全血中百草枯和氯化琥珀胆碱检测方案(液质联用仪)

SSL-CA14-242 Excellence in ScienceLCMSMS-223 上海市淮海西路570号红坊E楼咨询电话：021-22013542http：//www.shimadzu.com.cn LC/MS-8060)测定全血中百草枯和氯化琥珀胆碱 LCMSMS-223 摘要：：本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪 LCMS-8060 联用测定全血中百草枯和氯化琥珀胆碱含量的方法。该方法在 10 min 内完成分析，线性良好，判定系数大于0.9988。对 1.0 ng/mL 全血基质加标溶液平行测试6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.08~0.09%和2.56~3.19%之间，仪器精密度良好。百草枯和氯化琥珀胆碱检出限分别为 0.003和0.007 ng/mL， 定量限分别为 0.01 和0.02 ng/mL， 灵敏度良好。该方法具有分析速度快、灵敏度高、重复性好的优势，可用于全血样品中百草枯和氯化琥珀胆碱的检测。 关键词： 三重四极杆质谱 百草枯 氯化琥珀胆碱 全血 百草枯(Paraquat，PQ)是目前世界上最受欢迎的除草剂之一。其纯品极性较大，易溶于水，稍溶于丙酮和乙醇，在碱性介质中不稳定。百草枯对人、畜均有较强的毒性作用。临床发生中毒事件后，常常需要在短时间内做出诊断，以利于尽早救治。建立快速分析方法对临床诊断、治疗以及刑事法医鉴定有十分重要的意义。 氯化琥珀胆碱( suxamethonium chloride， SUX) 又称司可林，在水中极易溶解，水溶液呈酸性，在乙醇或氯仿中微溶，在乙醚中不溶。SUX是一种去极化型肌肉松弛药，作为手术麻醉辅助药，用于 术中维持肌松和插管。近年来，利用氯化琥珀胆碱起效快、毒性大的特点，制成飞镖等工具用于麻醉抢劫、非法盗猎的案件越来越多，迫切需要建立快速的检验方法用于刑事侦查和法医鉴定。 面对百草枯和氯化琥珀胆碱的人体中毒事件，液相色谱-串联质谱法由于其快速、灵敏度高、可以准确定性等优点，成为检测此类物质的首选。本文利用岛津LCMS-8060，使用HILIC色谱柱克服此类化合物保留差的问题，建立了全血中百草枯和氯化琥珀胆碱的快速、高灵敏度的同时检测方法。 1.1仪器 本实验使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A 与三重四极杆质谱仪 LCMS-8060联用系统。具体配置为 LC-30AD×2输液泵， DGU-20A5在线脱气机， SIL-30ACMP 自动进样器， CTO-30AC柱温箱， CBM-20A系统控制器，LCMS-8060 三重四极杆质谱仪， LabSolutions Ver. 5.80色谱工作站。 液相条件 色谱柱： PC HILIC 150×2.0 i.d mm， 3 um 流动相：A 相-水+0.1%甲酸+10 mM 乙酸铵，B相-乙腈 流速：0.4 mL/min 柱温：35℃ 进样量：5uL 洗针方式： Rinse Pump>Rinse Port， Rinse Pump 洗针液为乙腈/异丙醇/甲醇/水/甲酸=25：25：25：24.5：0.5(v/v/v/v/v)； Rinse Port洗针液为50%甲醇水溶液 进样小瓶：PP材质小瓶(低吸附) 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为70%，洗脱程序见表1。 表1梯度洗脱程序 Time(min) Module Command Value 2.00 Pumps Pump B Conc. 70 2.10 Pumps Pump B Conc. 30 5.00 Pumps Pump B Conc. 30 5.10 Pumps Pump B Conc. 70 10.00 Controller Stop 质谱条件 离子化模式： ESI(+)加热气：空气10.0 L/min雾化气：氮气3.0 L/min干燥气：氮气10.0 L/min扫描模式：多反应监测(MRM)驻留时间：40 ms 碰撞气：氩气 接口温度：300℃DL温度：200℃加热模块温度：300℃ 延迟时间：3 ms MRM参数：见表2 表2MRM优化参数 化合物 英文名 CASNo. 