植物或真菌为原料的保健食品中有机磷农药检测方案(毛细管柱)

超星·期北京豫维科技有限公司联系人：水先生电话：18911849923 超星·期北京豫维科技有限公司联系人：水先生电话：18911849923GC 测定以植物或真菌为原料的保健食品中有机磷农药残留 胡磊，李樱红，周明昊(浙江省食品药品检验研究院，杭州 310004) 摘要：目的 建立保健食品中敌敌畏等16种有机磷农药残留的气相色谱测定方法，了解浙江市场上植物或真菌为原料的保健食品中有机磷农药残留情况。方法 用乙腈提取样品中农药残留，使用 Rtx-1701色谱柱分离目标物，使用带火焰光度检测器(FPD)的气相检测。结果 16种有机磷在0.1~2.0 mgL-内呈现良好的线性，定量限(S/N=10)均为 0.05 mgkg ，检出限(S/N=3)在 0.01~0.02 mgkg内，在 0.25，0.4， 1.0 mgkg-3 个添加浓度水平下，16种有机磷的加样回收率为75%~120%。市场抽样90批保健品，有机磷检出12批，检出率为13.3%。结论 该方法简单、快速、准确，适用于保健品中有机磷农药残留的检测。 关键词：保健食品；有机磷；农药残留；气相色谱法 中图分类类：R917 文献标志码： B 文章编号：1007-7693(2017)04-0563-04 DOI： 10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2017.04.019 Determination of Organophosphorus Pesticide Residue in Health Food with Plant or FungusasMaterials by GC HU Lei， LI Yinghong， ZHOU Minghao(Zhejiang Institute for Food and Drug Control， Hangzhou 310004， China) ABSTRACT： OBJECTIVE To develop a method for simultaneous determination of 16 kinds of organophosphoru pesticideresidues such as dichlorvos in health foods by gas chromatography， and investigate the situation of organophosphorus pesticideresidues in health food with plant or fungus materials in Zhejiang market. METHODSTarget analytes in samples wereextracted by acetonitrile， separated by column Rtx-1701， and detected by flame photometric detector. RESULTSTThe 16 kindsof organophosphorus pesticides showed good linear relationship in the range of 0.1-2.0 mg L， the limits of detection(S/N=3)were 0.01-0.02 mgkg， and the limits of quantification (S/N=10) were 0.05 mgkg. At the three levels of spiked samplesinclude 0.25， 0.4， 1 mg kg， the recovery rates ranged from 75% to 120%. Among the 90 samples from the market， 12 weredetected positive for the organophosphorus pesticide residue with a detection rate of 13.3%. CONCLUSION This method issimple， rapid and highly sensitive， it is suitable for the determination of 16 kinds of organophosphorus pesticides in health foods.KEY WORDS： health food； organophosphorus； pesticide residue； GC 有机磷农药是我国农药使用的主要品种，广泛应用于粮食、蔬菜、水果等农作物的病虫害防治。我国70%的有机磷杀虫剂是高毒、剧毒的，可经消化道、呼吸道及完整的皮肤和黏膜进入人体，吸收的有机磷农药在体内分布于各器官，其中以肝脏含量最多，也可侵入神经、生殖系统，严重危害人体健康2。