化妆品中糖皮质激素类药物检测方案(液相色谱仪)

样品谱图及分析结果结果与讨论2 结论9001woThermo Fisher Scientific，San Jose， CA USA is ISO Certified. 刘绿叶金燕赛默飞(中国)有限公司 Key words： Glucocorticoid； Online SPE； UHPLC MS/MS 引言 糖皮质激素(glucocorticoid， GCS)是由肾上腺皮质中束状带分泌的一类甾体激素，主要为皮质皮(cortisol)，具有调节糖、脂肪、和蛋白质的生物合成和代谢的作用，还具有抑制免疫应答、抗炎、抗毒、抗休克作用。称其为“糖皮质激素”是因为其调节糖类代谢的活性最早为人们所认识，在临床工作中激素因具有较强的抗炎抗变态反应作用。化妆品中添加“糖皮质激素，可降低毛细血管的通透性、减少渗出和细胞浸润，具有抗炎、抗过敏、免疫抑制、抗增生等作用。但含有此类激素成分的化妆品如果长期使用，皮肤就会产生如同上瘾的症状，只要停用，过敏症状就会加重发作、反弹，造成毛细血管扩张、萎缩，皮肤变薄，痤疮加重，色素沉着，甚至出现多毛、皮炎等症状。因此，“糖皮质激素”也被称作是“皮肤鸦片”，在我国是严禁用在化妆品当中的。 我国分别出台了标准，进出口化妆品中糖皮质激素类与孕激素类检测方法(SN/T2533-2010)，化妆品中41种糖皮质激素的测定液相色谱/串联质谱法和薄层层析法(GB/T 24800.2-2009)。均采用液相色谱串联质法进行了分析，前处理过程均采用乙腈提取， SPE小柱净化，上样分析。本方法考虑到常规的离线SPE分析时间较长，重现性不好，回收率不稳定，因此本方法采用了在线SPE的方法与三重四极杆串联分析，大大节省了前处理时间，提高了分析速度，节省了SPE前处理试剂，取得了较好的效果。 仪器： UltiMate 3000超高效液相色谱仪，包括有带在线脱气单元的二元梯度泵、自动进样器、柱温箱。质谱仪： TSQ Vantage ESI源 柱温：30℃ 进样量：20.0pL 流动相组成：SPE柱：A：水B：乙乙=90：10，等度洗脱，流速： 0.3mL/min 分析柱：A：0.1%甲酸水， B： 0.1%甲酸乙腈，梯度程序见表1： 表1梯度洗脱程序 时间 (min) B% 流速(mL/min) 0 30 0.3 8 30 0.3 20 75 0.3 25 75 0.3 30 30 0.3 质谱条件：：ESI源正离子模式， SRM扫描模式，电压：3500V，雾化温度：350℃，鞘气：30，辅助气：5o 对照品：购自中国生物制品检定所，分别称取氢化可的松，倍他米松，地塞米松，哈西奈德标准品用甲醇配制成1.0mg/mL溶液，然后再配制成20.0pg/mL混标溶液，然后用40%乙腈水溶液稀释成0.04、0.08、0.2、0.4、0.8pg/mL的标准工作溶液。 准确称取0.2g试样于5mL聚丙烯离心管中，加入3mL饱和氯化钠溶液，分散，再加2mL乙腈，混合振荡2min， 5000r/min离心2min，把上清液移入另一50mL离心管，再用2mL乙腈重复提取一次，合并上清液，加入40mL纯水，再加入铁氰化钾和乙酸锌进行沉淀大分子，再离心过滤，直接上样分析。 标准品谱图及曲线如图所示，以峰面积外标法定量。 图1标准品谱图(以0.8pg/mL为例) 图2标准曲线图 样品分析 图3某老中医品牌化妆品分析谱图 结果计算，某老中医品牌化妆品提取溶液测量浓度为0.245pg/mL， 参照国标GB/T 24800.2-2009换算成含量为53pg/g。 重现性实验 对标准品溶液(0.8ug/mL)连续进样7次，四个峰保留时间和峰面积的RSD值分别少于1%和5%。 图4加标回收率谱图(加标0.188pg/mL为例) 项目 实际浓度 加入浓度 测量值 回收率 样品基质 (pg/mL) (pg/mL) (pg/mL) % 某化妆品 氢化可的松 未检出 0.188 0.145 77.1 倍他米松 未检出 0.188 0.135 71.8 地塞米松 0.245 0.188 0.390 77.1 哈西奈德 未检出 0.188 0.105 66.5 某化妆品 氢化可的松 未检出 0.188 0.131 69.7 倍他米松 未检出 0.188 0.120 63.8 地塞米松 0.245 0.188 0.395 79.8 哈西奈德 未检出 0.188 0.140 74.5 从以上数据可以看出，回收率在65%以上。 通过对TSQ vantage质谱参数的优化，同时采用online SPE在线富集浓缩的技术，一是可以去除干扰，，二是可以提高分析通量，因此，该方法适合用于对化妆品中激素类药物的分析。 thermoscientific.com ( C 2012 T h e rmo Fishe r Scie n tific Inc . Al l ri g hts reserved. All trademarks are the pro p erty of Thermo Fisher Scientific Inc. a nd i ts s ubsidiaries. Specifications， terms a nd p r icin g are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your ) local sales representative for details. 上海 北京 免费服务热线： 上海浦东新金桥路27号6号楼 北京东城区安定门东大街28号 8008105118 邮编：201206 雍和大厦西楼F座7层702-715室 4006505118