利培酮中含量检测方案(毛细管电泳仪)

高效毛细管电泳法测定利培酮的含量 李志伟，霍云霞，刘佳，于奕峰 河北科技大学化学学制药工程学院河北石家庄050018 摘 要：目的 建立利培酮原料中主药的含量测定方法。方法采用高效毛细管电泳法测定。以50mmol/L， PH=6.5的磷酸盐缓冲液为电泳介质，未涂层石英毛细管(75um×78.5cm， 有效长度 70cm) 为分离通道，液体压差进样，(进样高度 100mm，进样25s)，分离电压为 15kV，检测波长280nm，操作温度30℃。结果 利培酮在 0.20mg/ml~2.0mg/ml范围内呈线性关系良好， r=0.9995。加样回收率为 98.87%， RSD 为 1.084%(n=5)。结论 该方法快速简便，灵敏度高，重现性好，可用于利培酮原料的含量测定。 关键词：毛细管电泳 利培酮 含量测定 Determination of Risperidone By High Performance CapillaryZone Electrophoresis LI Zhi-wei， HUO Yun-xia， LIU Jia， YU Yi-feng (1.College of Chemical and Pharmaceutical Engineering， Hebei University of Scienceand Technology， Shijiazhuang 050018， China) ABSTRACT：AIM A method for determination of Risperidone in Raw materialswas established. METHODS. A HPCE apparatus equipped with a untreatedfused-silica capillary (75um×78.5cm， 70cm effective length). Liquid height ofinjection was 100mm for 25 seconds， and the running voltage was 15kV for theseparation. The wavelength of detector was 200nm and the running temperature was30℃. RESULTS： The linear range of Risperidone was 0.20mg·mL~2.0mg·mL (r-0.9995).Theaverageerrecoverywas 98.87%， relative sstandard was1.084%(n=5). CONCLUTIONThe method is simple， rapid and sensitive withgood repeatability， and can be used for content determination of Risperidone. KEY WORDS： HPCE Risperidonecontent determination ( 作者简介：李志伟(1977-)，男，汉族，河北唐县人 ， 主要从事药物分析和分离材料的研究。 ) 利培酮(Risperidone) 是一种新型的非经典抗精神病的药物，其结合了血清素(5-HT2)和多巴胺(D2)受体拮抗效应，在急性和慢性精神分裂症的治疗当中起到重要的作用。化学名称为3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异恶唑-3-基)-1-呱啶基]乙基-2-甲基-6，7，，88，，9-四氢-4H吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮])，结构式如图1所示： 图1 利培酮结构式 Fig.1Molecular structure of Risperidone 目前，利培酮的分析方法主要有反相高效液相色谱法(HPLC)[1，2]，液相色谱--质谱法31，紫外分光亮度法[4.，5]，电化学法I61。相对于上述方法，毛细管电泳是一种经济、快速、高效的分离分析方法，而采用毛细管电泳法测定利培酮的方法尚未见报道。本实验采用高效毛细管电泳法测定其含量，具有快速简便，准确度高等优点。 仪器及试剂 1.1 仪器 CL1020 高效毛细管电泳仪，紫外检测器(北京彩陆科学仪器有限公司)，AL-204电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)， PHS-3CPH计(上海精密科学仪器有限公司)， KQ3200B 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。 1.2 试剂 利培酮原料(自制，批号20080714)，利培酮对照品(批号：100570，中国药品生物制品检定所)，缓冲液和样品溶液均用 0.45um 滤膜滤过处理。水为二次水，试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 电泳条件 石英毛细管柱：75pm×78.5cm(有效长度 70cm，未涂层)，电泳介质为50mmol.L'， pH=6.5 的磷酸盐缓冲液(使用前脱气)，液体压差进样，(进样高 度100mm， 进样25s)，分离电压为 15kV， 检测波长280nm，操作温度30℃。