博纳艾杰尔官方网站推出:Cleanert MAS-MAW应用于萃取小鼠粪便中石胆酸。
Cleanert MAS-MAW 应用于萃取小鼠粪便中胆汁酸 一背景 胆汁酸(bile acid, BA) 为胆固醇的系列衍生物,体内约有50%胆固醇是以胆汁酸形式排泄,是体内清除胆固醇的重要途径。粪便中的胆汁酸经过复杂的肠道菌群解离作用已证实主要为一级胆汁酸和次级胆汁酸。目前已有相关研究表明,粪便中胆汁酸的含量与肝脏疾病进展程度相关,建立操作简便、可准确定量的样品前处理方法对临床相关研究具有重要意义。 本实验采用 Cleanert MAS-MAW 进行样品净化处理,考察胆汁酸在粪便样品中的加标回收率,建立 SPE 方法对粪便样品进行净化处理。 二目标物信息 表1目标物信息 ID 化合物 CAS 简 结构 1 熊去氧胆酸 128-13-2 UDC 2 牛磺脱氧胆酸 14605-22-2 TUDC 3 牛磺鹅去氧胆酸 516-35-8 TCDC 503H 4 胆酸 81-25-4 C 5 去氧胆酸 83-44-3 DC 6 石胆酸 434-13-9 LC 三材料及仪器 Cleanert MAS-MAW; PTFE 滤头; Cleanert M96 生物样品前处理仪; Cleanert V96 氮吹浓缩仪;96孔接收板; Venusil MP C18 (2.1*150mm, 3um, 100A); API 4000+. 四样品处理方法 4.1样品预处理 称取 10mg 粪便样品至样品瓶中,并加入3mL甲醇,涡旋2min,超声15min, 8000rpm离心 5min, 将上清液转移至干净样品瓶中,向样品残渣中再加入3mL甲醇,重复提取一次,将上清液合并,并用PTFE 过滤头进行过滤,将滤液于45℃下氮吹干,使用1mL 1%甲酸甲醇/水(1:1,v/v)溶液重新溶解,待净化。 4.2 SPE 过程 活化:2ml乙腈,2ml3%甲酸水溶液 上样:将待净化液全部上样 淋洗:4mL50%甲醇水,淋洗液弃去 洗脱:先用2mL 甲醇进行洗脱,再用2ml三乙胺-水-甲醇混合液(2%-10%-88%)洗脱,将洗脱液合并,在40℃下氮吹干,残渣用100uL 甲醇/水(7:3,v/v)溶解。 注:粪便样品中部分胆汁酸的含量较高,可将溶液进一步稀释再进行检测。 五仪器检测条件 5.1 HPLC条件 色谱柱: DurashellC18-AM (2.1*100mm, 3um, 100A) 流速:200uL/min 柱温:30℃;进样量: 5uL 表2梯度条件 t/min 水-10mM乙酸铵,0.04%氨水水溶液 乙 0 65 35 1 65 35 3 55 45 5.5 40 60 5.6 65 35 12 65 35 5.2质谱条件 扫描模式:电喷雾电离负模式 采集模式:多反应监测 (MRM) 表3参数信息 化合物 简称 tp/min Q1 Q3 DP/V CE/V 胆酸 CA 1.23 407.3 407.3 -130 -10 熊去氧胆酸 UDC 1.24 391.3 391.3 -145 -11 牛磺脱氧胆酸 TUDC 1.35 498.4 498.4 -157 -9 牛磺胆酸钠 TCS 1.36 514.3 514.3 -150 -7 鹅去氧胆酸 CDC 1.72 391.4 391.4 -139 -8 去氧胆酸 DC 2.01 391.5 391.5 -130 -10 牛磺鹅去氧胆酸 TCDC 2.36 498.3 498.3 -130 -10 石胆酸 LC 4.08 375.4 375.4 -127 -10 六结果 表4样品加标回收率 样品 牛磺脱氧胆酸 牛磺胆酸钠 胆酸 牛磺鹅去氧胆酸 熊去氧胆酸 鹅去氧胆酸 去氧胆酸 石胆酸 加标样1 86.40% 83.40% 87.60% 110.98% 114.75% 112.32% 91.43% 106.04% 加标样2 83.10% 84.40% 84.70% 109.00% 107.66% 111.03% 108.57% 93.29% 图18组分出峰顺序图(简称见表1) 七结论 本实验采用 Cleanert MAS-MAW 96 孔板对粪便样品中的胆汁酸进行高通量前处理。实验结果表明 Cleanert MAS-MAW 能够有效除去粪便中的干扰物,对8种胆汁酸进行定量萃取,绝对回收率范围为 83%~114%,可以满足日常对批量生物样品分析的需求。 八订货信息表 产品名称 规格/包装 订货号 Cleanert MAS-MAW 96孔板, 100mg/well MAW0302-W PTFE 滤头 0.22um, 200/pk AS041320 Cleanert V96 氮吹浓缩仪 与96孔板匹配 NV-96G Cleanert M96 生物样品前处理仪 与96孔板匹配 SPE-M96 Durashell C18-AM 2.1*150mm, 3um, 100A DC931502-AM 乙腈 LC-MS 级, 4*2.5L/箱 LC015 水 LC-MS级, 4*2.5L/箱 LC365 甲醇 HPLC, 4*4L AH230-4 1.5mL棕色进样样品瓶 100/pk 1109-0520 进样样品瓶瓶盖 100/pk 0915-1819 10mL 棕色样品瓶 100/pk 1509-1800 10mL样品瓶瓶盖 100/pk 1515-1748
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艾杰尔飞诺美为您提供《小鼠粪便中石胆酸检测方案(固相萃取仪)》,该方案主要用于小鼠粪便中石胆酸检测,参考标准--,《小鼠粪便中石胆酸检测方案(固相萃取仪)》用到的仪器有Cleanert M96 生物样品前处理仪