猪肉中磺胺类药物检测方案(固相萃取仪)

SINEO新仪IGASSPE-005-201711 SPE-005-201711 海能仪器：全自动机械臂固相萃取仪-高效液相色谱法检测猪肉中13种磺胺类药物残留量 1前言 近年来，越来越多的研究结果表明，磺胺类药物特别是磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲基异恶唑等残留对人体的危害主要表现为“致癌、致畸、致突变"作用，引起过敏、中毒和导致耐药性菌株产生，以及引起造血系统障碍、急性溶血性贫血、粒细胞缺乏症、再生障碍性贫血等。加强磺胺残留的检测及监控是控制兽药残留发生的重要措施之一。采用海能全自动固相萃取仪-高效液相色谱法进行检测动物源性食品中磺胺类药物残留，有效的缩短样品中目标物的固相净化所需要的时间，提高了工作效率，也节约了人力；且能精准的控制上样、淋洗、洗脱等溶剂流速，提高了样品目标物的回收率。 2仪器与试剂 2.1 仪器 SPE400 全自动机械臂固相萃取仪； HN200多功能氮吹仪；高效液相色谱仪；绞肉机；粉碎机；分析天平；离心机；其他常规玻璃仪器；滤膜(有机相，0.22um)。 SPE 400 全自动机械臂固相萃取仪 2.2试剂及耗材 实验用水应符合 GB/T6682 中三级用水的规格，使用试剂除特殊说明外，均为分析纯。 乙酸乙酯(色谱纯)；乙腈(色谱纯)；甲醇(色谱纯)；盐酸、正己烷、甲酸(色谱纯)、氨水。 MCX柱： 60mg/3ml，或者相当。 0.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水溶解并稀释至1000mL。 0.1%甲酸乙腈溶液：取0.1%甲酸830mL，用乙腈溶解并稀释至1000mL。 洗脱液：取氨水5mL，用甲醇溶解并稀释至100mL。 0.1mol/L盐酸溶液：取盐酸0.83mL，用水溶解并稀释至100mL。 50%甲醇乙腈溶液：取甲醇50mL，用乙腈溶解并稀释至100mL。 3实验方法 3.1取样 取适量新鲜或解冻的供试组织，采用绞碎机绞碎，并用粉碎机将其粉碎均质。 3.2提取 精确称取均质好的试料 5g于聚四氟乙烯离心管中，加入乙酸乙酯20mL，摇动 5min，将试样分散开，在2000r/min 下离心10min ，取上层清液与100mL容量瓶中；残渣中再加入20mL乙酸乙酯，重复抽提一次，合并两次提取液于容量瓶中。 3.3脱旨 在容量瓶中加 0.1mol/L 盐酸溶液 4mL，于40℃下氮吹浓缩至少3mL，转入10ml离心管中，用 0.1mol/L 盐酸溶液 2mL洗容量瓶。并转至同一试管中。再用正己烷3mL洗容量瓶，将正己烷转至同一离心管中，晃动离心管将其混合均匀，在2000r/min 下离心10min， 弃去正己烷。再次用正己烷3mL洗容量瓶，转至同一离心管中，摇晃离心管将样品在溶剂中混合均匀， 在 2000r/min 下离心 10min ， 弃去正己烷。取下层液备用。 3.4固相萃取小柱净化(MCX柱) 表1固相净化条件 过程 溶剂 试剂用量(mL) 添加次数 试剂流速(mL/min) 空气助推(mL) 推柱速度(mL/min) 活化 甲醇 2 1 2 5 1 0.1M盐酸溶液 2 单管上样 备用液(样品) 5 1 3 5 淋洗 0.1M盐酸溶液 1 1 2 5 50%甲醇乙腈 2 1 洗脱 氨化甲醇 4 1 5 5 浓缩、转化溶剂：收集洗脱液，于40℃氮气吹干；加入0.1%甲酸乙腈溶液 1.0ml溶解残余物，滤膜过滤，供高效液相色谱测定。 3.5色谱测定条件 色谱柱：C18； 流动相：0.1%甲酸+乙腈，梯度如下表； 流速：1mL/min； 柱温：30℃； 检测波长：270nm； 进样体积：100pL。 表2梯度表 时间/min 0.1%甲酸% 乙腈% 0.0 83 17 5.0 83 17 10.0 80 20 22.3 60 40 22.4 10 90 30.0 10 90 31.0 83 17 48.0 83 17 3.6标准曲线绘制 精密将磺胺类药物标准品稀释成浓度为10、50、100、250、500、2500和 5000ug/L系列混合标准溶液，供液相色谱使用。以测得的峰面积为纵坐标，以对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。 3.7测定 将样品按照与标准曲线绘制时相同的色谱条件进行测试，得到样品色谱峰的峰面积，根据所得的标准曲线，求出样品中磺胺类药物的浓度。 4结果计算 试样中磺胺类药物残留量计算： 其中：X——试样中相应的磺胺类药物的残留量，单位微克每千克(ug/kg)； c——试样中相应的磺胺类药物浓度，单位微克微毫升(ug/mL)； V——溶解残余物所用0.1%甲酸乙腈溶液体积，单位毫升(mL)· m——-供试样品质量，单位为克(g)； ( 参考文献 ) ( [1] GB 29694-2013食品安全国家标准动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定高效液相色谱法[S]. ) -- -- 1 前言近年来，越来越多的研究结果表明，磺胺类药物特别是磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲基异恶唑等残留对人体的危害主要表现为“致癌、致畸、致突变”作用，引起过敏、中毒和导致耐药性菌株产生，以及引起造血系统障碍、急性溶血性贫血、粒细胞缺乏症、再生障碍性贫血等。加强磺胺残留的检测及监控是控制兽药残留发生的重要措施之一。采用海能全自动固相萃取仪-高效液相色谱法进行检测动物源性食品中磺胺类药物残留，有效的缩短样品中目标物的固相净化所需要的时间，提高了工作效率，也节约了人力；且能精准的控制上样、淋洗、洗脱等溶剂流速，提高了样品目标物的回收率。2 仪器与试剂2.1 仪器SPE400全自动机械臂固相萃取仪；HN200多功能氮吹仪；高效液相色谱仪；绞肉机；粉碎机；分析天平；离心机；其他常规玻璃仪器；滤膜（有机相，0.22μm）。2.2试剂及耗材实验用水应符合GB/T6682中三级用水的规格，使用试剂除特殊说明外，均为分析纯。乙酸乙酯（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；甲醇（色谱纯）；盐酸、正己烷、甲酸（色谱纯）、氨水。MCX柱：60mg/3ml，或者相当。0.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水溶解并稀释至1000mL。0.1%甲酸乙腈溶液：取0.1%甲酸830mL，用乙腈溶解并稀释至1000mL。洗脱液：取氨水5mL,用甲醇溶解并稀释至100mL。0.1mol/L盐酸溶液：取盐酸0.83mL，用水溶解并稀释至100mL。50%甲醇乙腈溶液：取甲醇50mL，用乙腈溶解并稀释至100mL。