烟草中水溶性糖、烟碱、氯离子检测方案(流动分析仪)

维普资讯 http：//www.cqvip.com光 谱 实 验 室Chinese Journal of Spectroscopy LaboratoryVol、24，No.2March，2007第24卷，第2期2007年3月 维普资讯 http：//www.cqvip.com走立红等：连续流动分析法测定烟草中水溶性糖、烟碱、氯离子的比较研究225第2期 连续流动分析法测定烟草中水溶性糖、烟碱、氯离子的比较研究 赵立红 方敦煌 (云南省烟草科学研究所 云南省玉溪市聂耳路47号653100) 摘 要 选择了具有代表性的分析仪器进行对比实验，探讨仪器分析方法之间异同点，通过优化分析条件，完善分析方法。通过样品测试数据的比较，表明 API 和 ALLIANCE 仪器上分别测得的水溶性糖、烟碱、氯离子结果一致，为根据需要或现有条件选择实验方法提供了依据。 关键词 烟草，水溶性糖，烟碱，氯离子，连续流动分析。 中图分类号：O657.32 文献标识码：A 文章编号：1004-8138(2007)02\|0224-07 1 前言 烟草及烟草制品质量综合评价，水溶性糖、烟碱、氯离子是不可少的一个技术指标，目前国内烟草中水溶性糖、烟碱、氯的测定，主要采用连续流动分析法。利用流动分析仪测定烟草化学成分的方法也已经有行业标准1-33，但是目前还存在不少问题。工作中我们发现不同台套仪器内的计算式设置有差别，处理好的同一样品溶液放到不同台套仪器上测量，有的结果显然不对；有的由于不理解仪器的计算原理，不能合理的使用分析参数，导致分析结果错误，因此仪器分析的计算成了一个关键问题。为了研究统一的仪器分析方法，使测定结果能与行业标准方法一致，我们选择了具有代表性的API 和ALLIANCE 分析仪器，研究仪器分析方法之间的异同点。通过对仪器分析方法研究及实验优化分析条件，寻找其共性和差异，并提供一种完善统一测定烟草中总糖、还原糖、烟碱、氯离子含量的方法很有必要41。本文对31个样品的测试数据进行了比较和分析，证明了这两种连续流动分析仪分别测得烟草中的水溶性糖、烟烟、氯离子的结果一致。 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 INTEGRAL 型自动分析仪(法国 ALLIANCE 公司)；API305D 型自动分析仪(美国爱斯特公司)；2000D型超纯水器(北京长风仪器仪表公司)；P270普通摇床(中国科学院武汉科学仪器厂)；AB204N分析天平[精度为 0.0001g，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]；DHG-9140 型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。 各种试剂均采用分析纯试剂。 实验用水为超纯水。 ( ① 基金项目：云南主要烟区烟叶质量数据库及评价(05-17) ) ( ②联系人，手机：(0)13094301989；E-mail：zhaolihong _ xp@yahoo. com. cn ) ( 作者简介：赵立红(1967一)，女，云南省呈贡县人、助理研究员，主要从事烟草育种研究和分析测试工作。 ) ( 收稿日期：2006-11-23；接受日期：2006-12-07 ) 2.2 样品前处理 准确称取烘干后的植物样品0.3g 置于 150mL三角瓶中(精确至0.0001g)，加入50mL乙酸(5%)溶液盖上塞子，在普通摇床上振荡萃取 30min，用滤纸过滤上机(如样品液浓度超出工作标准液的浓度范围，则应稀释)。 2.3 测定原理和方法 2.3.1 API连续流动分析法 上机将样品液倒入 15mL 比色管、空白 6mL比色管： 总糖/还原糖的测定：用5%乙酸水溶液萃取烟草样品，然后过滤再放入分析仪器分析。样品(含蔗糖)先用盐酸水解成还原糖，然后还原糖与对羟基苯甲酸酰胼在85℃碱性状态下，反应生成黄色物质(偶氮化合物)，在410nm 波长测定。使用钙离子以增加颜色的强度。 烟碱的测定：用5%乙酸水溶液萃取烟草样品，然后过滤再放入分析仪器分析。 用氯化氰来分裂含有吡啶之烟碱分子，然后继续在缓冲溶液中与对氨基苯磺酸反应，生成聚甲川染料，在460nm 波长中测定其吸光度即可换算成烟碱之含量。 氯离子的测定：用5%乙酸水溶液萃取烟草样品，然后过滤再放人分析仪器分析。在酸性硫氰酸汞溶液中，硫氰酸盐会被氯化物所取代。释放出来的硫氰酸盐与铁离子反应，生成红色复合物。此红色复合物在 480nm 波长测定其吸光度，即可换算成氯化物之含量。 2.3.2 ALLIANCE 连续流动分析法 上机样品液倒到8ml比色管、空白15mL比色管： 总糖/还原糖的测定：用5%乙酸水溶液萃取烟草样品，然后过滤再放入分析仪器分析。