尿液中胱氨酸检测方案(离子色谱仪)

离子色谱安培法测定尿液中的胱氨酸 刘慧 潘广文李仁勇赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 胱氨酸，尿液，安培检测，离子色谱 目标 采用离子色谱电化学法检测尿样中的胱氨酸，方法简单，灵敏度高，胱氨酸检出限为0.05 mg/L。线性回归系数达0.9999，且样品加标回收率良好。 引言 胱氨酸是体内结石的标志物，现在检测方法大多使用液相衍生的方法，操作复杂。胱氨酸在碱性条件下会水解为半胱氨酸，半胱氨酸为人体内氨基酸，因此不能用常规氨基酸分析条件检测。而且采用液相方法测定时，半胱氨酸和胱氨酸不能分离，出峰完全重叠。使用 CS17 色谱柱分离，半胱氨酸和胱氨酸可以完全分开，不会造成检测的假阳性，且检出限可达到 ppb级。 仪器 Thermo ScientificM DionexMICS-5000* 离子色谱系统， 包括-ICS-5000* DP高压泵-ICS-5000* DC 检测器 Thermo Scientific Dionex AS-AP自动进样器 去离子水 (Thermo Scientific GenPure Pro UV-TOC，P/N： 50131948) 盐酸(Fisher Scientific P/N A466-500) 50%氢氧化钠溶液 (Fisher Scientific P/N 380215000) L-胱氨酸(Fisher Scientific P/N 111801000) 耗材 Thermo Scientific Target2 Nylon Syringe Filters (0.45 pm， 30 mm，P/N F2500-1) Thermo Scientific DionexM OnGuard II RP柱 (P/N 057084) 一次性使用无菌注射器，1mL(上海米沙瓦医科工业有限公司) 标准溶液制备 准确称取一定量(精确精0.001 g)的L-胱氨酸配制成浓度均为1.000 g/L 的胱氨酸标准品储备液。取上述标准品储备液配制含亚硝酸根的浓度分别为 0.1 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、5.0 mg/L的标准溶液。 样品溶液制备 取990L尿样于10mL容量瓶中，加入10L盐酸，摇匀后加入去离子水至刻度线，摇匀。过OnGuard II RP柱，弃去初滤液5mL， 收集后续滤出液。将滤出液稀释20倍后进样分析。 图1.胱氨酸标准溶液色谱图(色谱峰1-胱氨酸) 配制不同浓度的标准溶液，从低到高浓度依次进样，每个浓度进样3针。以离子浓度(mg/L)为横坐标，以峰面积的平均值为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表1。线性范围宽，线性相关系数良好，满足定量分析需要。 表1胱氨酸的线性范围、标准工作曲线、方法定量限和精密度 名称 线性范围(mgL") 线性方程(mgL) L0Q(mgL-1) RSD (%)(n=5) 名称 测得量(mg/L) 加标量(mg/L) 加标后含量 (mg/L) 回收率% 胱氨酸 0.1~5.0 Y=6.0333X+0.0732 99.99 0.1 2.02 尿液 0.388 0.5 0.928 108% 样品测定 为确定本方法的回收率和精密度良好，设计以下实验方案：测定尿液中胱氨酸的含量，并在样品中添加胱氨酸的标准溶液进行回收率试验。试验结果见表2。样品加标谱图见图2。 表2.样品测定结果及加标回收率实验 图2.尿液样品加标实验色谱图 采用离子色谱电化学法检测尿样中的胱氨酸，方法简单，灵敏度高，胱氨酸检出限为 0.05 mg/L。 ( [1] Petr Jandi k ， Jun Cheng， J ovan Evrovski， S i multaneous analysis of homocysteine and m e thionine in pl a sma. J. Chromatogr. B 759 (2001)145-1 ) ThermoFisherSCIENTIFIC AN_C_IC-