有机磷农药残留是我国粮农产品健康安全的长期问题，也是食品安全的重要问题13-4]。随着对农药残留的重视，国家加大了对粮食、蔬菜、水果等农产品中有机磷的监管。保健食品作为一种可以补充营养物质和改善身体机能的特殊食品，由于其中大量的基础原料为植物或真菌性原料，所以也有农药残留的风险，在以往的保健品抽查中也发现相当部分样品存在农药残留的情况。本研究针对保健品中有机磷农残建立了一套快速、简便、准确的检测方法，并对浙 ( 作者简介：胡磊，男，硕士，主管药师 Tel：(0571)87180330 ) 江市场上的以植物或真菌为直接原料的保健品进行抽查，为相关部门的监管提供数据和技术支持。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 GC-2010plus 气相色谱仪(FPD检测器，，日本岛津公司)；R-300 旋转蒸发仪(瑞士步琦公司)； KQ-100超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。 敌敌畏等16种有机磷对照品(浓度均为100 ug*mL-)：敌舌畏(批号：GSB05-2298-2008)、乙酰甲胺磷(批号： GSB05-2322-2008)、甲基内吸磷(批号：SB05-052-2008)、甲拌磷(批号：GSB05-2294-2008)、久效磷(批号：： GSB05-2290-2008)、乐果(批号： GSB05-2286-2008)、、H甲基嘧啶磷(批号： GSB05-1872-2008)、毒死蜱(批号：GSB05-1869-2008)、马拉氧磷(批号：SB05-066-2008)、甲基对硫磷(批号：GSB05-2285-2008)、倍 超星·期北京豫维科技有限公司联系人：水先生电话：18911849923 硫磷(批号：GSB05-2299-2008)、马拉硫磷(批号：GSB05-2293-2008)、对硫磷(批号： GSB05-2284-2008)、杀扑磷(批号： GSB05-2295-2008)、克线磷(批号：GSB05-1876-2008)、乙硫磷(批号：GSB05-2292-2008)，均由农业部环境科学研究所提供。丙酮(色谱纯试剂， TEDIA 公司)，乙腈(色谱纯试剂，默克公司)。 1.2 方法 1.2.1 样品前处理 取样品研细，精密称称2g，加色谱级乙腈20 mL， 超声20min， 抽滤，滤液旋转蒸发至近干，氮气吹干，精密加入1mL色谱级丙酮溶解，0.22 u.m 滤膜过滤至进样瓶。 1.2.2 对照品溶液的配制 分别取16种有机磷对照品(100 ug*mL)0.5 mL至10.0 mL瓦瓶，丙酮定容(浓度为 5 ugmL-)，稀释并配制浓度为 0.1，0.2，0.5，1.0，2.0 ugmL-的有机磷标准系列溶液。 1.2.3 气相色谱条件 色谱柱： Rtx-1701(30m×0.25 mm， 0.25 um)；进样口温度：250℃；检测器温度：250℃；升温程序：初始柱温140℃，保持2min，以5℃·min升温至210℃，保持2min， 再以2℃·min升温至245℃；载气：高纯N2；洗脱方式：恒流，流速1.0 mL·min；进样方式：分流(分流比5：1)；进样量：1pL。 1.2.4 有机磷农药残留阳性验证 阳性验证采用双柱定性方法，即在另外一根极性不同的气相色谱柱上分析对照品及样品，如果双柱测试中对照品与样品相应物质的色谱峰保留时间均一致，则认为该农药残留检出。 验证仪器与色质谱条件： GC-2010plus 岛津气相色谱仪(带FPD检测器)；色谱柱： HP-1(30 m×0.25 mm， 0.25 um)；进样口温度：250℃，检测器温度：310℃；升温程序：初始柱温140℃，保持2min，以5℃·min升温至300℃，保持2 min；载气：高纯Nz；洗脱方式：恒流，流速1.0mL·min；进样方式：分流(分流比5：1)；进样量：：1pL. 2 结果与讨论 2.1 提取溶剂的选择 有机磷农药的溶剂主要有丙酮、乙腈、乙酸乙酯等，丙酮的溶解性最好，但渗透性不如乙腈，直接提取回收率不高，乙酸乙酯提取结果杂质较多，干扰气相测定，乙腈提取农药残留效果好，但对气相色谱柱填料有伤害，且在汽化室膨胀系数大，所以最后选定乙腈提取，采用丙酮进行气 相分析。 2.2 提取条件的选择 超声提取5，10， 20， 30 min 后，超声温度控制室温(25℃)，30，35，40℃考察提取效率，发现超声时间增至20 min 后提取回收无明显变化，而随着超声温度增加回收率有略微降低趋势，所以选定25℃超声 20 min。 2.3 色谱条件的选择 参考 GB/T 5009.145-2003和NY/T 761-200816J分别另HP1， HP5， Rtx1701， DB624， HP-Innowax进行比较，并对升温程序进行优化，最后发现Rtx1701分离效果最好，混合对照品色谱图见图1。 