海能仪器:测定烟草中烟碱含量(高效液相色谱法)

高效液相色谱法测定烟草中烟碱含量 摘要：建立一种高效液相色谱法测定烟草中烟碱的含量。 方法:色谱柱C18 (250mmX 4．6 mm，5．0um)，流动相为甲醇：0．02 mol／L磷酸氢二钠缓冲溶液(用磷酸调节pH 6．0)=70：30；检测波长259 nm；流速1．0 mL／min；进样量20 uL；柱温30℃ 。 结果:溶液浓度在27．568~165．408 mg／L时峰面积与烟碱浓度呈良好的线性关系，相关系数r为0．999 0，方法的检测限(s／n=3)为0．011 mg／L，平均回收率为97．9％，相对标准偏差(兄 )为1．1％(n=5)。 结论:该方法简便易行，结果准确，可作为烟草中烟碱含量的检测方法。 关键词：HPLC：烟草；烟碱；含量 烟草中含有多种生物碱，其中烟碱(又名尼古丁Nicotine，简称NTC)含量最高，约占烟草生物碱总量的95％。其化学名称为1一甲基一2一(2一吡啶基)吡咯烷。烟碱含量的高低不仅关系到烟草制品的质量，而且关系到人体健康。所以，选择快速准确测量烟碱含量的方法具有重要意义。 目前测定烟草中烟碱含量的方法很多，包括有高效液相色谱法 、重量分析法[51、分光光度法I6]以及连续流动法同等。其中重量分析方法操作繁锁、耗时。分光光度法可测量的浓度范围小，且需要蒸馏或萃取等复杂的前处理，易受外界条件影响。目前烟草行业采用连续流动法测定烟草中的烟碱，采用的仪器昂贵，试剂剧毒，对人体不安全。采用高效液相色谱法对烟草中的烟碱含量进行测定，该方法既能将烟碱与共存生物碱等组份分开，又能准确快速得到分析结果，同时与连续流动法的测定结果相比，无明显差异。 1 材料与方法 1．1 仪器和试剂 ‘ 仪器：LC7000高效液相色谱仪，LC7020紫外/可见检测器，色谱柱 C 18(250．0 mm×4．6 mm，5．0 m)，空气浴振荡器 试剂：烟碱标准品，甲醇(色谱纯)，磷酸(分析纯)、磷酸氢二钠(分析纯)， 二次蒸馏水，烟草样品1、2、3号 1.2 色谱条件 流动相为甲醇：0．02 mol／L磷酸氢二钠缓冲溶液(用磷酸调节pH 6．0)=70：30；检测波长259 nm；流速1．0 mL／min；进样量20uL；柱温30℃。 1。3 样品的处理 称取过100目筛烟草样品0．1 g，置于25 mL容量瓶中，加15 mL甲醇，25℃下空气浴振荡2 h后定容，静置分层后取上清液进行色谱分析。 1．4 标准溶液的配制 精密称量烟碱标准品0．689 2 g置于500 mL容量瓶中，用甲醇溶解，稀释至刻度，即得。 2 结果与分析 2_1 标样和样品色谱 按照“1．2”下色谱条件测定烟碱标准品溶液和样品溶液，烟碱标样和样品色谱见图1和2。由图l、2可知，烟碱色谱峰与杂质峰分离较好，保留时间较适宜。 2．2 精密度 在上述色谱条件下对同一待测样品进行5次重复测定，其RSD为1．1％，表明方法精密度良好。 2．3 回收率 采用标准添加法，在已知烟碱含量的3批样品中加人烟碱标准品。按照“1．2”下色谱条件进行测定，结果见表1。由表1可知，平均回收率为97．9％。 2．4 线性关系 分别精密吸取“1．4” 下标准品溶液0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3,0 mL于25 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度后摇匀， 按“1．2”下色谱条件分别测定，得到烟碱测定工作曲线的线性方程及相关系数。以烟碱浓度为横坐标 ，峰面积为纵坐标y绘制标准曲线。线性回归方程为Y=0．379 9X一3．775 9，r=0．999 0，表明在27．568～165．408 mg／L时，峰面积与烟碱浓度呈良好的线性关系。 2．5 方法定量限与检测限 对27．568 mg／L的标准品溶液进行测定，方法的定量限(S／n=10)为0．28 mg／L，检测限(S／n=3)为0．01 1 mg／L。 2．6 样品含量 取样品按照“1．3”下方法处理后，按“1_2”下色谱条件测定烟碱含量，结果见表2。由表2可知，连续流动学与HPLC法测定结果无明显差异。 3 结论与讨论 采用该方法测定烟草中烟碱含量，精密度符合要求，平均回收率为97．9％，溶液浓度在27．568～165．408 mg／L时峰面积与烟碱浓度呈良好的线性关系。方法的检测限为O．01 1 mg／L，定量限为0．28 mg／L。操作快速简便，样品处理简单，可作为烟草中烟碱含量的检测方法。 采用 连续流动法对同3批样品进行烟碱含量的检测，结果表明，连续流动学与HPLC法测定结果无明显差异. PAGE - 1 -