干红葡萄酒中HPCE 指纹图谱研究检测方案(毛细管电泳仪)

酿酒科技 2007年第9期总第159期)·LIQUOR-MAKING SCIENCE & TECHNOLOGY22007 No.9(Tol.159)26 27魏新军，邓璞红，张 浩，张永生·干红葡萄酒的 HPCE 指纹图谱研究 干红葡萄酒的 HPCE 指纹图谱研究 魏新军，邓璞红，张 浩，张永生 河南科技学院食品学院，河南 新乡 453003) 摘 要： 采用高效毛细管电泳(HPCE) 建立了干红葡萄酒的乙醚提取物的指纹图谱，并进行指纹图谱分析。试验条件为：以pH8.4的硼砂缓冲液作电泳介质，柱温25℃，电压19.99kV，检测波长250 nm。通过指纹图谱相对峰面积和相对保留时间的分析，对不同批次的干红葡萄酒进行对比研究。结果表明，该法简便可靠，可作为对干红葡萄酒进行质量评价的新方法。 关键词： 干红葡萄酒； 高效毛细管电泳； 指纹图谱 中图分类号：TS262.6；TS261.4 文献标识码：A 文章编号：1001-9286(2007)09-0026-03 Study on HPLC Fingerprint to Judge the Quality of Claret WEI Xin-jun， DENG Pu-hong， ZHANG Hao and ZHANG Yong-sheng (He’nan Institute of Science and Technology，Xinxiang， He'nan 453003， China) Abstract： High performance liquid chromatography (HPLC) was used to establish the fingerprint of ether extract of claretto distinguish claret quality stability. The experimental conditions included borax solution (pH value as 8.4) as elec-trophoretic medium， column temperature at 25 ℃， voltage as 19.99 kV， and detection wavelength at 250 nm. Thecompara-tive study was carried out on various production batches of claret through the analysis of fingerprint relative peak area andrel ative retention time. The results showed that the method was convenient and applicable to quality judgment of claret. (Tran. by YUE Yang) Key words： claret； high performance liquid chromatography； fingerprint 干红葡萄酒含有对人体有益的维生素、氨基酸以及多酚类化合物等，不仅营养丰富，而且具有预防心血管疾病、防治动脉粥样硬化等功效1~2。干红葡萄酒因为受到葡萄品种、气候、土壤条件以及酿造方法和陈酿方式等因素的影响，其产品的质量稳定性也会随之变化化。目前，对干红葡萄酒品质评价的方法多数还局限于感官分析和单一成分的化学鉴定13~4。对干红葡萄酒科学的、整体性的评价方法还处于探索阶段。 指纹图谱技术具有整体性”和模糊性”特征，能够实现多组分和多指标分析，已经广泛应用于中药的质量鉴别和评价15~6。高效毛细管电泳指纹图谱是指纹技术的一种，具有适用性强等特点，也开始应用于中药的质量评价，但是在干红葡萄酒方面的应用还未见报道。本文利用高效毛细管电泳建立了干红葡萄酒的指纹图谱评价方法，以期为科学地评价干红葡萄酒的品质提供一种有效的技术手段。 ( 基金项目：河南省重点科技攻关项目(072102110007)。 ) ( 收稿日期：2007-08-16 ) ( 作者简介：魏新军(964-)，男，硕士，副教授，从事食品安全与检测。 ) 材料与方法 1.1 材料 干红葡萄酒：山东某公司生产，选择9个不同生产批次。 1.2试验方法 1.2.1 仪器 CL 1030高效毛细管电泳仪：紫外检测器，HW-2000色谱工作站，北京彩陆科学仪器有限公司产；恒温水浴锅：北京市长风仪器仪表公司；循环式真空泵：河南智诚科技发展有限公司。 1.2.2试剂 乙腈、甲醇，均为色谱纯；乙醚、石油醚、冰乙酸、硼酸、硼砂，均为分析纯；试验用水为超纯水。 1.2.3 色谱条件 石英毛细管柱：50 cm×75um；检测波长：250 nm；电压：19.99 kV；pH8.4的硼砂缓冲液；柱温：25℃。 取酒样50.0mL，用50.0 mL 乙醚萃取3次。合并萃取液，于45℃恒温水浴锅蒸干溶剂，再用甲醇定容至10 mL，经0.45 um 膜过滤后供分析用。 