血浆中药物检测方案(液相色谱仪)

SHIMADZUAPPLICATION NEWS色谱分析NO.LC-006http：//www.shimadzu.com.cn岛津应用技术咨询电话(分析中心) 北京(010)85252416/2417/2352 上海(021)64156604 广州(020)87108613 岛津分析应用报告 Co-Sense 系统分析血浆中的药物 摘要Co-Sense 系统是由新开发的前处理柱 Shim-pack MAYI-ODS和在线稀释的自动柱切换 HPLC统构成的。含有药物的血浆和血清试样无需前处理直接注入Shim-pack MAYI-ODS前处理柱，系统进行在线除蛋白和稀释，药物在前处理柱富集后再由分析柱分离，最后进行检测，定量。 前言 在药代动力学和临床实验中，为掌握在生物体内代谢物的动态和药效， HPLC 是一种非常有效的检测手段之一。 通常，使用HPLC分析血浆和血清中的药物时，必须要进行前处理来除去蛋白等杂质。这种前处理一般要经过多个手工操作步骤，既繁琐分析精度又不高，还存在操作人员之间的差别。采用自动化的操作会提高分析效率和分析的再现性及重复性。 近年来，为使生物样品的前处理操作自动化，用于除蛋白等杂质的前处理柱在不断的开发，与柱切换系统相结合，可以提高处理效率和分析的精度。 为此，使用新开发的生物试样前处理柱 Shim-packMAYI-ODS 和在线稀释的自动柱切换 HPLC生物试样分析系统，直接对血样进行了分析。 HPLC装置 LC-20生物试样分析系统“Co-Sense for BA" 包括脱气机DGU20A5：泵LC-20AD(4台)自动进样器SIL-20C：高压混合器；柱温箱 CTO-20AC： SPD-20AC 前处理柱： Shim-pack MAYI-ODS (内径4.6mm×长10mm) 分析析： Shim-pack vp-ODS (内径4.6mm×长150mm) 流程图 如图1所示 图1系统流路图 前处理柱的效果 由于血浆中所含的蛋白质会引起分析柱主化、流路堵塞，必须在前处理过程中有选择地予以除去。新开发的Shim-pack MAYI-ODS柱是用亲水性聚合物涂覆内面的反相柱，像蛋白质那样的大分子不会进入细孔内部，而像药 物那样的小分子可渗透到细孔内，保持在固定相内。蛋白质直接排出系统外，而药物保持在前处理柱内被浓缩，随着用于分离的流动相导入分析柱。 使用前处理柱 Shim-pack MAYI-ODS柱除蛋白的效果如图2所示。使用添加有异丙基安替比林的血浆进行评价的结果，如图3下段的色谱图所示，确认在3分钟内蛋白质等洗脱。蛋白质直接被排出系统外，而药物在蛋白质洗脱以后，通过高压流路切换阀切换，导入分析柱，得到如图2上段所示的色谱图。 图2用Shim-pack MAYI-ODS 前处理柱从血浆中提取药物的模式图 图3用 Shim-pack MAYI-ODS 前处理柱除去蛋白的效果 在线旁路稀释的效果 血浆或血清中的药物，往往是与蛋白质相结合存在，在除去蛋白质操作时，药物也与蛋白质一起被除去，这是药物回收率低的原因之一。蛋白质和药物是由于离子性相互作用或疏水性相互作用而结合，为减弱蛋白质与药物的结合，可采用改变试样环境的pH或离子强度，添加有机 溶剂等方法。为此， Co-Sense for BA的试样导入液必须选择具有减弱蛋白质与药物结合效果的导入液。另外，为了即使注入大容量的血浆试样时，也可有效回收、捕集药物，在本系统的进样部分设有稀释旁路，设定注入样品自动稀释至8倍。 图4在线稀释旁路对药物回收率的效果 图4为在线稀释旁路对药物吲哚美辛回收率影响效果的示意图。 重现性 在血浆中添加苯妥英、氨甲酰氮卓至1mg/L，对试样反复进行5次分析，面积的重现性如表1所示。由于前处理自动化，不需进行人工除蛋白操作，减少了人为的误差，而且可以获得高的重现性。 苯妥英 (ccAbs.sec) 氨甲酰氮卓(cAbs.sec) NO.1 238911 98548 NO.2 240042 98367 NO.3 237208 98706 NO.4 238317 98481 NO.5 239678 98152 平均 238832 98451 标准偏差 1127.9 207.3 变异系数(%) 0.472 0.211 表1血浆中苯妥英和氨甲酰氮卓的峰面积值重现性 结果讨论： 使用采用在线前处理技术的HPLC系统，不需要对血浆中的药物进行手工除蛋白和稀释操作，这些操作在系统内部自动进行，其优点是(1)避免繁琐的手工前处理，提高工作效率(2)可增加进样量，进行在线富集(3)药物的回收率，精密度高。 D岛津国际贸易(上海)有限公司