图1 有机磷混合对照品色谱图 1-敌敌畏；2-乙酰甲胺磷；3-甲基内吸磷；4-甲拌磷；5-久效磷；6-乐果；7-甲基嘧啶磷；8-毒死蜱；9-马拉氧磷；；10-甲基对硫磷；11-倍硫磷；：112-马拉硫磷；13-对硫磷；14-杀扑磷；15-克线磷；16-乙硫磷。 ( Fig . 1Chromatogram of a mixture of organophosphorus standards ) ( 1 - d ichlorvos； 2 -acephate； 3-metasystox； 4-phorate； 5 -a zodrin；6-dimethoate； 7 -pirimiphos m e thyl； 8 -c hlorpyrifos； 9 - malaoxon； 10-methyl pa rathion； 1 1-fenthion； 1 2 -malathion； 1 3 -parathion； ) 14-methidathion； 15-nemacur； 16-ethion. 阳性验证色谱柱不需要将对照品完全分开，经过优化，挑选 HP-1弱极性色谱柱，阳性验证混合对照品色谱图见图2。 图2 阳性验证色谱图 1-敌敌畏；2-乙酰甲胺磷；3-甲基内吸磷；4-久效磷；5-甲拌磷；6-乐果；7/8-甲基对硫磷和马拉氧磷；9-甲基嘧啶磷；10-马拉硫磷；11-倍硫磷；12-对硫磷；13-毒死蜱；14-杀扑磷；15-克线磷；16-乙硫磷。 ( Fig.2 Chromatogram of positive verification test ) ( 1-dichlorvos； 2-acephate； 3-metasystox； 4 -azodrin； 5- phorate；6-dimethoate； 7/8-methyl parathion and malaoxon； 9-pirimiphosmethyl； 1 0-malathion； 1 1-fenthion； 1 2-parathion； 1 3-chlorpyrifos； 14-methidathion； 15-nemacur； 16-ethion. ) 2.4 实验方法评价 2.4.1 线性关系和回收率 16种有机磷混合对照品系列溶液按选定色谱条件进行 GC分析，以保留时间定性，以峰面积对浓度绘制工作曲线，结果表明，在0.1~2.0 ug*mL-内线性关系良好，见表1. 选取有机磷空白试样，分别添加对照品，使添加浓度为0.25，0.4，1.0mgkg (其中乙酰甲胺磷添加水平分别为 0.75，1.2， 2.0 mgkg )， 每种添加水平重复3次，按供试品方法同法处理，加样回收率在75%~120%之间，回收率良好，结果见表2. 2.4.2 重复性试验 取产自云南某厂的螺旋藻片(毒死蜱阳性样品)6份，按“1.2.1”项下方法处理，进样分析，测出毒死蜱平均含量为 0.158 mgkg ，RSD为2.9%，表明重复性良好。 2.4.3 检出限和定量限 称取“螺旋藻片”样品2g，加入16种有机磷混合对照品适量，按样品处理方法处理。进样分析，检出限按 S/N=3折算，结果见表3。 称取“螺旋藻片”样品2g，加入16种有机磷混标适量，按样品处理方法处理。进样分析后，各对照品均有出峰， S/N≥10，满足定量限要求，所以本实验有机磷农残定量限定为 0.05 mgkg 。 表116种有机磷线性方程 Tab. 1 The regression equations of 16 organophosphoruscompounds 项目 线性方程 相关系数 敌敌畏 v=967 961x+11 509 0.9990 乙酰甲胺磷 y=2 666 049x-1805224 0.991 9 甲基内吸磷 y=1368 835x-86 324 0.9961 甲拌磷 y=1 957 027x-71 293 0.9985 久效磷 v=1019890x-168119 0.993 4 乐果 v=2 166 468x-217360 0.995 5 甲基嘧啶磷 v=1 739 360x-100 306 0.9940 毒死蜱 y=1 530 874x-81 914 0.993 6 马拉氧磷 v=221456x-40514 0.9943 甲基对硫磷 v=1 732 251x-128 491 0.9921 倍硫磷 v=1 863 758x-108298 0.993 2 马拉硫磷 v=1398 354x-123 233 0.991 9 对硫磷 v=1 863 909x-152 148 0.993 8 杀扑磷 v=1 667 726x-114 613 0.990 8 克线磷 v=967 448x-133290 0.9922 乙硫磷 v=3 126833x-259 551 0.9938 表2 16种有机磷的加样回收率 Tab.2 The recovery ratios)Sof 116organophosphoruscompounds in spiked