2 结果与分析 2.1 指纹图谱的获取 在优化的色谱条件下，样品能够得到较好的分离。发现以250 nm 作为检测波长，可以使尽量多的化合物被检测出来。考察了运行时间为60 min 时的 HPCE 图谱，确定7 min 之后再无峰出现，因此确定每次运行时间为7 min。 2.2 指纹图谱的建立 2.2.1 试剂空白谱图 不添加酒样，按试验方法进行样品前处理得到试剂空白试液，然后按照试验条件进样分析，得到试剂空白的高效毛细管电泳谱图，见图1。 图1 试剂空白的高效毛细管电泳谱图 2.2.2 样品指纹图谱以及标准图谱 9个不同批次的干红葡萄酒经过前处理后，按照试验条件分别进样分析，得到9个批次样品的高效毛细管电泳指纹图谱。通过对9个批次样品的指纹图谱分析，发现S1号样品的峰面积较大，峰数多且具有所有的共有峰，因此，将其指定为标准图谱，见图2。由试剂空白谱图可知，第一个峰由试剂引起。 2.3 指纹图谱分析 2.3.1 相对保留值和相对面积的计算 相对保留值计算公式为： a=t t.-rS 其中：t——待测峰的绝对保留时间； ts——参照峰的绝对保留时间。 相对面积计算公式为： Sr=-待测峰的峰面积100% 标准样品的总面积 8.0 图22S1样品的高效毛细管电泳谱图 样品在试验条件下，色谱峰之间区分较好，基线平稳。在指纹图谱上选择一个出峰时间较居中，峰面积较大，并为所有样品所共有的组分作参照峰。本文选择标准图谱中保留时间为5.32 min 的色谱峰作参照峰，见图2. 2.3.2 指纹图谱分析表 按样品中各组分的相对保留值a大小次序排列，并在每个a项下标出该组分的相对面积 Sr， 即组成了该样品的指纹图谱分析表，结果见表1。 2.3.3 共有峰分析 在不同样品间，具有相同a值的峰，即为共有峰。通过表1可知，在9个不同批次的样品之间，有10个色谱峰为全部样品所共有，它们的相对保留值a分别为0.36、0.53、0.64、0.66、0.68、0.69、0.80、1.00、1.06 和1.16。这10个峰就是指纹图谱的特征峰，是鉴别产品质量稳定的必要条件之一。 2.3.4 重叠率分析 表1 样品的指纹图谱分析 Sr S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 0.36 5.39 5.19 5.79 5.66 5.01 4.77 2.75 4.25 4.00 0.40 7.23 1.63 1.77 1.31 1.91 0.94 0.37 1.14 / 0.51 0.53 / / 0.48 0.99 / / 0.71 1.06 0.53 9.58 8.35 8.66 6.64 3.13 7.59 2.26 8.27 3.48 0.64 5.83 4.415 3.68 4.45 5.37 3.79 2.58 4.86 4.57 0.66 2.05 2.598 2.11 2.05 1.68 1.70 0.68 1.32 1.09 0.68 4.48 3.02 3.98 5.06 4.07 3.52 1.77 4.22 2.64 0.69 2.50 2.28 1.91 2.51 2.72 1.85 1.25 2.56 1.84 0.74 0.93 1.09 1.39 0.98 1.27 0.92 / 0.69 0.78 0.76 0.60 0.52 0.52 0.51 0.38 0.77 0.55 0.53 / 0.77 0.65 0.54 0.62 0.27 0.55 / / 0.74 / 0.80 7.43 6.03 5.48 0.83 4.57 5.39 2.03 5.13 4.73 0.86 / 1.69 / / / / / / 1.00 35.78 46.96 33.7335.5814.5722.79 11.1526.5716.43 1.04 1.27 1.00 1.60 1.30 1.00 0.85 0.55 0.46 1.06 8.59 8.75 7.93 8.95 8.86 7.29 4.37 9.52 8.19 1.16 10.52 13.77 9.15 11.05 7.08 7.05 3.66 8.73 6.64 1.23 3.14 3.70 2.91 2.92 2.11 2.18 2.32 2.34 重叠率(%) 100 94 97 100 100 94 100 87 重叠率计算公式为： 重叠率(%)==2>待测样品与标准样品共有峰-X×100%待测样品峰数+标准样品峰数 其中 S1号样品的指纹图谱指定为标准，1~9号样品的指纹图谱重叠率见表1。 通过表1可以看出，1号、2号、3号、4号、5号、6号、8号样品之间存在的差异较小，且重叠率高，均大于94%。虽然7号和9号样品的重叠率相对较低，但也大于87%(一般认为重叠率大于75%，即为稳定)。 3讨论 本试验建立了干红葡萄酒的高效毛细管电泳指纹图谱，并对试验条件进行优化。通过重叠率分析，建立了干红葡萄酒的指纹图谱评价分析方法。比较了9个不同批次样品之间的产品质量差异，结果表明，9批产品的质量比较稳定。 ( 参考文献： ) ( [1] 崔华，何作云.