发光细菌法在环境督查中的应用 司皖,等www.seed17.net 《仪器仪表与分析监测》2011年第3期 发光细菌法在环境督查中的应用 Application of method about luminescent bacteria in environmental supervision 司皖甦 田 甜 焰 丁长春 (1.淮安市环境监测中心站 江苏淮安 223001;2.江苏省环境监测中心 江苏南京 210036:3.淮安市环境保护局 江苏淮安 223001) [摘要] 应用发光细菌法快速测定了Y市工业园区废水的综合毒性,结果表明,试验与常规验收监测结果相一致。这说明发光细菌毒性试验用于工业废水毒性评价具有快速、简便、灵敏和准确的特点,在环境督查中有着理化检测不可比拟的优越性,,可以为废水的安全排放、水质评价及环境督查性监测、水质污染应急监测提供数据支持和科学依据。 关键词 发光细菌;毒性试验;环境督查 [中图分类号] X832 [文献标识码] B 目前对环境污染物的分析主要是采用理化学分析,这些方法存在待测项目多、成本高、工作量大的问题,尤其是难以判断废水的毒性,无法反映出有毒化合物相互作用的影响,而发光细菌法是利用灵敏的光电测量系统测定毒物对发光细菌发光强度的影响,可以弥补这些缺憾。 发光细菌含有荧光素、荧光酶、ATP等发光要素,在有氧条件下通过细胞内生化反应而产生微弱荧光。发光细菌的发光是一种生理代谢过程,当其与有毒有害物质(如重金属和有机化合物)接触时,菌体的酶系统受到干扰,胞质膜变性。由于发光细菌的胞质膜是电子转移链和生物发光途径的所在位置,胞质膜机能的损害会对生物发光产生抑制作用,使发光度下降,其下降量与毒物量及其毒性大小存在一定关系。可以根据菌体发光度的变化判断污染物毒性大小,用相对发光度表征毒物所在环境对生物总体急性毒性。 发光细菌法已在水质、土壤(沉积物)、环境评价、环保验收以及生态规划中得到了广泛的应用。随着科学技术的发展,发光细菌法将与电子技术以及光电技术相结合,逐步发展成为在线监测系统,为水质分析提供更加快速的测试手段。 1 实验部分 1.1 样品来源 水样采集于Y市某化工园区 1.2 仪器与试剂 DeltaTox 急性毒性检测仪、车载冰箱、移液枪等; MicroTox 特有干冻剂剂(菌种) (-20℃冷冻)及试剂。 1.3 测试步骤2 1.3.1 采样与保存 采样时取满水样不留空气,保证易挥发性物质保留在水样中。水样取完后尽快运回实验室测试,如遇特殊情况置入2~4℃冰箱,并尽快在72小时内测定。 1.3.2 水样预处理 对含余氯的水样用1%硫代硫酸钠溶液脱氯,对 pH不在6.0~8.0范围内的水样用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节,对浑浊样本作离心处理,有色样本用蒸馏水或去离子水稀释。 1.3.3 检测环境控制 虽然本检测系统能在较宽的温度范围(10~28℃)内满意地工作,但是还是可以看到在不同温度下,测试数据有一定的变化,为加强测试所得数据的可比性,用空调将测试环境温度控制在20±1℃. 1.3.4 菌种活化 试剂水合(菌种活化)时间统一控制在 15分钟。 1.3.5 检测模式 DeltaTox 分析仪分别设定了 B-TOX-2%高毒性样本测试模式、B-TOX-45%中毒性样本测试模式及B-TOX-81.9%低毒性样本测试模式三种 模式。根据水样特征,选择2%低毒性样本测试模式。 2 评价标准 本文采用中科院南京土壤所推荐的百分数等级分级标准判别废水毒性,见表1。 对能直接测定相对发光率的样品,可根据其相对发光率判断毒性级别,而毒性较大不能直接测定出相对发光率的样品,应预先稀释测定其相对发光率,进行毒性级别判断。 表1 发光细菌毒性试验评价标准 毒性级别 相对发光率(L)(%) 相当的HgCL溶液浓度(mg/L) 毒性级别 I L>70 CHg<0.07 低毒 I1 50