乳制品及特殊膳食中添加及非法添加检测方案

Agela Technologies Best ValueGuaranteed Product QualityInnovation to Benefit Customers 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法 执行标准 《GB/T22388-2008原料乳及乳制品中三聚氰胺检测方法》 液相色谱检测方法 1.样品前处理 称取2g试样于 50 mL具塞离心管中，加入15 mL三氯乙酸溶液、5mL乙腈溶液和5%醋酸铅溶液(质量比)2mL， 超声提取 10 min， 再震荡提取 10 min 后， 以5000 r/min 离心 10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容到 25 mL， 移取5 mL滤液，加入5 mL水混合均匀后，全部上样。 净化处理 Cleanert"PCX 60mg/3mL ·活化：5mL甲醇、5 mL水依次活化固相萃取小柱； ·上样：将全部待净化液以1 mL/min 的流速通过固相萃取小柱； ·淋洗：依次用3mL水和3mL甲醇淋洗固相萃取小柱，淋洗完毕后，抽至近干； ·洗脱：用6mL5%氨化甲醇(v/v)(5%氨化甲醇：5mL氨水+95 mL甲醇)溶液以 1 mL/min， 洗脱液于50℃下氮气吹干，残渣用1mL流动相定容，涡旋混合1min， 0.45 um 过滤。 (以上净化操作通过 Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪完成) 2.色谱条件 色谱柱： Venusil"XBP C8(L)； 250mm×4.6 mm， 5 um； 流动相：缓冲盐溶液：乙腈=85：15； 紫外检测器波长：240 nm； 流速：1.0mL/min； 进样量：10pL； 缓冲盐配制：准确称柠檬酸2.10 g 和辛烷磺酸钠2.16 g，加入约980 mL水溶解，调节pH到3.0后，定容至1L； 三聚氰胺标准品 应用编号：AF10019 牛奶中的三聚氰胺 液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS) 1.样品前处理 称取1g试样于50mL具塞离心管中，加力8 mL三氯乙酸溶液、2 mL 乙腈溶液和5%醋酸铅溶液(质量比)2mL， 超声提取 10 min， 再震荡提取10 min后， 以 5000 r/min 离心 10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，做待净化液。 净化处理 CleanertPCX 60mg/3mL ( ·活化：5mL甲醇、5 mL水依次活化固相萃取小柱； ) ·上样：将全部待净化液以1 mL/min 的流速通过固相萃取小柱； ·淋洗：依次用3mL水和3mL甲醇淋洗固相萃取小柱，淋洗完毕后，抽至近干； ( ·洗脱： 用 6mL5%氨化甲醇(v/v)(5%氨化甲醇：5mL氨水+ 9 5 mL甲醇)溶液以1 mL/min， 洗脱液于 50℃下氮气吹干，残渣用1mL流动相定容，涡旋混合1 min， 0.45 um 过滤。 ) (以上净化操作通过Qdaura卓睿全自动固相萃取仪完成) 2.色谱条件 色谱柱： Venusil AS-T C18 2.1×150 mm， 5 um 流动相：10mM乙酸铵(用乙酸调pH3.0)：乙=50：50 流1速：0.2mL/min 进样量： 10pL 质谱条件： 正离子模式，离子喷雾电压：4KV； 雾化器：氮气，40psi； 干燥气：氮气； 流1速：：110 mL/min：温 度：35℃； 裂解电压：100V； 色谱图(见下页) 三聚氰胺牛奶样品色谱图 用VenusilHILIC还可以将三聚氰胺及其手性异构体和其类似物：三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸分开，实验条件如下： 色谱柱：VenusilHILIC 4.6×250 mm， 5 um 流动相：10mM甲酸铵缓冲盐溶液(pH3.5)：乙腈=12：88 流速：： 进样量：2 质谱条件： 正离子模式 0-6.5；9-20 源温度(℃) 300 正离子模式下毛细管电压(KV) 3.5 萃取电压(V) 4 负离子模式 6.5-9 RF透镜电压(V) 0.5 负离子模式下毛细管电压(KV) 3.0 锥孔电压(min) 501 (A)三聚氰酸 (D)15N3-三聚氰胺 (B)13C3-三聚氰酸 (E)三聚氰酸一酞胺 (C)三聚氰胺 (F) 三聚氰酸二酞胺 气相色谱-质谱联用法(GC-MS和GC-MS/MS) 1.样品前处理 称取5 g试样于50mL具塞比色管中，加入25mL三氯乙酸溶液，涡旋震荡30s， 再加入15mL三氯乙酸溶液，超声提取15 min，， 加入2mL乙酸铅溶液，用三氯乙酸溶液定容到刻度。充分混合后转移上层溶液约30 mL到50 mL离心管中，以5000 r/min离心10 min。上清液待净化。 净化处理 CleanertPCX 60mg/3mL ·活化：5mL甲醇、5 mL水依次活化固相萃取小柱； ·上样：取5mL待净化液以1 mL/min 的流速通过固相萃取小柱； ·淋洗：依次用3mL水和3mL甲醇淋洗固相萃取小柱，淋洗完毕后，抽至近干； ·洗脱：用6mL 5%氨化甲醇(v/v)(5%氨化甲醇：5mL氨水+95 mL甲醇)溶液以 1 mL/min， 洗脱液于50℃下氮气吹干，残渣用1mL流动相定容，涡旋混合1 min， 0.45 um过滤。 (以上净化操作通过 Qdaura卓睿全自动固相萃取仪完成) 2.色谱条件 色谱柱： DA-50+5%苯基二甲基聚硅氧烷石英毛细管色谱柱， 30×0.25mm， 0.25um； 流速：：110 mL/min： 升温程序：70℃保持1 min， 以10℃/min 的速率升温至200℃，保持10 min； 传输线温度：280℃； 进样口温度：250℃； 进样方式：不分流进样； 进样量：1pL； 电离方式：：日电子轰击电离(EI) 电离能量：70eV； 离子源温度：230℃ 扫描模式：选择离子扫描， 定性离子m/z 99、171、327、342， 定量离子 m/z 327； 3.注意事项 ·处理不同的样品，离心的效果是不同的，有时离心后上清液仍然浑浊，若直接上样会导致固相萃取柱堵塞，这时可以适当的提高离心的转速或离心的时间，如果还不能解决该问题，可以用滤纸先过滤一下上清液再用固相萃取柱处理样品。 ·样品处理过程中注意交叉污染，影响检测结果。 ·在做三聚氰胺的重复性实验中，注意取样和最终的定量、定容的准确性。 订货信息 产品名称 规格包装 订货号 VenusilXBP C18(L) 4.6×250 mm， 5 um， 100 A VX951502-L VenusilAS-TC18 2.1×150 mm， 5 um， 100 A VAS951502-T VenusilHILIC 4.6×250 mm， 5 um， 100 A VH952505-0 CleanertPCX 60mg/3mL， 50/PK CX0603 Qdaura卓睿全自动固相萃取仪 4通道24位 SPE-40 DA-50+ 5%苯基二 甲基聚硅氧烷石英毛管色谱柱 30m×0.25mm， 0.25 um 5025-3002 三聚氰胺牛奶样品色谱图 www.agela.com.cn— 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!