中药材中农药残留检测方案(气质联用仪)

四.相关法规及政策 ThermoFisherSCIENTIFIC 二 2015版《中国药典》农残检测的解决方案以及方法包介绍 赛默飞世尔科技 三重四极杆串接气质 目录 方法包简介 4 二.仪器简介 5 三.化合物简介 6 四.相关政策及法规 8 五.仪器和设备 9 NCAUTAkndSTERSsTClot A 六.样品前处理方法 10 七.方法包使用简介 11 八.应用文章 15 方法包是赛默飞世尔科技色谱质谱部应用部门针对客户需求提出的简易仪器使用流程，方法包内所涉及的化合物均为常见的能在 GC/MS 上检测的化合物，如农药残留、多环芳烃、多氯联苯、多溴联苯和多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯等。方法包的作用就是能使客户更快更简便得使用仪器，尽快上手。 方法包包括进样方法、数据处理方法( TraceFinder 方法文件夹)、相关应用文章、相关标准、谱谱柱信息、前处理方法、数据文件等，客户可以直接调用进样方法和数据处理方法完成化合物的定性定量分析。 由于Thermo ScientificM TSQ 8000 Evo 采用 T-SRM 进样方法而不是分时间段的扫描方法，原来的进样的方法可以直接调用，即使保留时间会有微小的偏差，也不会影响最终的结果。另外， TraceFinder 软件自带的数据库可以直接编辑数据处理方法，数据库里包括化合物的名称、离子对、碰撞能量、定量离子、定性离子、CAS 号等信息。同时， TraceFinder 软件可以根据数据处理方法自动关联生成 TSQ 8000 Evo 的方法文件。这样应用 TraceFinder 就可以直接生成数据处理方法和进样方法。整个过程都是自动化的，几乎不需要操作者手动输入任何操作信息。 方法包(Method Kit ) 对于常用分析化合物，我们可以提供方法包。 包括：邻苯二甲酸酯、PCB、PAH、PBDE、农残筛查、GB2763、药典中农残 检测、烟草中农残、PM2.5、香港规管方案、亚硝胺、二恶英等。 目的： TSQ 8000 Evo 三重四极杆串接气质联用仪 秉承着在气相色谱三重四极杆质谱中技术的一贯领先优势， Thermo Fisher Scientific 在推出 TSQ 8000 之后再次创新，推出了更新的一款气相串接质谱仪 TSQ 8000 Evo， 该款高效的 GC/MS/MS 提供了永不停机的生产率，其出色的灵敏度，超快的扫描速度，简便的 MSMS功能， 满足最苛刻的定量定性分析要求，为食品安全、环境分析、法医和制药应用分析提供基础。 TSQ 8000 Evo 主要特点： ·AutoSRM 功能自动优化二级离子对信息； ·定时保留时间 SRM 功能 (T-SRM)和定时保留时间 SIM 功能(T-SIM)使高通量检测成为可能，并且优化方法设置参数，无需分配时间段； 。最新的 TraceFinder 软件，提供最新的技术平台，界面友好的色谱分析软件，可以直接调用数据库信息自动建立数据处理方法及进样方法； ·高达 800 MRM/s的扫描速度，即使在极限高速扫描条件下仍不会过多损失灵敏度 ·在质谱不泄真空的情况下，更换整个离子源，节省常规系统维护时间，简化操作； ·双灯丝设计，并且灯丝在同一侧； ·离子源上具有双加热区，有效去除基质对离子源的污染，节省维护时间； ·弯曲的预四极杆，有效去除中性噪音，减少背景并提高灵敏度。 ·方法桥，，可以读取 Thermo Scientific'M ISQ 单四极杆气质联用仪的方法或者其他公司的 SRM 方法。 新药典共需要检测76种农药(包含2种内标化合物) 表 1. 药典 GCMSMS 方法检测的76种化合物列表(*为内标) 2014年3月，国家药典委员会官网发布关于《中国药典》2015年版通则(草案)公开征求意见的通知，并指明国家药典委组织相关专业委员会已完成了通则(附录)编制及编码的研究工作。