化学药中枸缘酸莫沙必利分散片含量检测方案

WCJ··PS2004 ，19(4)：283~285 华西药学杂志第19卷284 枸橼酸莫沙必利分散片的药物动力学研究 谭 培，徐小平”，尹华熙，严绍华，廖丽云，任 霞，黄荣川 (四川大学华西药学院，四川成都610041) 摘要：目的 研究枸橼酸莫沙必利分散片(MCDT)在家犬体内的药物动力学特征并与3种种橼酸莫沙必利片(MCT)进行比较。方法 20只健康家犬4X4交叉设计分成4组，分别口服MCT 10 mg，采用 HPLC法测定给药后不同时间点血浆中莫沙必利的浓度，用3p97程序拟合房室模型并计算其药动学参数，评价不同莫沙必利片在动物体内的药物动力学特征和生物等效性。结果 MCDT和3种MCT的血药浓度农时间曲线符合口服二室开放模型，主要药动学参数分别为 Cmax：135.425 ±3.728、125.759±7.512、121.334 ±4.656、121.679 ±6.910 ng ml； Tmax：0.648 ±0.165、0.710 ±0.194、0.814±0.207、0.731 ±0.176 h；AUC(0~t) ：344.432 ±37.173、329.625 ±36.455、302.931 ±36.044、303.860±30.419 ng h ml；AUC(0~in) ：396.733 ±46.616、374.787 ±43.068、337.173 ±49.057348.480 ±20.088 ng h ml；MCDT相对加斯清片的生物利用度 Fo~t为：105.5%±15.5%。结论 统计结果表明MCDT与其他3种MCT具有生物等效性(P>0.05)，而 Cmax和 Tmax明显优于MCT。 关键词：枸橼酸莫沙必利；药物动力学；枸橼酸莫沙必利分散片；高效液相色谱法 中图分类号：R975，R969.1 文献标识码：A 文章编号：1006-0103(2004)04-0283-03 Pharmacokinetics study on Mosapride Citrate dispersible tablets TAN Pei ，XU Xiao- ping，YIN Hua- xi，YAN Shao - hua ，LIAO Li -yun ，REN Xia ，HUANG Rong- chuan(West China School of Pharmacy， Sichuan University， Chengdu 610041， China) Abstract ：OBJECTIVETTo study the pharmacokinetics characteristics of Mosapride Citrate dispersible tablets(MCDT) in dogs， which wascompared with three kinds of Mosapride Citrate tablets(MCT).METHODS20 healthy dogs were divided into 4 groups by 4 ×4 cross-overdesign. Each group orally took one kind of MCT. Mosapride concentrations of various time point in dogs plasma were determined by HPLC.3p97 program was used to fit the compartment model ，calculate the pharmacokinetics parameters and assess the characteristics of pharmacokinetics of various MCT and bioequivalence. RESUL TS The concentration- time curves of four kinds ofMCT were conformed to a two- compaitment open model. The main pharmacokinetics parameters of MCDT and three kinds of MCT were as follow：Cmax：135.425 ±3.728，125.759 ±7.512，121.334 ±4.656，121.679 ±6.910 ng ml； Tmax ：0.648 ±0.165，0.710 ±0.194，0.814±0.207，0.731 ±0.176h；AUC(o~t)：344.432 ±37.173，329.625±36.455 ，302.931 ±36.044，303.860 ±30.419 ng hml；AUC(0~inf) ：396.733 ±46.616，374.787 ±43.068，337.173 ±49.057，348.480 ±20.088 ng hml. The relative bioavailability F(0~t)%of MCDT relate to Gasmotin tablets was105.5%±15.5%.CONCL USION The statistic results show that MCDT and the other MCT are bioequivalent(P>0.05). Cmax and Tmax ofMCDT are apparently better than the others. Key words ：Mosapride； Pharmacokinetics；Newboronia dispersible tablets；HPLC 枸橼酸莫沙必利(MCT)在临床上用于慢性胃炎、功能性消化不良、反流性食管炎的治疗并缓解手术伴随的一系列胃肠道症状。