鸡肉中磺胺类药物残留检测方案(超临界色谱)

SSL-CA14-334Excellence in Science Excellence in ScienceSFE-SFC-004 咨询电话：021-22013542上海市淮海西路570号红坊E楼http：//www.shimadzu.com.cn Nexera UC 系统在鸡肉中磺胺类药物残留检测的应用 SFE-SFC-004 摘要：本实验使用岛津 Nexera UC Online-SFE-SFC-MS 系统建立了鸡肉中磺胺类药物残留检测的分析方法，选择Shim-pack UC-X SIL 色谱柱，甲醇作为改性剂，通过优化改进剂比例获得最佳分离效果。分析结果显示，13种磺胺类药物 SFE 的萃取率在 50.18~63.52%之间，稳定性考察中，保留时间和峰面积的相对标准偏差在 0.041~0.095%和6.789~11.830% 之间。磺胺邻二甲氧嘧啶和磺胺间二甲氧嘧啶在5~100 ng范围内，其余磺胺类药物在5~200 ng 范围内线性良好，相关系数R大于0.995，加标回收率在 77.3%-117.1%之间。 关键词： Nexera UCSFE-SFC-MS 磺胺类药物残留鸡肉 磺胺类药物是农业生产中常用兽药。农业生产中常以亚治疗浓度的药物做为饲料添加剂来预防疾病的发生，提高饲料的转化率和促进动物生长，其中常用的就有十几种。其不合理的使用很容易造成耐药菌增加，而且动物性食品中残留的药物可能对人体的健康造成潜在的危害。 超临界二氧化碳具有低极性、高扩散等特点，将超临界二氧化碳流体作为萃取溶剂进行超临界流体萃取 (Supercritical Fluid Extraction， SFE)， 可以大大缩短萃取时间，并且与当前使用的溶剂萃取法相比，具有使用溶剂少、环保的特点。 本文采用岛津Nexera UC Online-SFE-SFC系统，建立了动物源性食品中磺胺类药物残留的分析方法，该方法具有萃取效率高、重复性好、节省溶剂和操作时间、自动化程度高等特点。 萃取流速：5 mL/min萃取剂又例： A/B-90/10(v/v) 静态萃取：4 min 实验部分 1.1仪器 Nexera UC 系统 具体配置为： LC-30ADSF(CO，输液泵)， LC-20ADXR(输液泵，含 LPGE低压梯度比例阀)， LC-20AD(补偿液输送泵)， DGU-20A，(在线脱气机)， SFE-30A(超临界流体萃取单元)， SIL-30AC(自动进样器，5 pL定量环)，CTO-20AC( 柱温箱)， SFC-30A×2(背压调节单元)， CBM-20A(系统控制器)， LCMS-8050(三重四极杆质谱仪)，LabSolutions Ver 5.86( 色谱工作站)。 图1 NNeexxera UC Online SFE-SFC-MS 系统 1.2 SFE 萃取条件 萃取剂： A-scCO；；B-MeOH 动态萃取：3 min 萃取温度： 45℃ 1.3 SFE 色谱条件 补偿液流速：0.2mL/min 色谱柱：Shim pack UC-X SIL 4.6 mm I.D.x 250 mm L.， 5 um 流动相： A-scCO； B-甲醇 流动相流流：3mL/min 质谱补偿液：20mM乙酸铵甲醇溶液 柱温：32℃背压： A-15 MPa；B-40 MPa洗脱方式：梯度洗脱， 10%B(7 min)-20%B(17 min)-40%B(19-20 min)**7 min 之前为SFE 提取过程 1.4目标分析物 表11磺胺类药物质谱参数 结果讨论 2.1标准品的色谱图 (x1，000，000) 图2磺胺类药物色谱图(20 ng， 5 min-27.5 min， 图中峰号依次对应为：1磺胺嘧啶，2磺胺吡啶，3磺胺甲基嘧啶，4磺胺甲噻二唑，5磺胺二甲嘧啶，6磺胺氯哒嗪，7磺胺邻二甲氧嘧啶，8磺胺间二甲氧嘧啶，9磺胺甲恶唑，10磺胺喹噁啉，11磺胺甲氧哒嗪，12磺胺间甲氧嘧啶，13磺胺对甲氧嘧啶) 2.2标准曲线 本实验中针对13种磺胺类药物建立了分析方法，具体化合物信息如表1所示。