2015年，国家食品药品监督管理总局发布关于《中华人民共和国药典》》(2015年版)的公告，新版药典将于2015年12月1日起正式实施。 2015年版本《中国药典》收载药品数量达到5608个，比2010年的药典增加了20%，不但药品质量检测与控制方法及中药、化学药和生物药标准将得到广泛性修订、完善及提升，而且在中药标准方面，基本建立了适合中药特色与特性的整体控制质量的新体系和新模式。新版药典更加注重体现中药特色，表达中药特点，并致力于中药质量整体控制水平的进一步提高，筹建中国药品标准物质谱图库，引领中药标准国际化进程。二O《中国药典》2015年版通则增订了中药材农药残留量测定法，其中包括用气相色谱串联质谱测定74种农残，液相色谱串联质谱测定153种农残，为中药材农残测定确定了分析方法，具有更好的特异性和灵敏性。 五.仪器和设备 仪器： Thermo ScientificM TSQ 8000 Evo气相色谱三重四极杆串接质谱仪。 设备：涡旋混合器、离心机、氮吹仪、水浴锅等。 色谱柱： TR-Pesticide ll ( 30 m*0.25 mm*0.25 um， 带毛细管色谱柱5m预柱)毛细管色谱柱(Thermo Fisher Scientific)。 按照2015版《中国药典》的方法进行前处理： 1.提取 2.净化 *无水硫硫镁900 mg， N-丙基乙二胺( PSA) 300 mg，十八烷基硅烷键合硅胶 300 mg， 石墨化炭黑90mg， 硅胶 300mg 七.方法包的使用 1.进样方法使用：直接使用方法包中 meth 结尾的文件CChinese pharmacopoeia ，进行进样分析。 不同仪器配置可能稍有不同，可以参考以下方法截图。 2.数据处理方法建立：直接拷贝方法包中的文件夹 Chinese pharmacopoeia 到 C：\TraceFinderData\32\Methods 中，方法就可以直接在 TraceFinder 软件中打开，这个方法包括数据处理方法和进样方法 3.将步骤1中的进样方法拷贝粘贴到 C：\TraceFinderData\InstrumentMethods 中， 在 Instrument Methods中选择这个文件，然后保存这个 TraceFinder 的 Master Method。 4.将按照步骤1进样完成的数据文件与 TraceFinder 方法相关联，得到完整的数据处理方法。按需要更改保留时间等参数进一步对数据处理方法进行优化，得到准确的数据处理方法。整个过程无需输入化合物信息，离子对信息，挑选离子对信息找到化合物，所有的步骤均是自动完成，一点即可，极大得提高分析效率，简化方法流程。 最终只需要再输入定量的标准曲线各浓度点和具体浓度即可完成数据处理方法的建立。 八..应用文章 气相色谱串接质谱联用法用于药材中多农残测定 邓武剑朱曼洁 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 药材；农药残留； TSQ 8000 Evo 三重四极杆气质联用 为了应对 《中国药典》 2015版的实施，根据 《中国药典》2015版2341款第四法的要求，本文建立了一种运用三重四极杆气质联用仪(GC-MS/MS)来检药药材、饮片及制剂中部分农药残留量的分析方法。试样加无水硫酸镁、无水乙酸钠后，用乙腈提取，提取液经净化后，氮吹仪浓缩，用乙腈定容。在毛细管气相色谱柱上分离，采用 GC-MS/MS 测定，用外标法定量计算。各化合物按照浓度 5.0、10.0、25.0、50.0、100.0 pg/L 建立标准曲线，74种农药组分在 5.0~100.0 ug/L 浓度范围内线性关系良好，线性相关系数均大于0.99。按照IUPAC(国际理论(化学)与应用化学联合会)方法规定计算各组分检出限，各组分检出限在0.01-2.15 ug/L 之间。结果表明，应用赛默飞世尔科技 TSQ8000 Evo 完全可以应对2015版《中国药典》关于 GC-MS/MS检测药材、饮片及制剂中部分农药残留量的要求。 