样品在ALLIANCE 分析仪器的加热温度为92℃时盐酸水解，在碱性碳酸钠溶液中，所产生的还原糖将铜离子与新亚铜试剂的螯合物还原成为亚铜离子与新亚铜试剂的螯合物，该螯合物为黄色的，在460nm 波长测定。 烟碱的测定：用5%乙酸水溶液萃取烟草样品，然后过滤再放入分析仪器分析。萃取液中的总植物碱(以烟碱计)烟碱与对氨基苯磺酸和氯化氰反应，氯化氰由氰化钾和氯胺T在线反应产生。反应产物用比色计在460nm 波长测定。 氯离子的测定：用5%乙酸水溶液萃取烟草样品中的氯，然后过滤再放入分析仪器分析。氯与硫氰酸汞反应，释放出硫氰酸根进而与三价铁反应形成络合物，反应产物在480nm比色测定。 2.4 校准曲线绘制 2.4.1 API连续流动分析法校准曲线绘制 总糖/还原糖标准曲线绘制：分别吸取 100000mg·L-i总糖/还原糖标准溶液0.1、0.25、0.5、1、1.5、2、2.5mL放入100mL 容量瓶中，各加入5%乙酸定容，在波长 410nm 测定后绘制校准曲线。其线性关系很好，相关系数为r总糖=0.9999(n=7)、r还总糖=0.9997(n=7)。 烟碱校准曲线绘制：分别吸取10000mg·L-自烟碱标准溶液0.2、0.5、1、2、3、4、5mL放入100mL容量瓶中，各加入5%乙酸定容，在波长410nm 测定后绘制校准曲线。其线性关系很好，相关系数为r烟碱=0.9999(n=7)。 氯离子标准曲线绘制：分别吸取2000mg·L-氯离子标准溶液 0.2、0..5、1、2、3、4、5mL放入100mL容量瓶中，各加入5%乙酸定容，在波长410nm 测定后绘制校准曲线。其线性关系很好，相 关系数为ru离子=0.9999(n=7)。 2.4.2ALLIANCE 连续流动分析法校准曲线绘制 总糖/还原糖校准曲线绘制：分别吸取50000mg·L-总糖/还原糖标准溶液1、2、3、4、5mL放人100mL容量瓶中，各加加5%乙酸定容后，标准工作液变为500mg·L-(标3)，1000mg·L-(标4)，1500mg·L-(标5)，2000mg·L-(标6)，2500mg·L-(标7)，然后再从1000mg·L-(标4)中取 10mL 放人 100mL 容量瓶中，加人5%乙酸定容后，得到100mg·L-(标1)，从2500mg·L-(标7)中取10mL 放人100mL容量瓶中，加入5%乙酸定容后，得到 250mg·L-(标2).在波长 410nm 测定后绘制校准曲线。其线性关系很好，相关系数为r总娄=0.9999(n=5)、还总聪=0.9993(n=5). 烟碱校准曲线绘制：分别吸取10000mg·L-I烟碱标准溶液1、2、3、4、5mL放人100mL容量瓶中，各加入5%乙酸定容后，标准工作液变为100mg·L-(标3)，200mg·L-(4)，300mg·L-(标5)，400mg·L-(标6)，500mg·L-(标7)，然后再从 200mg·L-(标4)中取10mL 放人100mL 容量瓶中，加人5%乙酸定容后，得到20mg·L-(标1)，从500mg·L-(标7)中取10mL放人100mL 容量瓶中，加人5%乙酸定容后，得到50mg·L-(标2)。在波长 410nm 测定后绘制校准曲线。其线性关系很好，相关系数为r烟娄=0.9999(n=5)。 氯离子校准曲线绘制：分别吸取2000mg·L-氯离子标准溶液1、2、3、4、5mL放入100mL 容量瓶中，各加力5%乙酸定容后，标准工作液变为 20mg·L-(标3)，40mg·L-(标4)，60mg·L-(标5)，80mg·L-(标6)，100mg·L-\(标7)，然后再从40mg·L-(标4)示取 10mL 放人 100mL容量瓶中，加人5%乙酸定容后，得到 4mg·L-(标1)，从 100mg·L-(标7)中取 10mL 放人100mL容量瓶中，加人5%乙酸定容后，得到10mg·L-(标2)。在波长410nm测定后绘制校准曲线。其线性关系很好，相关系数为r系离子=0.9993(n=5)。 3 结果与讨论 3.1 方法可行性 按上述方法对31个烟草样品进行了平行3份试验，测定结果见表1、2。为了能使 API连车流动分析法和 ALLIANCE 连续流动分析法测定数据结果看起来更为直观，我们对它们进行了t-检验(表3)和回归分析(图1、2、3、4)。回归方程：y总糖=0.9957x+0.109，相关系数r总糖=0.9993；y还总糖=0.9984x+0.0376，相关系数r还总糖=0.9991；y烟=0.9972x+0.0037，相关系数r烟=0.9975；y离子=0.9949x+0.0004，相关系数r离子=0.9961(n=31)。 3.2 显著性分析 表3列出了API总糖、还原糖、烟碱、氯离子、ALLIANCE总糖、还原糖、烟味、据离子数据的泊松相关系数、t值、F值。泊松相关系数为 0.99，t

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