前体离子 产物离子 Q1 Pre CE (V) Q3 Pre Bias (V) Bias (V) 百草枯 paraquat dichloride 1910-42-5 186.1 171.2° -20.0 -21.0 -22.0 77.2 -13.0 -46.0 -30.0 氯化琥 suxamethonium 71-27-2 145.2 65.8* -20.0 -21.0 -22.0 珀胆碱 chloride 115.8 -13.0 -38.0 -17.0 注：*表示定量离子 1.3标准品溶液的配制 标准工作溶液配制：将标准品用甲醇溶解至1000.0 ug/mL，使用甲醇稀释得到1.0、2.0、4.0、10.0、20.0、40.0、50.0、200.0、400.0、2000.0 ng/mL的工作溶液备用。 1.4样品前处理方法 取全血1ml加入4mL乙腈，涡旋振荡混匀后，4℃、12000 rpm 离心30 min， 取上清液待用。 结果与讨论 2.1标准样品 MRM色普图 图1标准样品色谱图(浓度0.5 ng/mL) 2.2线性范围 取空白全血添加混合工作液，得到0.05、0.1、0.5、1、5、10、50、100 ng/mL 不同浓度的样品，按1.4步骤处理后上机分析测定，外标法定量。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线如图2所示，线性方程、线性范围和相关系数结果见表3。 图2 百草枯和氯化琥珀胆碱校准曲线 表3 校准曲线参数 名称 校准曲线 线性范围(ng/mL) 判定系数R² 准确度(%) 百草枯 Y=(52178.4)X+(71382.7) 0.05-50 0.9988 87.1~105.1 氯化琥珀胆碱 Y=(146231)X+(673405) 0.1-100 0.9997 86.2~106.7 2.3精密度实验 对 1.0 ng/mL 浓度的全血基质加标液连续6次进样，考察仪器的重复性，保留时间和 峰面积的重复性结果如表4所示。仪器重复性良好。 表4保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 样品名称 RSD% R.T Area 百草枯 0.09 3.19 氯化琥珀胆碱 0.08 2.56 2.4灵敏度实验 对浓度为0.05 ng/mL 溶液进样分析，百草枯和氯化琥珀胆碱的最低检出限(S/N=3， LOD表示)、最低定量限(S/N=10， LOQ表示)结果如表5所示。 表5 检出限和定量限 名称 检出限(ng/mL) 定量限(ng/mL) 百草枯 0.003 0.01 氯化琥珀胆碱 0.007 0.02 2.5基质效应 取空白全血配制成低、中、高3个浓度(0.1、1.0、50.0ng/mL)，按照1.4步骤操作，得到峰面积A1，测得0.1、1.0、50.0 ng/mL 浓度工作液的峰面积A2。基质效应 M=A1/A2*100%，计算结果见表6。结果表明，本实验建立的方法不存在明显的基质效应。 表6 基质效应考察 基质效应(%) 浓度(ng/mL) 0.1 1.0 50.0 百草枯 95.3 96.3 105.2 氯化琥珀胆碱 96.4 95.6 103.2 ■结论 本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8060联用测定全血中百草枯和氯化琥珀胆碱的方法。该方法在 10 min 内完成分析，线性良好，对 1.0 ng/mL 全血基质加标溶液平行测试6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.08~0.09%和2.56~3.19%之间，仪器精密度良好。百草枯和氯化琥珀胆碱检出限分别为0.003 和0.007 ng/mL， 定量限分别为0.01 和 0.02 ng/mL， 灵敏度良好。该方法具有分析速度快、灵敏度高、重复性好的优势，可用于全血样品中百草枯和氯化琥珀胆碱的检测。 田1岛津全球应用技术开发支持中心 面对百草枯和氯化琥珀胆碱的人体中毒事件，液相色谱-串联质谱法由于其快速、灵敏度高、可以准确定性等优点，成为检测此类物质的首选。本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8060联用测定全血中百草枯和氯化琥珀胆碱的方法。该方法在10 min内完成分析，线性良好，对1.0 ng/mL全血基质加标溶液平行测试6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.08 ~ 0.09%和2.56 ~ 3.19%之间，仪器精密度良好。百草枯和氯化琥珀胆碱检出限分别为0.003和0.007 ng/mL，定量限分别为0.01和0.02 ng/mL，灵敏度良好。该方法具有分析速度快、灵敏度高、重复性好的优势，可用于全血样品中百草枯和氯化琥珀胆碱的检测。