随着对药材农药残留的报道日益增多，人们对农药残留危害的认识也越来越深入，药典对其制定检测方法也越来越全面，越来越科学。。《中国药典》2000年版首次规定了9种有机氯农药残留的检测方法，之后在2005年版的药典中，除甘草、黄芪等药材外，对其余药材均未提出限量要求。2010版《中国药典》中不仅规定了9种有机氯农药残留的检测方法，而且规定了12种有机磷类的检测方法，还规定了3种拟除虫菊酯农药残留量的检测方法，然而在限量标准方面仅规定了甘草和黄芪两种药物的六六六、滴滴涕、五氯硝基苯的限量标准，其它中药材尚未涉及。最新的2015版《中国药典》又对农残 检测进一步步出了详细规定，并首次规定了用 GC-MS/MS 和LC-MS/MS 等技术用于药材中农残检测。历版 《中国药典》对药材农药残留量部分主要变化如表1所示： 表1.历版《中国药典》对药材农药残留量部分主要变化 出版年份 限定与变化 2000 提出了9种有机氯农药残留的检测方法 2005 没变化 2010 9种有机氯农药残留的检测方法12种有机磷农药残留的检测方法 3种拟除虫菊酯的检测方法 2015 第一法有机氯类农药残留量测定法-色谱法 第二法有机磷类农药残留量测定法-色谱法第三法拟除虫菊酯类农药残留量测定法-色谱法第四法农药多残留量测定法-质谱法 1.1仪器和试剂 质谱仪器： TSQ 8000 Evo 质谱仪(赛默飞世尔科技，美国)； 气相色谱仪： Trace1310 GC 配 AI I310 自动进样器(赛默飞世尔科技，美国)； 色谱柱： TR-Pesticide ll 30 m*0.25 mm*0.25 pm 毛细管色谱柱(赛默飞世尔科技，美国)； 试剂：甲苯、丙酮、乙腈，均为色谱纯； 1.2仪器方法 气相方法： 柱温箱：60℃保持1 min， 以 30C/min 升至180℃， 再以10℃/min 升至 300℃，保持5 min。 进样口：不分流进样，不分流时间：1.5min； 进样口温度：270℃；载气：恒流，1.2mL/min； 传输线：280℃ 质谱方法：离子源温度为300℃， 采用 T-SRM 方法，具体检测离子对如表2所示： 表2.76种农药对照品、监测离子对、碰撞电压(CE) 注：化合物10和30为内标，其余74项为目标化合物 1)羊品提取：取供试样品(药材或饮片)粉碎成粉末，称取3g样品到50mL 离心管中，加入5mL 1%乙酸溶液，涡旋使样品充分浸润、静置。再加入10 mL乙腈震荡混匀，加入4g MgSO4、1 g CH，COONa， 在涡旋振荡器上振荡2 min， 冰浴中放置冷却5 min， 然后在 5000 rpm 转速下离心5 min。 2)样品净化：取上清液8mL， 转移到15mL净化管，净化管中包括 900 mg MgSOj、300 mg PSA、300 mg C18、石墨化炭黑90 mg。旋涡震荡样品1 min，然后在5000 rpm转速下离心5 min。准确取上清液5mL， N2吹仪上于40℃水浴吹干，乙腈定容至1mL， 直接 GC-MS/MS 分析。 1.4样品基质溶液 按照1.3的程序处理药材样品，得到空白样品的基质溶液。 1.5标准溶液的配置 1)标准储备液：在十万分之一分析天平上称取每种农药单标化合物 10 mg， 加入10mL 相应的溶剂(根据不同的化合物加入丙酮、甲苯或者乙腈)溶解，配制成浓度为约1000 mg/L的溶液。每种单个标准储备液的浓度根据称样量和加入溶剂的体积计算得到。所有单标储备备在-20℃冰箱中冷冻保存。单标储备液的有效期为6个月。 2)混合标准中间液：移取适量的单标储备液，用乙腈稀释。中间标准储备液的浓度为10.0 mg/mL。中间标准储备液在-20℃冰箱中冷冻保存。中间储备液的有效期为3个月。 3)工作标准溶液：取适量的混合标准中间液，以空白样品基质液(1.4)依次稀释成浓度为5.0、10.0、25.0、50.0、100.0工作标准溶液。 2.2.