牛奶 奶粉中葡萄糖 果糖 乳糖 麦芽糖等八种糖类化合物检测方案(液相色谱柱)

ACQUITYUPLC-ELST测定奶粉和牛奶中种糖的含量’引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163| 70 称取2.0g奶粉样品或5 mL液态奶样品，加入20mL(对于液态奶添加15ml)1/1 的乙腈水溶液溶解，手摇震荡混匀，然后均质混匀2分钟，室温下8000 r/min 离心15分钟，取上清液过0.2 pm滤膜；对于某些样品由于糖含量很高，所以过滤后的样品可能需要用乙腈/水=70/30的溶液稀释一定倍数后，进样检测。 色谱条件 液相系统： 沃特世ACQUITY UPLC配ACQUITY ELSD蒸发光检测器 色谱柱： ACQUITY UPLC BEH Amide 2.1x100mm， 1.7 um 柱温： 35℃ 分析时间： 18 min 进样量： 5uL(样品进样2uL) 流动相： A： 水 B： 0.2%TEA乙腈溶液；梯度洗脱 弱洗溶剂： 乙乙/水=90/10，800pl 强洗溶剂： 乙腈/水=10/90，500pL 进样方式： 不充满定量环(使用针溢出) ELSD条件： 增益： 500 数据率： 10 pps 喷雾器模式： 冷却 漂移管温度： 55C 气体压力： 30psi 实验室试验温度： 20℃ 实验室试验湿度： 45% 工作电源： 220V稳定电源 梯度： 结果 标准配制 八种糖标准分别称取10mg，用1/1的乙腈水定容1 ml，然后用乙腈/水=70/30的溶液稀释配制各个浓度的标准品，进行实验。 八种糖UPLC分离检测色谱图及数据 图1.8种糖UPLC分离检测色谱图。 图1是八种糖50 ppm混合标准品用UPLC(ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱)分离，ELSD检测的色谱图，按照保留时间顺序分别是： Fructose(果糖)、Sorbose(山梨糖)、Glucose(葡萄糖)、Sucrose(蔗糖)、Maltose(麦芽糖)、Lactose(乳糖)、Maltotriose(麦芽三糖)、Maltotetraose(麦芽四糖)；包括5种单糖和3种多糖。有关数据见下表。 保留 面积 峰类 USP 名称 时间 (微伏* %面积 高度 分离 s/n (分钟) 秒) (微伏) 型 度 Fructose 5.745 346696 7.83 53883 找到 58 Sorbose 5.995 529662 11.96 97981 找到 1.6 106 Glucose 6.704 418246 9.45 53922 找到 4.0 58 Sucrose 8.041 1117350 25.24 335744 找到 9.0 363 Maltose 8.529 476565 10.77 96141 找到 4.7 104 Lactose 8.690 716329 16.18 193308 找到 1.5 209 Maltotriose 9.624 492501 11.13 138706 找到 9.9 150 Maltotet- raose 10.399 329529 7.44 98605 找到 8.5 107 表1.8种糖标准品分离分析数据。 其中较难分离的Fructose(果糖)和Sorbose(山梨糖)、Maltose(麦芽糖)和Lactose(乳糖)均分别达到1.6、1.5的分离度。 液相系统： 沃特世ACQUITY UPLC®配ACQUITY ELSD蒸发光检测器色谱柱： ACQUITY UPLC BEH Amide 2.1 x 100mm, 1.7 μm柱温： 35 ˚C分析时间 ： 18 min进样量： 5 μL(样品进样2 μL)流动相： A：水 B：0.2% TEA乙腈溶液;梯度洗脱弱洗溶剂： 乙腈/水=90/10, 800 μL强洗溶剂： 乙腈/水=10/90, 500 μL进样方式： 不充满定量环(使用针溢出)