取磺胺类标准品，用甲醇做溶剂，稀释成系列浓度样品加入萃取罐中进行分析，采用磺胺间二甲氧嘧啶 -D3为内标(50 ng)，建立标准曲线。标准曲线线性关系良好，相关系数均大于0.995，标准曲线准确度在90.5%-115.2%之间。 表2标准曲线及相关系数 N0. 名称 线性范围 线性方程 相关系数 Accuracy (ng) (%) 1 磺胺嘧啶 5-200 Y=(0.0944151)X+(0.000698749) 0.9997 95.9-103.5 2 磺胺吡啶 5-200 Y=(0.194423)X+(0.00119763) 0.9991 93.6-103.0 3 磺胺甲基嘧啶 5-200 Y=(0.191910)X+(-0.00154979) 0.9993 95.9-107.8 4 磺胺甲噻二唑 5-200 Y=(0.159397)X+(-0.00575447) 0.9982 91.0-115.2 5 磺胺二甲嘧啶 5-200 Y=(0.380121)X+(0.00703148) 0.9965 92.9-110.0 6 磺胺甲氧哒嗪 5-200 Y=(0.0877322)X+(0.00199301) 0.9998 96.4-103.5 7 磺胺氯哒嗪 5-200 Y=(0.112623)X+(0.000409920) 0.9994 93.7-104.5 8 磺胺邻二甲氧嘧啶 5-100 Y=(0.565106)X+(-0.000880027) 0.9996 96.8-106.0 9 磺胺间二甲氧嘧啶 5-100 Y=(0.494316)X+(0.00859373) 0.9998 96.4-102.8 10 磺胺甲恶唑 5-200 Y=(0.0958925)X +(0.000938959) 0.9997 96.4-105.5 11 磺胺喹噁啉 5-200 Y=(0.0726394)X+(-6.23389e-005) 0.9992 93.7-105.4 12 磺胺间甲氧嘧啶 5-200 Y=(0.276390)X+(9.59051e-005) 0.9993 94.9-103.3 13 磺胺对甲氧嘧啶 5-200 Y=(0.192781)X+(-0.00281988) 0.9977 92.8-109.1 图3部分磺胺类物质标准曲线 2.3重复性 取5个萃取罐加入相同量的磺胺类混合标样，考察Online SFE-SFC-MS分析的重复性，结果如表3所示。分析结果表明， Online SFE-SFC-MS 分析磺胺类物质时，保留时间和峰面积的相对标准偏差在 0.041~0.095%和6.789~11.830%之间。 表331保留时间和峰面积重复性(n=5) N0. 化合物名称 重复性 (RSD/%) 保留时间 峰面积 1 磺胺嘧啶 0.061 9.247 2 磺胺吡啶 0.059 10.611 3 磺胺甲基嘧啶 0.071 9.234 4 磺胺甲噻二唑 0.041 11.830 5 磺胺二甲嘧啶 0.062 10.309 6 磺胺甲氧哒嗪 0.060 9.664 7 磺胺氯哒嗪 0.062 11.349 8 磺胺邻二甲氧嘧啶 0.078 9.082 9 磺胺间二甲氧嘧啶 0.086 10.187 10 磺胺甲恶唑 0.073 10.123 11 磺胺喹噁啉 0.071 9.089 12 磺胺间甲氧嘧啶 0.058 11.481 13 磺胺对甲氧嘧啶 0.044 9.491 2.4回收率 称取空白鸡肉样品0.5 g， 加入各磺胺类药物 100 ng 和内标50ng， 加入1g吸水剂与样品充分混合后，装入萃取罐进行分析，加标回收率如表4所示。