samples 项目 低浓度/ 中浓度/ 0.25 mgkg' 0.4 mgkg 高浓度/1.0 mgkg 回收率 RSD/% 回收率 RSD/% 回收率/% RSD/% 7% 敌敌畏 80.8 3.25 103.1 2.03 106.8 2.26 乙酰甲胺磷 98.4 2.68 82.3 2.24 75.7 3.68 甲基内吸磷 87.0 4.14 103.1 3.57 88.8 0.37 甲拌磷 77.3 1.98 82.6 1.56 98.3 4.16 久效磷 98.2 1.95 96.6 0.90 76.5 3.52 乐果 84.9 2.36 89.2 0.76 85.9 2.65 甲基嘧啶磷 85.9 2.77 106.0 4.27 85.3 3.39 毒死蜱 83.5 1.75 100.5 3.55 82.5 4.97 马拉氧磷 115.6 2.83 120.6 2.78 79.9 4.29 甲基对硫磷 90.1 2.69 94.6 2，23 86.5 0.65 倍硫磷 91.4 3.29 107.4 3.31 88.6 1.46 马拉硫磷 94.5 3.65 86.9 3.96 91.6 2.23 对硫磷 95.6 4.37 109.6 2.83 89.7 2.78 杀扑磷 80.5 4.56 86.6 2.42 104.9 3.13 克线磷 115.4 3.67 117.1 3.55 89.0 4.40 乙硫磷 93.6 3.36 85.1 4.19 77.6 3.49 表3116种有机磷农残检测限 Tab. 33The limits of detetion for organophosphoruscompounds 项目 检出限/mgkg 敌敌畏 0.01 乙酰甲胺磷 0.02 甲基内吸磷 0.01 甲拌磷 0.01 久效磷 0.02 乐果 0.02 甲基嘧啶磷 0.01 毒死蜱 0.01 马拉氧磷 0.02 甲基对硫磷 0.02 倍硫磷 0.01 马拉硫磷 0.02 对硫磷 0.01 杀扑磷 0.02 克线磷 0.02 乙硫磷 0.01 2.4.4 稳定性考察 取添加浓度为 0.4 mgkg的回收率考察样品按样品处理方法处理每8h测定1次，共测6次，16种有机磷6次测定结果 RSD 均<3%， 表明本法测定在48 h 内稳定。 2.5 乙酰甲胺磷检测的问题及分析 在实验中发现，16种有机磷中乙酰甲胺磷峰响应不正常，其对照品峰初始分析时响应偏低，精密度和线性均不好，然后过某一个节点时，响应突然增加，精密度和线性回复正常，若干次分析过后，其响应又变低至与初始进样分析时相似，分析其中原因，推测为乙酰甲胺磷容易被系统(衬管，色谱柱等)吸附，初始进样呈现不正常，而后系统被高浓度的乙酰甲胺磷饱和之后而响应正常，然而如果此时再分析的样品基质干净，或者分析不含该物质的对照品甚至空白，系统呈现去饱和效应而信号响应再次呈现不正常状态，所以分析乙酰甲胺磷时需注意先使用高浓度的自身对照品或复杂的样品基质处理液预试以饱和整个系统，分析若干次后发现信号响应值偏离过大，需要再次按上述方法饱和系统后实验。 2.6 方法的应用 从浙江省市场上购买了不同品牌的以植物或真菌为原料的保健品进行这16种有机磷检测，共90批，抽样范围覆盖浙江11个地市，采样点有超市、商场、药店，产地来源有北京、广东、浙江、江苏、上海、云南等，其中12批检出有机磷残留并经过阳性验证，阳性率为13.3%，均为检出毒死蜱，编号1~12的检品含量分别为 0.534， 0.062，0.085，0.057，0.074，0.132，0.067，0.055，0.084，0.113，0.073，0.092 mgkg，样品典型色谱图见图3。 图 3 样品典型色谱图 1-毒死蜱。 Fig.3 The typical chromatogram of sample1-chlorpyrifos. 现有国家标准及法规并未对保健食品中农药残留做出规定，但在 GB 2763-2016食品安全国家标准食品中农药最大残留限量中对有机磷在蔬菜，水果，谷物中的最大残留量做了规定，以植物和真菌为原料的保健品，如螺旋藻、灵芝孢子粉、虫草菌丝粉、茶等，功能覆盖比较广，能提高免疫力，调节胃肠道功能，降血糖，降血脂等，使用人群较多，是保健食品中的大类，所以需要重视这种来源保健品的危害性。 3 结论 本方法建立了保健品中敌敌畏等16种有机磷的测定方法及阳性验证方法，该法简单便捷，回收率和重复性良好，适用于保健食品，药品以及含水量低基质均匀的食品的有机磷农残检测，具有较高的实际应用价值，并对浙江市场上以植物或真菌为原料的保健品进行抽查，发现13.3%的阳性检出率。希望本研究建立的检测方法和监测数据能为相关监管部门提供数据和技术支持。 ( REFERENCES ) ( [1] SU J F ， ZHAO J H ， X I ONG C. 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