干红葡萄酒对食饵性兔动脉粥样硬化血管壁 的影响[J].中华预防医学杂志，2004，38(2)：103-106. ) ( [2] 陈勇，曾新安，董新平，等.中国主产干红葡萄酒中氨基酸含 量对照与探讨[J].食品与发酵工业，2004，30(1)：107-110. ) ( [3] 李华，杨永锋，郭明浩，等.影响干红葡萄酒感官质量的因素 分析[J].生物数学学报，2005，20(2)：223-228. ) ( [4] 吴波，张寒俊.干红葡萄酒中顺、反白藜芦醇及其苷的 HPLC 分析[j].中国酿造，2006，(9)：64-67. ) ( [5] 曾志，杨东晖，陶敬奇，等.高效液相色谱指纹图谱在中药芦 根上的应用[J].分析化学，2004，32(8)：1035-1038. ) ( [6] 李文龙，陈军辉，殷月芬，等.龙胆药材中龙胆苦苷和马钱子苷酸含量的测定及其指纹图谱研究[J].药学学报，2007， 42(5)：566-570. ) ( [7] 黄晟，张国庆，娄子洋，等.虎杖药材高效毛细管电泳指纹图 谱研究[J].药物分析杂志，2006，26(1)：24-26. ) ( [8] 程翼宇，陈闽军，吴永江.化学指纹图谱的相似性测度及其评 价方法[].化学学报，2002，60(11)：2017-2021. ) 首届中国低度白酒发展高峰论坛暨第二届中国酿酒工业协会白酒分会技术委员会会议在郑州召开 本刊讯：首届中国低度白酒发展高峰论坛暨第二届中国酿酒工业协会白酒分会技术委员会会议于2007年8月17日至18日在中原郑州顺利召开，来自全国各地的名优酒企业、大专院校、科研单位、以及全国著名白酒专家80余人参加了会议。会议由中国酿酒工业协会主办，河南酒业协会和张弓酒业有限公司承办。中国酿酒工业协会白酒分会秘书长赵建华主持会议，中国酿酒工业协会理事长王延才、河南省酒业协会会长熊玉亮、河南省商丘市副市长关保安、河南省宁陵县副县长何玉明出席会议并做了热情洋溢的讲话。河南省酒业协会会长熊玉亮致欢迎词，并介绍了河南省酒业的基本情况，河南省现有名优酒11个，2006年白酒产量32.99万千升，年消费白酒60万千升，很大一部分市场让给外省企业。河南省宁陵县副县长何玉明致词，介绍了宁陵县的白酒业基本情况，指出“张弓”是宁陵县的品牌，这次会议为提升“张弓”发展“张弓”提供了平台。张弓酒业董事长孙刚介绍了企业的发展历程，张弓酒业现有白酒年生产能力5万千升。1975年，郭宗武先生首创研制成功 38 %vol 白酒，开创了中国低度白酒的先河。河南省商丘市副市长关保安讲话指出，张弓酒业是商丘市的支柱品牌和支柱产业，为商丘市的经济建设做出了贡献。 会议期间，20余名论文作者做了大会交流，受到与会代表好评。大会收到论文近80篇，经过专家委员会评审，从由《华夏酒报》和《酿酒科技》协办并开辟专版和专栏发表的“张弓杯”低度白酒征文中评选出优秀论文35篇，其中，一等奖5篇，二等奖10篇，三等奖20篇。会上，由有关领导向获奖论文作者颁发了证书和奖金。 王延才理事长在会上介绍了酿酒行业相关软课题的立项及进展情况，江南大学徐岩院长介绍了“169项目”的组织情况及进展情况，中国食品发酵研究院熊正河副院长介绍了有关标准的组织、修订情况。著名白酒专家沈怡方、陶家驰等对中国白酒的发展方向发表了中肯的论述。陶家驰认为，中国白酒的生产方式应该“与时俱进”，“董酒、玉林泉”白酒在贮存期间的质量稳定因素值得研究；沈怡方指出：“在产业政策方面，应注意研究中国白酒业中小企业的产业政策问题，中国白酒业的特色是大中小企业结合，呈‘宝塔'型结构，今后也不会变，应该好好研究；日本酒业的发展模式值得借鉴；年份酒的问题不要炒作；洋酒的进入并不可怕，自己不要乱了阵脚；本次会议的中心问题是学习“张弓'的创新精神，总结30年来低度白酒的发展历程，有些问题值得探讨；值得思考的问题：董酒长期贮存质量不变；水的问题，不能用纯净水；活性炭处理后的二次浑浊问题；增加酸含量，延缓水解的问题；与洋酒抗争，开拓技术市场，促进白酒发展等”。栗永清认为：“以企业为主，开展专题讨论、召开技术会议的形式很好，是一种新的尝尝；总结了低度白酒30年来的发展历程，再用一段时间，把目前的酒度 40 %vol 降到 30 %vol，作为今后的发展目标，目前山东已形成市场规模，要好好研究；低度白酒的生产，从原料上做试验，找找如药材、花草、树木的特征，为什么董酒长期贮存质量变化不大?能否以蒸馏酒和发酵酒生产低度白酒?怎么选择酿造用水?12%vol玉林泉贮存不水解值得研究；贮存容器增香问题也值得研究；高级醇的含量值得对比研究”。 赵建华秘书长强调：“各企业要注意国家标准执行的时间；注意生产许可证的换发时间；注意包装材料的标准要求”。 会议期间，大会组织部分专家对张弓酒业的高低度白酒进行了鉴评，专家们对鉴评样品给予了高度评价。会议完成各项议程，圆满结束。(小雨) ◎China Academic Journal Electronic Publishing House. 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