蜂蜜中噻虫嗪检测方案(液质联用仪)

LAAN-A-LM-E111Excellence in Science用户服务热线电话： 800-810-0439400-650-0439第一版发行日： 应用通讯液相色谱质谱法 UHPLC-MS/MS [LCMS-8060]联用用于蜂蜜中新烟碱类化合物、氟虫腈及其代谢产物的超灵敏快速含量测定 C140 号 新烟碱类化合物是一类广泛用于保护农田、水果和蔬菜的农药。最近，这一类化合物的使用引起极大争议，因为其被视为导致蜜蜂患蜂群衰竭失调的原因之一。授粉对农业至关重要，为评价新烟碱类化合物对蜜蜂健康的影响，研究人员进行大量研究。随后，欧洲食品安全局(EFSA)限制噻虫嗪、噻虫胺及吡虫啉的使用。氟虫腈是一种属另一类化学结构的农药，由于危害蜜蜂健康的风险较高， EFSA也禁止其用于玉米种子的农害防治。为更好地了解这些化合物对蜜蜂的影响及其对花粉和蜂蜜 的污染情况，有必要对其建立一种高灵敏度的含量测定方法。我们采用 Nexera X2 和 LCMS-8060 联用建立这一方法。 ■样品制备 使用噻虫嗪-d3、吡虫啉-d4及噻虫虫-d3作内标物。 采用 QuEChERS (快速、简单、廉价、有效、可靠及安全)法及分散固相萃取(dSEP)步骤萃取待测化合物。精密称取5g(±1%)蜂蜜置50 mL 聚丙烯离心管中。内标溶液为各内标物浓度均为5 ug/mL的乙腈溶液。精密加入内标溶液5 pL，挥干10分钟。精密加入超纯水10 mL，涡旋1分钟使混匀。精密加入乙腈10mL，涡旋混合1分钟。 化合物 回收率 化合物 回收率 啶虫脒 78.8% 氟虫腈砜化物 74.2% N-去甲啶虫脒 93.4% 吡虫啉 83.2% 噻虫胺 70.6% 烯啶虫胺 87.0% 呋虫胺 76.5% 噻虫啉 82.2% 氟虫腈 78.1% 噻虫嗪 75.6% 图1各目标化合物在其定量下限浓度时的色谱图 色谱系统 ： Nexera X2 质谱系统 ：LCMS-8060 色谱柱 ： ACE SuperC18 (100 mm L. × 2.1 mm I.D.， 2 pm) 离子源 ：加热ESI源 柱温 ：30°C 离子源电压 ： +1 kV (正离子模式) -1.5kV(负离子模式) 流动相 ：A相：水+0.05%氨水 温度 ：接口：400°C B相：甲醇+0.05%氨水 脱溶剂管：200°C 流速 ：600 uL /min 加热模块：400°C 梯度洗脱程序 ：0至3分钟，B相比例由5%至100% 气体流速 ：雾化气：3L/min 3至3.1分钟，B相比例由100%至5% 加热气：10L/min 总运行时间 ：4min 干燥气：5L /min 进样体积 ：2uL (POISe 模式，10pL水) 表3MS/MS采集参数 MRM 通道 表3MS/MS采集参数 名称 正负离定量离子对 定性离子对 内标物 啶虫脒 Acetamiprid 223.1>126.0 223.1> 56.1 2 N-去甲啶虫脒 N-Acetamiprid-N-desmethyl + 209.1>126.0 211.1>128.0 2 噻虫胺 Clothianidin + 250.1>169.1 250.1>132.0 3 呋虫胺 Dinotefuran 203.0>114.0 203.0> 87.0 1 氟虫虫Fipronil 435.0>330.0 435.0>250.0 3 氟虫腈砜化物Fipronil sulfone 451.0>415.0 451.0>282.0 3 吡虫啉 Imidacloprid + 256.1>175.1 258.1>211.1 2 烯啶虫胺 Nitenpyram + 271.0>126.0 271.0>225.0 3 噻虫啉Thiacloprid + 253.1>126 253.1> 90.1 1 噻虫嗪 Thiamethoxam 292.1>211.1 292.1>181.1 1 噻虫嗪-D3 Thiamethoxam-D3 295.1>214.05 1 吡虫啉-D4 Imidacloprid-D4 + 260.1>179.1 2 噻虫胺-D3 