称三胺，学名三氨三嗪，是一种重要的氮杂环有机化工原料，常被用于生产塑料、胶水和阻燃剂。近来屡见新闻报道不法分子将含有三聚氰胺的原料用于乳制品生产。由于三重四级杆质谱仪具有多反应监测(MRM)的扫描模式，能够很好地去除基质干扰，因此能够对微量的三聚氰胺进行定量检测。国标《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》(GB/T 22388-2008)中规定了采用LC-MS/MS法测定乳及乳制品中的三聚氰胺，且该方法的定量限能到0.01 mg/kg。本文使用岛津三重四级杆质谱仪LCMS-8030定量检测了奶粉中三聚氰胺的含量。 图1.三聚氰胺的化学结构式 1.实验部分 1.1仪器 本实验使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A与三重四级杆质谱仪 LCMS-8030 联用系统。具体配置为 LC-30ADx2输液泵， DGU-20As在线脱气 机， SIL-30AC 自动进样器， CTO-30AC 柱温箱，CBM-20A 系统控制器， LCMS-8030三重四级杆质谱仪， Labsolution ver. 5.41 色谱工作站。 1.2分析条件 液相条件 色谱柱： CAPCELL PAK CR (1：4) 2.00mmI.D.x150mm L.， 5um 流动相A：500 mL10mM 乙酸铵水溶液与2 mL乙酸混合。 流动相B：乙腈 洗脱方式：等度， A/B=40/60(v/v) 流速：0.2mL/min 柱温：40℃ 进样量：10pL 质谱条件 离子化模式： ESI源，正离子 离子喷雾电压：4.5kV 雾化气： 氮气3.0L/min 干燥器： 氮气 15L/min 碰撞气： 氩气 DL温度： 250℃ 加热模块温度：400℃ 扫描模式： 多反应监测(MRM)，母离子 m/z127.10，定量子离子 m/z 85.05，定性子离子 m/z68.00。 驻留时间： 300 msec 延迟时间： 3 msec 碰撞能量： m/z 127.10>85.05 为-20V； m/z127.10>68.00为-30V。 1.3标准品溶液的配制及样品前处理 样品前处理方法按照国标《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》(GB/T 22388-2008第二部分液相色谱质谱质谱法)进行处理。 取空白样品处理，用所得的样品溶液将 10 mg/L三聚氰胺储备液逐级稀释成浓度为0.01、0.05、0.1、0.2、0.5 mg/L 的标准工作液。 2.结果与讨论 2.1三聚氰胺标样的色谱图 0.1 mg/L 三聚氰胺标样的色谱图如图2所示，保留时间为 5.62 min 的色谱峰为三聚氰胺。 图2.0.1 mg/L的标准品色谱图 2.2线性关系 将浓度为0.01、0.05、0.1、0.2、0.5 mg/L 的标准工作液按1.2中的分析条件进行测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制工作曲线Y=(1568.71)X +(-1426.24)(见图3)，所得曲线线性关系良好，相关系数 R 为0.9998。标准品的浓度及峰面积结果见表1。 图3.三聚氰胺的标准曲线 表1标准品的浓度及峰面积 Conc.(mg/L) Area 0.01 19666 0.05 81499 0.1 148105 0.2 786149 0.5 306538 2.3精密度试验 对 0.01 mg/L、0.1 mg/L 和 0.5 mg/L的标样分别连续测定6次，考察方法的精密度，保留时间和峰面积的RSD%结果如表2所示。 表2.三聚氰胺的重现性数据(n=6) Conc.(mg/L) RSD% (RT) RSD% (Area) 0.01 0.64 4.34 0.1 0.18 3.80 0.5 0.34 3.18 2.4准确度实验 为考察方法的准确度，采用加标 0.01 mg/kg的样品进行加标回收率测定，评价方法的准确度。空白样品的色谱图如图4所示，样品中含有微量的三聚氰胺，浓度为 2.736 ug/kg；加标0.01mg/kg 样品的色谱图如图5所示，结果显示两份加标 0.01 mg/kg 样品的平均回收率为104.0%。加标3 mg/kg 样品平行处理两份，在固相萃取这一步取过滤液的五分之一进行净化，计算得到平均回收率为99.9%。满足国标规定的“在添加浓度 0.01 mg/kg~ 0.5 mg/kg 浓度范围内，回收率在80%~110%之间”的要求。 图4.空白样品的色谱图 图5.加标0.01 mg/kg样品的色谱图 2.5灵敏度实验 分析三聚氰胺(0.01，0.05，0.1，0.2和0.5mg/L)标准工作液，利用工作站软件计算三聚氰胺的检测检(S/N=3) 为 0.017 mg/L， 定量限(S/N=10)为0.0052 mg/L。配制浓度为 0.005mg/L 的三聚氰胺进样，如图6所示，S/N(ASTM)=14.04，所以可认为定量限为 0.005 mg/L， 根据前处理条件换算成方法定量限为 0.005 mg/kg. 图6.0.005 mg/L 的三聚氰胺色谱图 3结论 建立了使用岛津三重四级杆质谱仪LCMS-8030测定奶粉中的三聚氰胺的方法，该方法满足国标的要求。校准曲线的相关系数在0.999以上，3个不同浓度标准工作液的保留时间和峰面积相对标准偏差分别在0.64%和4.34%以下，方法定量限0.005 mg/kg， 0.01 mg/kg样品的加标回收率为104.0%。岛津LCMS-8030三重四级杆质谱仪完全可以满足乳制品中三聚氰胺的检测要求。