每次进样前依次用 0.1mmol. L NaOH 冲洗柱 1min，，二次水冲洗3min，缓冲液冲洗 3min. 2.2 线性关系的考察 精密称取利又酮对照品 50mg， 用HCl溶液(9mLHCl-1000mLH20)定容于25ml容量瓶中，摇匀，超声振荡10min 作为储备液。分别取适量储备液配制为浓度分别为0.1 mg.mL'、0.2 mg.mL、0.5 mg. mL、1.0 mg· mL、1.5 mg·mL、2.0mg·mL"的待测液，用0.45um滤膜滤过，摇匀续滤液作为对照品溶液。在上述色谱条件和色谱系统下，依次进样，以利培酮的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，回归方程为：：Y=25151.9478+978082.05532X，r=0.9995(n=6)。结果表明利培酮在 0.2mg/ml~2.0mg·mL"浓度范围内，其密度和峰面积呈良好的线性关系。 2.3 精密度试验 取 1.0mg·mL'的利培酮储备液，重复进样5次，测定峰面积， RSD 值为0.72%。 2.4 稳定性试验 精密称取利培酮原料 25.00mg于 25ml 容量瓶中，加入 HCl溶液 15mL， 超声振荡10min，补加 HCl溶液至刻度，摇匀，用0.45um 滤膜滤过，续滤液作为样品液。取 1.0mg/mL 的利培酮样品液，分别于 Oh、2h、4h、8h、24h进样，测定 5 次， RSD 值为 0.93%，样品液在24h 内稳定。 2.5 重现性试验 取同一批利培酮原料，平行测定5次， RSD 值为2.63%，表明该方法重现性较好。 2.6 回收率测定 精密量取利培酮原料样品5份，分别加入一定量的利培酮对照品，用 HCl溶液定容于 100mL容量瓶中，测定峰面积。结果见表1。 表1 利培酮含量测定回收率检查结果 Tab 1 Percent recovery of determination of Risperidone 序 样品量 加入量 测得量 回收率 平均回收率 RSD 号 g g g % % % 1 0.0702 0.0305 0.1001 98.03 2 0.0709 0.0297 0.0999 97.64 3 0.0698 0.0301 0.1000 100.33 98.87 1.084 4 0.0703 0.0309 0.1010 99.35 5 0.0710 0.0296 0.1003 98.99 2.7 含量测定 精密称取利培酮原料样品液和对照液一定量，注入电泳仪，测定峰面积。用外标一点法测得利培酮的含量为99.75%。 3 讨论 3.1 电压的确定 分离电压主要影响的分离电流和分析时间，试验中考察了分离电压分别为10kV、15 kV、20kV、25kV，随着分离电压的增大，分析时间缩短，柱效增大，然而操作电流急剧增加，柱内的焦耳热增加，影响分离效果。为了在保证分离度的条件下，在较短的时间内获得最佳的分离效果，本实验选择了 15 kV作为分离电压。 3.2 缓冲液PH 值的确定 本实验采用了磷酸盐、硼酸-硼砂、四硼酸钠3种缓冲液，发现磷酸盐对利培酮的分离效果较为理想。采用 HPCE 测定利培酮含量时，磷酸盐缓冲液的 pH对分离有较大的影响。试验考察了缓冲液pH分别为2.0、4.0、5.0、6.5、7.0时利培酮的分离情况。随着缓冲液的 pH值的升高，电渗流(EOF)增大，出峰时间缩短。当pH为6.5时，利培酮获得较好的分离。但当 pH增大到7.0时，利培酮的峰形变差，出现拖尾现象。为了既获得良好的峰型，又能缩短分析时间，本试验选择缓冲液的 pH 值为6.5。 4 结论 在现今的药物分析中， HPCE 比 HPLC 具有柱效高、分析速度快、进样体积小，易清洗等优点，而且 HPCE 更适合于直接分析水溶液的样品，不需消耗大量的高纯有机试剂，节省了费用。本实验采高效毛细管法测定利培酮的含量，具有分离效果好，无需有机溶剂，操作简便快速的优点，能够实现利培酮准确快速的分析检测。 ( 参考文献 ) ( 杨梦心，温预关，刘学军，等.反相高效液相色谱法测定利培酮片的含量[J].药品 检测，2003，12 ( 7)：30-31 ) ( 2 陈钧，高小玲，蒋新国.高校液相色谱法测定利培酮片含量及有关物质[J].中国现 代应用药学杂志，2004，21( 4 )：302-303 ) ( 3 段小涛，陈笑艳，张逸凡，等.液相色谱-串联质谱法测定人血浆中的利培酮[J].药 学学报，2006，41(7)：684-688 ) ( 4 刘新泳，付崇铭，刘丽娟，等.利培酮片的一阶导数分光亮度测定[J].中国医药工 业杂志，2001，32(4)：174-176 ) ( 5 付崇铭，亓玉昆，宫爱华，紫外分光亮度法测定利培酮片的含量[量].山东医药工 业，2000，19(3)：20-21 ) ( 6 孟祖超，郑建斌，朱小红.利培酮的电化学行为及应用研究[J].化学学报，2005，63 (9) ： 827-833 ) China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net