实验结果分析 2.1色谱分离结果 每个化合物 SRM 质谱条件(母离子-子离子-碰撞能量)从TraceFinder 的 CDB 中导出(见表2)，在该条件下运行样品可得到目标物的 SRM 总离子流图见图1。 图1.标准溶液总离子流色谱图(100pg/L) 2.2标准曲线线性、检出限及精密度 配置混合标准溶液，各浓度分别为：5.0、10.0、25.0、50.0、100.0 ug/L 采用上述方法分别进样分析，考察各组分的线性。实验结果表明74种农药组分在5.0~100.0 pg/L 线性关系良好，线性相关系数均大于0.99，对同一样品连续进样6针，RSD 在0.37%-4.91%之间，重复性良好。按照 IUPAC 方法规定计算各组分检出限，各组分检出分在 0.01-2.15 pg/L之间，根据本应用方法的前处理，其检出限都满足最新药典对于农残分析检出限的要求(见表3)。 表3.药材中74种农残的线性方程及检出限 序号 中文名 英文名 线性范围(ug/L) 线性方程 相关系数(R2) 检出限(ug/L) RSD(%)(n=6) 1 敌敌畏 Dichlorvos 5~100 Y=7.091e3X+6.716e3 0.9912 0.28 1.27 2 四氯硝基苯 Tecnazene (TCNB) 5~100 Y=1.251e3X+6.306e2 0.9931 0.15 1.85 3 二苯胺 Diphenylamine 5~100 Y=1.683e3X-2.532e3 0.9961 0.45 4.27 4 氟乐灵 Trifluralin 5~100 Y=9.74e2X+1.969e3 0.9946 0.61 0.65 5 杀虫脒 Chlordimeform 5~100 Y=5.698e3X-6.473e3 0.9946 0.36 3.41 6 α-六六六 BHC， Alpha 5~100 Y=7.51e3X-2.535e3 0.9927 0.12 2.46 7 六氯苯 Hexachlorobenzene 5~100 Y=9.797e3X+1.787e4 0.9976 0.6 0.46 8 氯硝胺 Dicloran 5~100 Y=3.187e3X+5.58e3 0.9969 0.54 2.25 9 五氯甲氧基苯 Pentachloranisole 5~100 Y=1.361e4X-5.994e4 0.9912 0.14 4.12 10 气代莠去津 Atrazine-d5 一 序号 中文名 英文名 线性范围(pg/L) 线性方程 相关系数( R2) 检出限(ug/L) RSD(%) (n=6) 59 o，p'-滴滴涕 DDT o，p 5~100 Y=3.623e4X-1.61e5 0.9915 1.18 1.82 60 p，p'-滴滴涕 DDT p，p 5~100 Y=2.403e4X-1.207e5 0.9906 1.46 2.41 61 联苯菊酯 Bifenthrin 5~100 Y=2.568e3X-4.309e2 0.9907 0.07 4.31 62 溴螨酯 Bromopropylate 5~100 Y=7.567e2X+5.064e2 0.9922 0.22 4.15 63 甲氰菊酯 Fenpropathrin 5~100 Y=1.765e4X+6.596e4 0.9928 1.22 1.86 64 甲氧滴滴涕 Methoxychlor 5~100 Y=1.125e4X-2.95e4 0.9966 0.81 3.97 65 灭蚁灵 Mirex 5~100 Y=3.361e4X-4.128e4 0.9946 0.41 3.52 66 苯醚菊酯 Phenothrin 5~100 Y=5.019e3X+7.745e3 0.9927 0.48 2.15 67 氯菊酯 Permethrin 5~100 Y=7.858e3X+9.276e3 0.9954 0.37 4.11 68 氟氯氰菊酯 Cyfluthrin 5~100 Y=5.773e3X-1.271e4 