莫沙必利通过激动肠肌层神经丛的5-HT4受体，使神经末梢的乙酰胆碱释放增加而促进胃排空。该药选择性作用于整个消化道，对胃、肠作用较强，对结肠运动影响相对较小，可减少因结肠运动亢进导致的腹痛、排便次数增加、腹泻和软便等不良反应；由于其与多巴胺D2受体无亲和力，可避免因拮抗多巴胺D2受体导致的锥体外系反应及催乳素分泌增多等不良反应。电生理研究 表明，该药无延长离体心室肌和蒲氏纤维动作电位时程的作用，故具有更好的安全性112]。为此，我们特对枸橼酸莫沙必利分散片(MCDT)进行了药物动力学研究，并以进口莫沙必利片为参比制剂，评价了国内不同厂家生产的MCT片在动物体内的药物动力学和相对生物利用度。 实验部分 1.1 药品、试剂与仪器 加斯清片( Gasmotin，大日本制药厂，批号： ( 作者简介：谭培，男，正攻读药物分析专业的硕士学位。 ) ( *通讯作者(Correspondent) ) 0310702)；快力片(LN，鲁南制药股份有限公司，批号：030118)；贝络钠片(Boronia，批号：030809)，新络纳片(Newboronia ，批号：030603)，枸橼酸莫沙比利对照品(纯度99.5%)(成都大西南制药股份有限公司)；卡马西平对照品(中国药品生物制品检定所，纯度99.5%)。LC-6A高效液相色谱仪，SPD- 10AVP紫外/可见检测器(日本岛津)；LC- 2002色谱工作站(中科院成都分院)；GL-88B 旋涡混合器(江苏海门麒麟医用仪器厂) ；LD4-2离心机(北京医用离心机厂)：Branson 200 超声波清洗机(美国)。 1.2 受试对象和给药方案 20只健康家犬(四川大学实验动物中心)，20~25 kg，随机均分为4组。采用4X4拉丁方交叉设计，分别单剂量口服4种MCT片10mg，一周后交叉给药，连续4次，期间固定饮水时间和饮水量。 1.3 样品的采集与处理 分别于0时间和给药后0.17、0.25、0.33、0.42、0.500.67、1.00、1.50、2.00、3.50、5.50、7.00h抽取静脉血3.5ml，采集的血样经肝素抗凝，离心，置冰 箱存放备测。 1.4 血药浓度的测定 1.4.1 色谱条件 Aichrom色谱柱(250 mm ×4. 6mm，5 um)；流动相为磷酸二氢钾-甲醇-乙腈(30：655)；流速0.8ml min1；柱温35℃；检测波长306nm31：内标物为卡马西平。 1.4.2 血样的预处理 精密吸取血浆0.5 ml于10ml 尖底试管中，精密加入内标液(卡马西平对照液202 ng ml)100p1， 2. 0 mol L 的氢氧化钠100pl混匀后用含3.5%异戊醇的正己烷3.5ml漩涡混合萃取6 min ，离心5 min ，取上层液于尖底试管中，置50℃水浴上空气吹干，残渣溶于100pl流动相，混匀，80ul进样。 1.5 方法学考察 1.5.1 专属性 空白及血浆样品色谱见图1，血浆样品中待测物和内标物的保留时间分别为4.56 min和7.81 min。峰形良好，分离完全，且无杂质峰干扰(图1A~1C)。 图1 空白血浆(A)、空白血浆加对照品和内标(B)及口服给药后血浆样品(C)的 HPLC图 Fig1 HPLC chromatogra ms of blank plasma( A) ，blank plasma spiked with mosapride and internal standard( B) and plasma sample after oral administration of Mosapride in a dog(C) 1.5.2 血浆标准曲线的制备 精取适量枸橼酸莫沙必利对照品，配成枸橼酸莫沙必利贮备液(0.694ugml一)，用甲醇稀释得276.61、138.8、69.4、34.7、17.358.68、4.302.151.04 ng ml的莫沙必利对照液；精密称取适量卡马西平对照品，配成卡马西平贮备液(202 ug ml )，用甲醇稀释得卡马西平对照液(202 ng ml寻)。将不同浓度的枸橼酸莫沙必利对照液，分别加入0.5ml空白血浆中，再加入100ul卡马西平对照液，照“1.4.2”项下方法处理后进样。由莫沙必利与内标卡马西平的峰面积比对莫沙必利浓度作直线回归，得回归方程为：Y=0.037X+0.0026(r=0.9991)，线性范围为：1.04~276.6 ng ml。最低定量浓度为1.04 ng ml。 1.5.3 回收率与精密度 取0.5ml空白血浆9份，分别加入枸橼酸莫沙必利对照液使成276.6、17.35、2.15ng ml高、中、低3种浓度的对照液，每浓度3 份，按“1.4.2”项下方法处理后进样，计算萃取回收率。另配制相应浓度的莫沙必利流动相溶液9份.不经萃取直接进样作为标准，两组峰面积进行比较，计算莫沙必利的方法回收率。同法配制低、中、高浓度的标准血浆样本，按上述方法测定，日内重复测定6次，且各浓度连续测定5d，计算日内、日间精密度，结果见表1. 