红葡萄酒中反式白藜芦醇，儿茶素等定量分析检测方案(液质联用仪)

「技术概要WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 「技术概要I 使用Xevo G2-XS QTof和SONAR数据非依赖型采集方法(DIA)改善红葡萄酒的定量分析 Lauren Mullin1、Yunpeng Zhen?、Rob Plumbl 1沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德)；?沃特世科技(上海)有限公司 技术优势 灵活地对红葡萄酒中的目标酚类化合物进行靶向及非靶向分析。 SONAR可有效改善MS/MS谱图清晰度，无需进行方法开发或预先掌握样品信息。 仅通过一次进样就能同时获取用于定量和鉴定的数据。 关键词 ( 葡萄酒，反式白藜芦醇，对-香豆酸，儿茶素，酚类化合物， SONAR， U N IFI ) 简介 近年来，人们开始越来越多地将非靶向方法作为靶向定量分析的补充方法用于食品和饮料表征。这些技术在葡萄酒分析中的应用包括：评估酒糟中的未知组分、分析酿酒葡萄杂交品种中的糖基化简单酚类物质2，以及抗虫基因型植株与其易受虫害的始祖老藤之间的对比代谢分析3。在此类实验中，研究人员不仅需要获取优质的高分辨率率谱(HRMS)数据，确保已知分析物在相关浓度范围内实现准确定量也非常重要。 本技术概要介绍了新型数据非依赖型采集(DIA)模式SONAR4.5的应用，采用这种模式， 我们在Waters° Xevo G2-XS QTof上获得了高选择性的HRMS谱图。本研究评估了该技术对红葡萄酒中三种已知酚类化合物(反式白藜芦醇、儿茶素和对-香豆素)的靶向定量性能，着重突出了SONAR采集模式的广泛适用性。 讨论 本研究以购自当地零售商、由不同葡萄品种酿成的8种红葡萄酒为研究对象，评估了线性、LOD/Q和谱图清晰度以协助鉴定已知化合物。进样10pL样品，使用30 Da的SONAR窗口在100~700m/z的四极杆质量扫描范围内采集数据。 用于被动状态离子传输的碰撞能量设置为6eV，高能量梯度为20~45eV。Tof采集质量范围为50~1200Da，采集速率0.2s.葡萄酒样品的制备方法如下：用去离子水按1：1的比例稀释样品之后，在15，000 rpm下离心，再用去离子水按1：4的比例稀释样品。接下来，向稀释后的样品中加入13C-同位素标记的标准品 (+/-儿茶素2，3，41C、对-香豆酸1，2，313C、白藜芦醇-(4-羟苯基-13C))作为内标， 并绘制基质匹配校准曲线。 图1展示了1：1稀释的葡萄酒样品中，天然形态的对-香豆酸以及带标记的对-香豆酸标准品的分析结果对比。我们使用UNIFI软件中的“质谱”视图对SONAR采集的数据进行了过滤。使用这种质量过滤采集方法， SONAR获得了比传统DIA方法更加清晰的谱图。采集数据所用的参数相同，区别仅在于使用非分辨率模式的四极杆进行离子传输。 SONAR得到的谱图清晰度可媲美MS/MS实验，而且无需进行方法开发或预先掌握样品信息。 图1.红葡萄酒样品中对-香豆酸(天然对-香豆酸和带标记的对-香豆酸)的谱图，相较于全谱采集， SONAR谱图的选择性更高。放大后的高碰撞能量(CE)谱图展示了精确质量碎片结构和质量误差。 图2.13C同位素标记的白藜芦醇标准品稀释系列和基质匹配(按1：5的比例稀释的葡萄酒)校准曲线的线性。 向葡萄酒样品中加标带标记的标准品以绘制基质匹配校准曲线，白藜芦醇-(4-羟苯基-13C)的校准结果如图2所示，所有化合物的结果汇总于表1中。LOD/Q标准分别为峰间信噪比(S/N)达到3和10，且质量误差容差为+/-5 ppm。 观察到的色谱峰宽约为7s，每个色谱峰包含至少12个数据点以确保定量结果的可靠性。天然反式白藜芦醇、儿茶素和对-香豆素的响应如图3所示。每个样品重复进样三次，然后根据带标记标准品的校准曲线计算出浓度，取三个结果的平均值作为实测浓度结果。结果表明，从稀释样品中检出的浓度普遍都在校准范围内，突出了使用SONAR为该应用建立的定量范围的相关性。 图3.葡萄酒样品中天然酚类物质的响应，以及根据同位素标记校准曲线计算得到的定量浓度结果。所有葡萄酒样品的儿茶素响应都非常高，对-香豆素和反式白藜芦醇的响应见特写图。每种葡萄酒中各物质的浓度均显示在用颜色编码的表格中，除了葡萄酒样品1和7未检出反式白藜芦醇，每个样品中的每种分析物均得到了定量。 表1. SONAR 30 Da窗口采集到的同位素标记标准品校准曲线数据汇总。 化合物 [M-HT RT LOD LOQ 范围 拟合 R2 (min) (pg/mL) (pg/mL) (ug/mL) +/-儿茶素2，3，4，13C， 292.0818 4.54 0.01 0.025 0.010-5 二次曲线 0.9997 对-香豆酸1，2，313C， 166.0501 6.00 0.10 0.200 0.100-5 二次曲线 0.9999 白藜芦醇-(4-羟苯基-13C) 233.0915 8.83 0.01 0.025 0.025-5 线性曲线 0.9990 除了能够通过DIA方法获得高专属性、高选择性的谱图，本研究所用的SONAR采集参数还适用于对红葡萄酒中的目标酚类化合物进行靶向定量分析。这些突出优势相互结合，有助于我们在靶向及非靶向分析中灵活地对样品成分进行高质量评估。 ( 参考文献 ) ( 1，1 D elgado de la Torre MP， Priego-Capote F ， andLuque de Castro MD.(2017) Characterizationand Comparison of Wine Lees by LiquidChormatography-Mass Spectrometry in High-Resolution Mode.J. of Agri. and Food Chem. 63：1116-1125. ) ( 2. . . Barnaba C，Dellacassa E， Ni c olini G， et al. (2017) T argeted and untargeted high resolution massapproach for a putative profiling of glycosylatedsimple phenols in h y brid g r apes. Food Res. Int. 98：20-33. ) ( 3. R F uocco S， Stefanini M， Stanstrup J， et al.( 2 017) The metabolomic profile of red non-V.vinifera genotypes. Food Res. Int. 98：10-19. ) 4.Heywood D and Craven K. SONAR： DeliveringMS/MS Data from a DIA Experiment. WatersWhite Paper no. 720006033EN，July 2017. 扫一扫，关注沃特世微信 沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 上海：021-61562666 广州：020-28295999 Waters、Xevo、UNIFI 和The Science of What's Possible是沃特世公司的注册商标。SONAR是沃特世公司的商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 免费售后服务热线：800(400) 820 2676www.waters.com 使用Xevo G-XS QTof和SONAR数据非依赖型采集方法(DIA)改善红葡萄酒的定量分析 使用Xevo G-XS QTof和SONAR数据非依赖型采集方法(DIA)改善红葡萄酒的定量分析 本技术概要介绍了新型数据非依赖型采集(DIA)模式SONAR4,5的应用，采用这种模式，我们在Waters Xevo G2-XS QTof上获得了高选择性的HRMS谱图。本研究评估了该技术对红葡萄酒中三种已知酚类化合物(反式白藜芦醇、儿茶素和对-香豆素)的靶向定量性能，着重突出了SONAR采集模式的广泛适用性。