0.9973 0.62 3.91 69 八氯二丙醚 0ctachlorodipropyl ether (S421) 5~100 Y=2.586e4X-3.614e4 0.9962 0.43 3.95 70 氟丙菊酯 Acrinathrin 5~100 Y=6.561e3X-1.562e4 0.9937 0.73 1.97 71 氯氟氰菊酯 CyhalothrinI &ll 5~100 Y=8.808e2X+2.793e3 0.9926 0.96 3.36 72 氯氰菊酯 Cypermethrin 5~100 Y=4.254e3X-5.352e3 0.9942 1.02 3.83 73 氟氰戊菊酯 Flucythrinate 5~100 Y=7.809e3X-1.916e4 0.9914 0.75 2.78 74 氰戊菊酯 Fenvalerate 5~100 Y=2.157e3X-4.221e3 0.9962 0.61 1.88 75 喹禾灵 Quizalofop-ethyl 5~100 Y=2.012e3X-7.978e3 0.9936 1.18 4.79 76 溴氰菊酯 Deltamethrin 5~100 Y=1.678e3X-4.144e3 0.9922 0.82 1.69 本文参考药典前处理方法，建立了气相串联质谱法(GC-MS/MS)测定药材中的74项农残，样品前处理只需要 45 min 即可完成，经快速前处理后，在 TSQ 8000 Evo 三重四极杆仪器上，通过一针分析，在25 min 内完成分离和检测。以快速的前处理结合赛默飞的 TSQ 8000 Evo 高通量、高灵敏度的三重四极杆仪器，为药材的农残分析带来高效、准确、方便易用的解决方案。 更清洁 关于赛默飞世尔科技 赛默飞世尔科技(纽约证交所代码： TMO)是科学服务领域的世界领导者。公司年销售额170亿美元，在50个国家拥有约50，000名员工。我们的使命是帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。我们的产品和服务帮助客户加速生生科学领域的研究、解决在分析领域所遇到的复杂问题与挑战，促进医疗诊断发展、提高实验室生产力。借助于首要品牌 Thermo Scientific、AppliedBiosystems、Invitrogen、Fisher Scientific 和 Unity Lab Services，我们将创新技术、便捷采购方案和实验室运营管理的整体解决方案相结合，为客户、股东和员工创造价值。欲了解更多信息，请浏览公司网站： www.thermofisher.com 赛默飞世尔科技中国 赛默飞世尔科技进入中国发展已有30多年，在中国的总部设于上海，并在北京、广州、香港、台湾、成都、沈阳、西安、南京、武汉等地设立了分公司，员工人数约3700名。我们的产品主要包括分析仪器、实验室设备、试剂、耗材和软件等，提供实验室综合解决方案，为各行各业的客户服务。为了满足中国市场的需求，现有8家工厂分别在上海、北京和苏州运营。我们在全国共设立了6个应用开发中心，将世界级的前沿技术和产品带给国内客户，并提供应用开发与培训等多项服务；位于上海的中国创新中心结合国内市场的需求和国外先进技术，研发适合中国的技术和产品；我们拥有遍布全国的维修服务网点和特别成立的中国技术培训团队，在全国有超过2000名专业人员直接为客户提供服务。我们致力于帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。欲了解更多信息，请登录网站 www.thermoscientific.cn Orbitrap 组学俱乐部 赛默飞小分子质谱应用技术群 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 www.thermoscientific.cn 全国服务热线：8008105118 AN_C_GCMSMS_18_201511Y