Clothianidin-D3 + 253.1 >132.05 3 ：依据各化合物的转换程度设置为3~34毫秒不等，确保每个色谱峰至少采30个点(最 驻留时间 ：依据各化合物的转换程度设置为3~34毫秒不等，确保每个色谱峰至少采30个点(最 大总循环时间为140毫秒) 延迟时间 ：1毫秒 四极杆分辨率：Q1：中等 Q3：中等 ■校准 y=0.0x2+0.008386x+ 以乙腈为溶剂配制校准曲线样品，使其最终浓度在0.5 pg/mL(色谱柱上浓度1 fg)至5 ng/mL范围内，分别相当于在蜂蜜中的浓度为1 ng/kg和10 ug/kg. 选择各化物测定准确度在80~120%间的标曲最低浓度作为定量下限(见表4)。 典型标准曲线图见图2。 表4蜂蜜中各待测物的定量限 化合物 定量限 化合物 定量限 (g/kg) (ug/kg) 啶虫脒 0.005 氟虫腈砜化物 0.001 N-去甲啶虫脒 0.005 吡虫啉 0.020 噻虫胺 0.020 烯啶虫胺 0.020 呋虫胺 0.010 噻虫啉 0.005 氟虫腈 0.001 噻虫嗪 0.005 目标物与内标物浓度比 标准品浓度 (pg/kg) 准确度(%) 0.005 106 0.010 97.2 0.020 95.6 0.100 107 0.200 98.4 0.500 91.5 1.000 104 99.9 10.000 100 图2啶虫脒的校准曲线 ■实际样品测定 购自本地超市或作为化妆品原料(橘树蜂蜜)的9个蜂蜜样品作为未知样品。 所有被测蜂蜜样品中的农药浓度都远低于标准的最大残留限量。但由于方法灵敏度极高，浓度非常低的新烟碱类化合物也可定量测定。测定结果见表5。图3显示蜂蜜样品的典型色谱图。 表5蜂蜜样品测定结果(浓度单位： ug/kg) 蜂蜜 啶虫脒 噻虫胺 吡虫啉 噻虫啉 噻虫嗪 1.乳脂状普罗旺斯蜜 0.20 0.010 2.乳脂状意大利蜜 0.15 0.17 3.液状比利牛斯山蜜 0.38 0.043 0.020 4.乳脂状法国-西班牙蜜 0.27 0.047 0.020 5.液态百里香蜜 6.乳脂状柠檬树蜜 1.7 0.15 0.033 7.液状橘树蜜 1.2 0.62 83.乳脂状花蜜 0.14 0.055 0.39 9.液状花蜜 0.34 0.11 0.010 蜂蜜 呋虫胺 烯啶虫胺 N-去甲啶虫脒氟虫腈 氟虫腈 1.乳脂状普罗旺斯蜜 0.052 0.005 2.乳脂状意大利蜜 0.040 3.液状比利牛斯山蜜 0.015 0.004 4.乳脂状法国-西班牙蜜 0.032 5.液态百里香蜜 6.乳脂状柠檬树蜜 0.020 7.液状橘树蜜 0.024 0.018 8.乳脂状花蜜 0.016 9.液状花蜜 0.006 图3比利牛斯山蜂蜜样品的色谱图 稳定性 在所有目标化合物均未检出的百里香蜂蜜中加入各化合物标准品使其浓度均为50 ng/kg， 再进行萃取。萃取所得样品连续进样150针。图4显示了测定结果。结果表明，即使在如此低的浓度时，响应信号稳定性仍非常好。由此证明，由于离子源出色的重现性，实际样品长序列进样时可持续保持极高灵敏度。 图4真实蜂蜜样品中化合物峰面积稳定性 结论 建立了一种蜂蜜中新烟碱类化合物的超灵敏含量测定方法。本方法样品制备步骤简单，回收率高。采用的进样模式成功省去繁琐的蒸发/重新溶解或稀释步骤。由于灵敏度极高，本含量测定方法可在远低于规定残留限量的浓度水平测定实际样品。此外，即使是测定长序列的低浓度实际样品，系统仍可保持稳定。 本方法可作为研究新烟碱类化合物对蜜蜂患蜂群衰竭失调作用影响的有力支撑手段，本方法稍作调整还可应用于花粉或蜜蜂样品的测定。 为更好地了解这些化合物对蜜蜂的影响及其对花粉和蜂蜜的污染情况，有必要对其建立一种高灵敏度的含量测定方法。我们采用岛津Nexera X2和LCMS-8060联用建立了一种蜂蜜中新烟碱类化合物的超灵敏含量测定方法。本方法样品制备步骤简单，回收率高。采用的进样模式成功省去繁琐的蒸发/重新溶解或稀释步骤。由于灵敏度极高，本含量测定方法可在远低于规定残留限量的浓度水平测定实际样品。此外，即使是测定长序列的低浓度实际样品，系统仍可保持稳定。