猪肉中磺胺类兽药残留检测方案(液质联用仪)

LC-MS/MS法测定猪肉中16种磺胺类兽药残留 应用中心 前言 磺胺类药物 (Sulfonamides， SAs)是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物。为了治疗饲养动物的疾病，提高动物的抗病能力，从而造成了肉类中抗生素的残留。而且通过任何途径摄入的SAs会在人体中蓄积，导致许多细菌产生抗药性，对人类的身体健康产生很大的危害，可能导致甲状腺致癌的可能性，过敏和抗药性。国际食品法典委员会(CAC)和欧美等大多数国家也规定食品和饲料中的SAs总量，我国的《农业部2002年第235号公告》同样规定了磺胺类药物的最大残留量，同样也出台了相关检测标准，如《GB/T21316-2007动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》、《农业部1025号公告-23-2008动物源食品中磺胺类药物残留检测液相色谱-串联质谱法》等。因此，本文参考《农业部1025号公告-23-2008动物源食品中磺胺类药物残留检测液相色谱-串联质谱法》建立了使用谱育科技的超高效液相串联三重四极杆质谱仪测定猪肉中16种磺胺类药物的检测方法。 实验部分 标准品和试剂：标准品：16种磺胺类兽药混合标准品购于上海安谱，于-20℃冰箱保存。 试剂：甲醇为色谱级，甲酸为色谱级，纯度98%。 仪器： ULC 510超高效液相色谱仪(具体配有二元超高压输液泵、超高压自动进样器(含冷却功能)、柱温箱)、EXPEC 5210三重四极杆串联质谱仪。 液相色谱条件： 色谱 柱： Athena C18-WP(150mm*2.1mm，5um)流动相：A： 0.2%甲酸溶液，B：甲醇，梯度洗脱程序如表1； 流速：0.3mL/min；柱温：40℃ 进样量：10ul。 表1梯度洗脱条件 时间(min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 90 10 5 90 10 10 80 20 15 60 40 16.5 10 90 18 10 90 18.1 90 10 22 90 10 质谱条件： 监测模式为多反应监测(MRM)，各化合物监测离子对、碰撞电压(CE)等参数见表2。为提高检测灵敏度，可根据保留时间分段监测各化合物。 表2各化合物监测离子对及参数 序号 化合物 母离子 子离子 碰撞能量 磺胺醋酰 215 156* 1 磺胺醋酰 215 108 磺胺嘧啶 251 156* 2 磺胺嘧啶 251 108 磺胺噻唑 256 156* 3 磺胺噻唑 256 108 磺胺吡啶 250 156* 4 磺胺吡啶 250 184 磺胺甲基嘧啶 265 156* 5 磺胺甲基嘧啶 265 172 磺胺甲噻二唑 271 156* 6 磺胺甲噻二唑 271 108 磺胺对甲氧嘧啶 281 156* 7 磺胺对甲氧嘧啶 281 215 磺胺二甲嘧啶 279 186* 8 磺胺二甲嘧啶 279 156 磺胺甲氧哒嗪 281 156* 9 磺胺甲氧哒嗪 281 108 磺胺氯哒嗪 285 156* 10 磺胺氯哒嗪 285 108 磺胺甲基异恶唑 254 156* 11 磺胺甲基异恶唑 254 108 磺胺间甲氧嘧啶 281 156* 12 磺胺间甲氧嘧啶 281 215 磺胺二甲异恶唑 268 156* 13 磺胺二甲异恶唑 268 113 磺胺邻二甲氧嘧啶 311 156* 14 磺胺邻二甲氧嘧啶 311 108 磺胺苯吡唑 315 156* 15 磺胺苯吡唑 315 160 磺胺间二甲氧嘧啶 311 156* 16 2222222222223磺胺间二甲氧嘧啶 311 108 *为定量离子 样品前处理 样品前处理方法：具体参考《农业部1025号公告-23-2008动物源食品中磺胺类药物残留检测液相色谱-串联质谱法》。 线性关系与检出限 采用外标定量法，标准曲线溶液：16种磺胺类药物混标用甲醇稀释标准曲线浓度为0.1、0.5、5、11、5、10、20、50ug/L的各标曲溶液，注入液相色谱质谱联用仪。将标准曲线的低浓度点溶液分别注入液相色谱质谱联用仪，计算出线性方程、相关系数及定量限。结果见表3。 表316种磺胺类药物的线性方程、相关系数及定量限 定量限 精密度 平行制备浓度为0.5ng/mL样品各6份，依次进样。得到统计结果如表4所示，12种常用除草剂农药峰面积的RSD值为1.65-6.77%，仪器精密度良好。 表4精密度实验结果 (n=6) RSD 化合物 RSD (%) 序号 化合物 (%) 磺醋酰 3.29 磺胺甲氧哒嗪 4.37 2 磺胺嘧啶 4.81 10 磺胺氯哒嗪 6.77 3 磺胺噻唑 4.89 11 磺胺甲基异恶唑 4.26 4 磺胺吡啶 3.97 12 磺胺间甲氧嘧啶 1.65 5 磺胺甲基 嘧啶 3.99 13 磺胺二甲异 恶唑 3.16 6 磺胺甲噻二唑 4.89 14 磺胺邻二甲氧嘧啶 6.60 7 磺胺对甲氧嘧啶 3.91 15 磺胺苯吡唑 2.68 8 磺胺二甲嘧啶 5.13 16 磺胺间二甲氧嘧啶 5.04 磺胺吡啶 磺胺醋酰 磺胺甲基嘧啶 磺胺唑 磺胺甲基异恶唑 磺胺氯哒嗪 磺胺嘧啶 磺胺间甲氧嘧啶 2.08e4 cps 磺胺甲噻二唑 磺胺二甲嘧啶 磺苯吡唑 磺胺对甲氧嘧啶 应用简报： 编号： LC-MSMS 2020-002 图116种磺胺类药物MRM谱图 (1ng/ml) 加标回收率 供试品溶液中分别加入混合对照品，浓度为1ng/ml， 各3份，按照上述方法进行测定，结果见表5. 表5回收率实验结果 结果与讨论 猪肉样品提取后，经MCX柱净化等前处理过程，使用LC-MS/MS系统进行测定。本文考察了方法的线性、精密度、回收率等，结果表明：16种磺胺类药物在检测范围内线性良好，相关系数均大于0.99；方法精密度在6.77%以内，大部分化合物回收率均在70%~120%范围内。使用高灵敏、高抗污染能力的EXPEC 5210系统， 可以对猪肉中16种磺胺类药物残留进行灵敏、准确的定量检测。 参考《农业部1025号公告-23-2008动物源 食品中磺胺类药物残留检测液相色谱－串联质谱法》建立了使用谱育科技的超高效液相串联三重四极杆质谱仪测定猪肉中16种磺胺类药物的检测方法。