头孢特仑新戊酯原料药中氨基丁二酸及其杂质检测方案(液相色谱柱)

Nov.19，2015LC Application Lab， Shiseido ChinaNo.31，BDA International Business Park，2Jing Yuan Street， BeijingEconomic Technological Development Zone，Beijing， China 100176Phone 010-6785-6801，FAX 010-6785-6882 氨基丁二酸及其杂质的分离报告 客户所提供三样品分别为氨基丁二酸与杂质A 混合溶液、氨基丁二酸不同处理方法溶液及氨基丁二酸单标，由于使用 CAPCELL PAK C8DD 色谱柱无法将样品①中氨基丁二酸与杂质A分离，因此我们选择使用具有高表面极性、可以对极性样品有良好保留的 CAPCELL PAK ADME 色谱柱进行尝试： 图1 ADME 柱甲醇-0.1%磷酸体系下分析图谱 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL PAK ADME S5； 4.6mm i.d.x250mm 流动相： 甲醇/0.1%磷酸=10/90 流1000 pL / min 温 检 35℃ PDA 210nm 进样量： 5uL 样 品： 客户提供，样品①为4mg/ml氨基丁二酸+杂质A，样品②氨基丁二酸 4mg/ml并含多种杂质，样品③为氨基丁二酸 8mg/ml。 如图1所示， 使用 CAPCELL PAK ADME 色谱柱在甲醇-0.1%磷酸体系下分析，样品①主峰与杂质峰分离良好，但样品②杂质峰间无法完全分离。考虑到此条件下主峰保留仍较微弱，因此我们尝试将有机相比例降至0%，以10mmol/L磷酸二氢钾，磷酸调 pH2.2为流动相，并将流速降至0.5ml/min 进行实验： Minutes 图2ADME 柱10mM磷酸二氢钾(pH2.2)下分析图谱 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL PAK ADME S5； 4.6mm i.d.×250mm 流动相： 10mmol/L磷酸二氢钾(磷酸调pH2.2) 流500 pL /min 温 检 35℃ PDA 210nm 进样量： 5 pL 样 品： 客户提供，样品①为4mg/ml 氨基丁二酸+杂质A， 样品②氨基丁二酸 4mg/ml并含多种杂质，样品③为氨基丁二酸 8mg/ml。 如图2所示，在磷酸缓冲盐条件下，同时降低流速至0.5mL/min， 样品①主峰与杂质保留增强，分离度增大；但样品②中杂质较多，并未得到完全分离。 为得到更好的分析结果，我们又尝试在离子交换模式下对样品进行分析，分别选择了强阳离子交换和C18混合填料柱 CAPCELL PAK CR 柱及强阳离子交换柱 CAPCELL PAK SCX 柱， 以 5mmol/L 磷酸二氢钾(pH2.5)为流动相，结果发现 CAPCELL PAK SCX 色谱柱可以得到更好的保留结果： 图3 SCX 柱5mM磷酸二氢钾(pH2.5)下分析图谱 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL PAK SCX S5； 4.6mm i.d.×250mm 流动相： 5mmol/L磷酸二氢钾(磷酸调 pH2.5) 流1000 uL / min温 检 35℃ PDA 210nm 进样量： 5pL 样 品： 客户提供，样品①为 4mg/ml氨基丁二酸+杂质A， 样品②氨基丁二酸 4mg/ml 并含多种杂质，样品③为氨基丁二酸 8mg/ml。 如图3所示，使用 CAPCELL PAK SCX 色谱柱亦可得到样品①的良好保留及分离，但对于样品②仍无法将其中杂质完全分离。 综上所述，对于样品①，使用 CAPCELL PAK ADME 色谱柱及 CAPCELL PAK SCX 色谱柱均可将主峰与杂质达到完全分离；但对于样品②，溶液中杂质过多，在反相模式下即使使用纯水相也无法将各杂质峰分离，而在离子交换模式下也无法将各杂质完全分离，建议客户对样品②进行进一步处理，减少杂质数，以增强分离可能性。 张亚丽杨茜 客户所提供三样品分别为氨基丁二酸与杂质A混合溶液、氨基丁二酸不同处理方法溶液及氨基丁二酸单标，由于使用CAPCELL PAK C8DD色谱柱无法将样品①中氨基丁二酸与杂质A分离，因此我们选择使用具有高表面极性、可以对极性样品有良好保留的CAPCELL PAK ADME色谱柱进行尝试