血清中睾酮检测方案(固相萃取仪)

Agela Technologies LC/MS/MS 检测血清中类固醇激素-Cleanert@PEP 一背景 类固醇激素又称为甾体激素，是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。它们在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。 类固醇激素在体内的含量较低，对其准确定量具有重要意义。本实验采用 Cleanert PEP96微孔板对血清样品进行净化，建立了血清中类固醇激素的检测方法，该方法适合高通量样品前处理。 二目标物信息 表1化合物结构 化合物 英文名 CAS 分子量 结构 氢化可的松 Hydrocortisone 50-23-7 362.46 睾酮 Testosterone 58-22-0 288.42 黄体酮 Progesterone 57-83-0 386.5244 醛固酮 Aldosterone 52-39-1 360.44 HOOHH 脱氢表雄酮 Dehydroepiandrosterone 53-43-0 288.4 H HO' 三材料及仪器 Cleanert PEP 96 微孔板(5mg/1mL)；96孔板正压装置；96位接收板；Venusil ASB C18 (2.1*50mm， 3pm， 150A)； API 4000+。 四样品处理方法 4.1样品预处理 100pL血清样品与 100pL 含有1%甲酸的甲醇/水溶液混合(50/50， v/v) 4.2 SPE 过程 活化：依次用200pL甲醇、200pL水活化； 上样：将预处理过的血清样品上样至96孔板中； 淋洗：加入400pL甲醇/水(35/65，v/v)用于淋洗样品中的干扰物； 洗脱：加入200uL1%甲酸甲醇，用96位收集板收集洗脱液用于 LC-MS/MS 检测。(将洗脱液氮吹浓缩可获得更低的检测限) 五仪器检测条件 5.1 HPLC 条件 色谱柱：： Venusil ASB C18 (2.1*50mm， 3pm， 150A) 流速：200pL/min 柱温：30℃ 进样量：3uL 流动相：0.1%甲酸水/0.1%甲酸乙腈(40/60，v/v) 5.2质谱条件 扫描模式：：电喷雾电离正模式 采集模式：多反应监测(MRM) 表2参数信息 ID tp/min Q1 Q3 DP CE 氢化可的松 0.98 363.2 120.9 74 40 363.2 327.2 70 23 睾酮 1.66 289.4 97.1 100 31 289.4 109.1 90 40 醛固酮 0.98 361.3 325.3 84 30 361.3 315.4 77 29 脱氢表雄酮 1.66 289.4 253.4 70 24 289.4 213.1 71 23 黄体酮 3.15 315.4 97.1 95 35 315.4 109.1 95 39 六结果 图 1 30ppb 类固醇激素标准溶液色谱图 ample 9 (空白) of 20141124-血清.wiff (Turbo Spray) Max.3990.0 cps. 图2血清样品色谱图 图3血清加标样色谱图(浓度为30ppb) 表3加标回收率数据 加标浓度 醛固酮 氢化可的松 睾酮 脱氢表雄酮 黄体酮 30ppb 85.9% 87.0% 105.5% 110.6% 97.7% 七结论 在临床检验中类固醇激素是一个难点。本实验使用Cleanert@ PEP 96 孔板提取血清中的类固醇，加快了检测速度，相较免疫法提高了最低检测浓度，回收率高于 85%，可满足实验室检测相关物质的需要。 八订货信息表 产品名称 规格/包装 订货号 Cleanert PEP 96微孔板， 5mg/1mL PE00501-MW Cleanert M96 生物样品前处理仪 与96孔板匹配 SPE-M96 Cleanert V96 氮吹浓缩仪 与96孔板匹配 NV-96G 96位接收板 1mL，与96孔板匹配 96SP1036-Y Venusil ASB C18 2.1*50mm， 3um，150 A VS930502-0 甲醇 HPLC， 4*4L AH230-4 乙腈 HPLC， 4*4L AH015-4 水 LC-MS级，4*2.5L/箱 LC365