头孢克肟中有关物质分析检测方案(液相色谱柱)

June 17，2016LC Application Lab， Shiseido ChinaNo.31， BDA International Business Park，2 Jing Yuan Street， BeijingEconomic Technological Development Zone，Beijing， China 100176Phone 010-6785-6801， FAX 010-6785-6882 2015版药典头孢克肟有关物质的分析 本次使用资生堂柱长为150 mm，粒径分别为 3 um 和5 um 的 CAPCELL PAK MG ⅡI型色谱柱，按照2015版中国药典对客户提供的头孢克肟样品进行系统适用性试验和有关物质的分析。以四丁基氢氧化铵溶液作为水相，乙腈作为有机相，粒径为5 um 的色谱柱进行分析。以沸水破解样品溶液作为系统适用性溶液进行系统适用性试验，结果如图1所示，头孢克肟和其异构体峰分离度为1.53，满足药典对系统适用性的要求。进而对供试品溶液进行有关物质的分析，结果如图2所示。头孢克肟主峰与前面杂质峰的分离度为1.00。 Minutes 图1MGIIS5 色谱柱分析色谱图(系统适用性) Minutes图 2MG II S5色谱柱分析色谱图(供试品) HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL PAK MG II S5：4.6 mm i.d.×150 mm流动相： A：四丁基氢氧化铵溶液(10%四丁基氢氧化铵25mL， 加水 1000mL， 摇匀，用1.5 mol/L 磷酸溶液调节pH至7.0) B：乙腈 A：B=72：28 流1000 pL/min温检 样 40°C PDA 254nm 客户提供样品。系统适用性：水稀释至1mg/mL， 沸水浴加热45 min， 冷却。供试品：磷酸缓冲液溶液(pH7.0)稀释至1mg/mL。进样量均为 20pL 为改善分离效果，尝试使用 CAPCELL PAK MG ⅡI 3 um 色谱柱按照相同条件进行分析，依次进行系统适用性试验和供试品的分析，结果如图3和图4所示。由系统适用性结果图计算得到主峰与前异与体峰分离度为1.64，满足药典要求。供试品结果图中，主峰与前杂质峰分离度为1.15，相比 CAPCELL PAK MG II 5pm 的色谱柱分离度更好。 图3 MG II S3 色谱柱分析色谱图(系统适用性) Minutes 图4MG II S3色谱柱分析色谱图(供试品) HPLC Conditions： 色谱柱： CAPCELL PAK MG II S3；4.6mm i.d.×150mm 流动相： A： 四丁基氢氧化铵溶液(10%四丁基氢氧化铵 25 mL， 加水1000 mL，摇匀，用1.5 mol/L 磷酸溶液调节 pH至7.0)B：乙腈 A：B=72：28 流速1000 pL/min温度检测样品 40°C PDA254nm 客户提供样品。系统适用性：水稀释至 1mg/mL， 沸水浴加热45 min， 冷却。供试品：磷酸缓冲液溶液(pH7.0)稀释至1mg/mL。进样量均为 20pL 继续使用 CAPCELL PAK MG II S3 柱型尝试调整有机相比例提高有关物质的分离度。将有机相乙腈的比例由28%降低至24%，进行系统适用性试验和供试品的分析，结果如图5和图6所示。由系统适用性结果图中计算得到主峰与异构体峰分离度为2.36，分离度得到进一步改善。供试品结果图中，主峰与前杂质峰分离度计算结果为1.60，主峰出峰时间为24 min 左右，分离度得到比较大的改善。 88 AAA 8 0 0 880 Minutes 图5MGIIS3色谱柱分析色谱图(系统适用性，24%乙腈) Minutes 图6 MG II S3 色谱柱分析色谱图(供试品，24%乙腈) HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL PAK MG II S5； 4.6 mmi.d.×150 mm 流动相： A：四丁基氢氧化铵溶液(10%四丁基氢氧化铵25 mL， 加水1000mL，摇匀，用1.5 mol/L 磷酸溶液调节 pH至7.0)B：乙腈 A： B=76： 24 流速1000pL/min温度检测样品 40°C PDA 254nm 客户提供样品。系统适用性：水稀释至1mg/mL，沸水浴加热45 min， 冷却。供试品：磷酸缓冲液溶液(pH7.0)稀释至1mg/mL。进样量均为20pL 综上所述，使用资生堂 CAPCELL PAK MG II S5 和S3型，柱长为150mm的色谱柱，按照中国药典2015版进行分析，均可满足系统适用性的药典要求， S3型色谱柱的分离效果优于 S5 型色谱柱。将有机相乙腈比例由28%降至24%，有关物质的分离度得到较大改善，主峰与前杂质峰的分离度为1.60。 ( 赵子塞杨茜郭彦丽 )