啤酒中氨基酸检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163啤酒生产中的氨基酸 简介 游离氨基酸可作为营养物、代谢中间产物或废物存在于生物过程中，可以用于鉴别植物的基因型和来源。通过类似的方式，氨基酸还可以用来将某一特征与高价值食品中有价值的特性相关联。在生产流程中和生产流程之后对游离氨基酸进行监测，可以鉴别和控制影响产品质量的生理机能。 为了举例说明该应用，我们跟踪了啤酒生产过程中的酵母发酵。通过对三种不同起始发酵大麦麦芽进行游离氨基分析，展示了原材料的特点。然后让这些不同的麦芽分别完成发酵流程，并在发酵的各个阶段观察游离氨基酸水平的变化。 样品处理 起始大麦麦芽 1.二棱浅色麦芽；六棱浅色麦芽；二棱皮尔斯尼麦芽 2.从麦芽的早期悬液中采集样品，并在分析前储存于-80℃下。 3.将每份样品解冻后，在16110RCFxg下离心一分钟，然后用0.1 M HCL按1：10稀释上清液。 4.衍生化体积：70pL硼酸盐缓冲液，10pL稀释样品， 20 pL AccQ·TagI"Ultra试剂 酿造发酵 1.样品：初始、24小时、第4天和一级发酵结束 2.在一级发酵期间以一定间隔从发酵罐采集样品，分析前将样品储存于-80℃下。 3.将每份样品解冻后，在16110RCFxg下离心一分钟，然后用0.1MHCl按1：10稀释上清液。 4.衍生化体积：70pL硼酸盐缓冲液，10pL稀释样品， 20 pLAccQ·TagUltra试剂 市售淡色麦芽 1.两种品牌的淡色麦芽分别取两个批次 2.12 oz.瓶中采集样品，并在分析前储存于-80℃下。 3.将每份样品解冻后，在16110RCFxg下离心一分钟，然后用0.1 M HCl按1：10稀释上清液。 4.衍生化体积：50pL硼酸盐缓冲液，10uL稀释样品， 20 pL 0.1 M NaOH(用于中和过量的酸) 5.20pL AccQ·Tag Ultra试剂 样品衍生化 衍生化试剂在最佳PH值8.5下与伯胺和仲胺反应。在瓶盖盖紧的情况下，批次衍生化样品可在室温下最多稳定保存一周。沃特世UPLC氨基酸分析解决方案系统指南(部件号71500129702)详细介绍了柱前衍生化和分析的条件。 系统： ACQUITY UPLC 色谱柱： AccQ·Tag Ultra， 1.7 um， 2.1×100 mm 柱温： 60℃ 样品温度： 20℃ 流速： 700pL/min：流动相A： AccQ·Tag Ultra洗脱液A按1：10稀释于Milli-Q水中流动相B： AccQ·Tag Ultra洗脱液B：弱洗针液 95：5水/乙腈 强洗针液 5：95水/乙腈 梯度： AccQ·Tag Ultra细胞培养液法(在UPLC氨基酸分析 解决方案中提供) 总运行时间： 9.5min 进样体积： 1uL，益溢出的部分定量环进样 检测： UV(TUV)， 260 nm 图1.不同起始大麦麦芽之间的氨基酸差异。 图2.(A)采用UPLC氨基酸分析解决方案，啤酒及级发酵过程中不同阶段的氨基酸水平。(B)放大区域显示了发酵过程中呈时间依赖性的变化。 图3.两种市售淡色麦芽的不同游离氨基酸特征。箭头指示品牌间的显著差异。 第1批 第2批 氨基酸 平均值 标准偏差 平均值 标准偏差 His 81.25 0.85 91.40 1.35 Asn 18.83 0.69 19.18 0.46 Ser 12.45 0.91 11.55 0.62 Arg 5.94 0.46 4.49 0.26 Gly 156.58 3.02 169.21 1.43 EA 146.13 2.40 156.45 4.50 Asp 16.42 1.27 14.11 0.22 Glu 49.06 1.47 49.22 0.40 Thr 5.58 1.61 3.54 0.12 Ala 357.08 6.09 342.39 1.89 GABA 475.44 8.68 487.51 2.22 Pro 3479.25 42.23 4091.81 14.83 Orn 36.70 1.26 45.19 0.34 Cys 41.75 0.52 46.05 0.39 Tyr 100.27 1.99 99.40 0.39 Met 13.12 1.64 12.91 2.13 Val 101.21 1.73 73.73 0.76 lle 12.87 0.39 9.49 0.34 Leu 26.03 0.41 19.58 0.31 Phe 41.36 0.55 34.08 0.29 Trp 104.12 1.88 107.50 1.17 表1.同品牌淡色麦芽的批次间差异性。这些值(以pmol/plL样品表示)包括两种衍生化产物的三次进样。 描述 部件号 氨基酸分析试剂盒 176001235 AccQ·Tag Ultra色谱柱， 1.7 pm， 2.1×100 mm 186003837 LCMS认证样品瓶 WATO88122 [ 参考资料：沃特世寺用资料N◎沃特世公司。Waters、 ACQUITY UPLC和UPLC是沃特世公司的注册商标。AccQ·Tag是沃特世公司的商标。其他所有商标均归各自的拥有者所有。[ LC条件系统： ACQUITY UPLC®色谱柱： AccQ•Tag Ultra, 1.7 μm, 2.1×100 mm柱温： 60 ˚C样品温度： 20 ˚C流速： 700 μL/min流动相A： AccQ•Tag Ultra洗脱液A按1:10稀释于Milli-Q水中流动相B： AccQ•Tag Ultra洗脱液B弱洗针液： 95:5水/乙腈强洗针液： 5:95水/乙腈梯度： AccQ•Tag Ultra细胞培养液法(在UPLC氨基酸分析解决方案中提供)总运行时间： 9.5 min进样体积： 1 μL，针溢出的部分定量环进样检测： UV (TUV)，260 nm