由表可知，样品加标回收率在77.3%-117.1%之间，相对标准偏差在2.17%-12.91%，能够满足样品定量分析的要求。 表4加标回收率(n=3) N0. 名称 平均回收率/% 相对标准偏差/% 磺胺嘧啶 77.3 8.15 2 磺胺吡啶 79.1 7.88 磺胺甲基嘧啶 104.5 6.34 4 磺胺甲噻二唑 116.5 5.21 磺胺二甲嘧啶 91.7 5.97 磺胺甲氧哒嗪 99.4 3.97 7 磺胺氯哒嗪 87.9 9.43 磺胺邻二甲氧嘧啶 117.1 2.17 磺胺间二甲氧嘧啶 94.8 5.57 10 磺胺甲恶唑 75.3 6.07 11 磺胺喹噁啉 92.4 8.94 12 磺胺间甲氧嘧啶 89.1 10.51 13 磺胺对甲氧嘧啶 78.9 12.91 2.5萃取效率 为考察设定条件下 SFE 对磺胺类药物的萃取效率，通过重复对同一萃取罐内容物进行多次 SFE-SFC-MS联用分析(如图4)，计算各化合物萃取率并记录于表5，每次萃取化合物峰面积对多次萃取的峰面积和做比表示萃取率。 表5磺胺类药物萃取效率(%) N0. 名称 第一次 第二次 第三次 第四次 磺胺嘧啶 59.61 32.38 6.93 1.09 2 磺胺吡啶 61.62 30.82 6.54 1.02 3 磺胺甲基嘧啶 59.16 32.92 6.91 1.02 4 磺胺甲噻二唑 50.18 35.40 11.39 3.04 5 磺胺二甲嘧啶 60.80 31.91 6.35 0.95 6 磺胺甲氧哒嗪 61.33 31.08 6.57 1.01 7 磺胺氯哒嗪 61.22 31.24 6.57 0.96 8 磺胺邻二甲氧嘧啶 60.63 31.85 6.63 0.89 9 磺胺间二甲氧嘧啶 63.52 29.68 5.95 0.85 10 磺胺甲恶唑 58.54 32.79 7.48 1.18 11 磺胺喹噁啉 61.21 31.72 6.19 0.89 12 磺胺间甲氧嘧啶 60.78 31.79 6.43 1.00 13 磺胺对甲氧嘧啶 59.41 33.06 6.49 1.03 图4SFE萃取效率考察 (图示依次为第一次萃取、第二次萃取、第三次萃取和第四次萃取) 结论 本文使用岛津 Nexera UC Online SFE-SFC-MS 系统建立了鸡肉中磺胺类药物残留检测的分析方法，该方法实现样品前处理(SFE)和样品分析(SFC)在线联用，简化了鸡肉样品的前处理过程。Online SFE-SFC-MS分析方式可以磺胺类药物残留检的快速检测手段，该方法可为生产行业、检验行业及部门提供参考。 岛津全球应用技术开发支持中心 本解决方案使用岛津Nexera UC Online-SFE-SFC-MS系统建立了鸡肉中磺胺类药物残留检测的分析方法，选择Shim-pack UC-X SIL 色谱柱，甲醇作为改性剂，通过优化改进剂比例获得最佳分离效果。分析结果显示，13种磺胺类药物SFE的萃取率在50.18～63.52%之间，稳定性考察中，保留时间和峰面积的相对标准偏差在0.041～0.095%和6.789～11.830%之间。磺胺邻二甲氧嘧啶和磺胺间二甲氧嘧啶在5~100 ng范围内，其余磺胺类药物在5~200 ng范围内线性良好，相关系数R大于0.995，加标回收率在77.3%-117.1%之间。