表1 狗血浆中莫沙必利浓度的回收率和精密度(n=3) Table 1 The recovery and precision of Mosapride in a dogs’ plasma(n=3) C/ngml- Recovery/ % Extract RSD RSD between- recovery/ % within a day/% days/% 2.71 94.37 81.25 0.12 4.40 21.69 99.56 84.19 0.61 2.76 347.0 101. 72 79.24 1.56 0.45 1.6 数据分析 试验数据用3p97程序处理，进行房室模型拟 合，求得药动学参数，AUC按梯形法计算，Cmax Tmax为实测值。对 AUC(0~t) AUC(0~inf)、Cmax取对数进行多因素方差分析、双单侧t检验，对 Tmax进行非参数检验(Wilcoxon 符号秩和检验法)，并对制剂的生物等效性进行评价。以进口加斯清片为参比制剂，枸橼酸莫沙必利片相对生物利用度按下式计算：F=AUC(0~t)(检)/AUC(0~inf)(参)。 1.7 结果 1.7.1 药物动力学参数和生物利用度 4种MCT的血药浓度数据经3p97药物动力学程序自动拟合，符合口服二室开放模型一级吸收过程，主要药动学参数见表2。平均药-时曲线见图2，生物利用度见表3。 图2 贝络钠加斯清、新络钠、快力在犬的血浆中的平均药-时曲线 Fig 2 The mean plasma concentration- time curves of Ne wboronia，Gasmotin，LNand Boronia in 20 dogs plasma 1. 7.2 生物等效性分析 以进口加斯清片为参比，4种中橼酸莫沙必利片的 AUC(0~t)、AUC(0~inf)、Cmax、Tmax均无统计学意义(P>0.05) .新络纳片的双、单侧t检验和90%置信区间结果分别为tp：4.716≥t(1-0.05)：1.943、t2：3.161≥t(1-0.05)：1.943，93.6%~116.7%；t1：4.332≥t(1-0.05)：1.943、t2： 2.572 ≥t(1-0.05)：1.943，93.4%~120.0%；t1：12.464≥t(1-0.05)：1.943、t2：6.176≥t(1-0.05)：1.943，102.9%~113.0%。新络纳片、贝络钠片、鲁南枸橼酸莫沙必利片的相对生物利用度分别为109.3%±14.7%、92.6%±11.1%、96.5%±16.8%，均在80%~120%范围内。结果表明新络钠片及其他两种莫沙必利片与进口加斯清片生物等效。 2 讨论 文中建立了一种用 HPLC测定狗血浆中莫沙必利浓度的方法，以卡马西平为内标，选用磷酸二氢钾-甲醇-乙腈为流动相，分离度≥1.5、线性围为1.04~276.6 ng ·ml，最低检测浓度为1.04ng ml。所用方法操作简便、专属性强、灵敏度高，结果令人满意，并能满足体内药物动力学研究的需要。文献[4，5]采用274 nm 作为检测波长，此时血浆中内源性成分干扰较大。经反复比较，在保证灵敏度和专属性的前提下，选用306 nm 作为检测波长。 统计分析表明，以加斯清片为参比制剂，新络钠片快力片、贝络钠片均为生物等效制剂，生物利用度也符合要求(80%~120%)。但从药动学参数可看出，枸橼酸莫沙必利分散片(新络钠片)达峰时间较其余枸橼酸莫沙必利片前移(双、单侧t检验有显著性差异，非参数检验无统计学意义)。由于枸橼酸莫沙必利原料药几乎不溶于水，制成分散片后，加速了其在体内的溶出，从而提高了相对生物利用度，使达峰时间前移。 Parameters Newboronia Gasmotin LN Boronia AUC(0~t)/ngh ml 344.432 ±37.173 329.625 +36.455 302.931 ±36.044 303.860±30.419 AUC(0~inf)/ng h ml 396.733 ±46.616 374.787±43.068 337.173 ±49.057 348.480 +20.088 Cmax ng ml" 135.425 ±3.728 125.759 ±7.512 121.334 ±4.656 121.679 +6.910 Tmax/h 0.648 +0.165 0.710 +0.194 0.814 ±0.207 0.731 ±0.176 MRT(o~t)/h 2.551 ±0.041 2.417 ±0.127 2.375 ±0.184 2.365 ±0.059 Ti/2ke/h 2.305 ±0.341 2.270 ±0.539 2.060±0.318 2.553 ±1.198 MRT(0~inf)/h 3.578 ±0.339 3.378 +0.566 3.130 ±0.447 3.541±1.055 表3 枸橼酸莫沙必利片口服给药后的相对生物利用度 Table 3 The relative bioavailability of Mosapride Citrate tablets afteroral administration F Newboronia/% LN/% Boronia/% F(0~t) 105.5±15.5 93.0 ±15.8 92.7 ±9.7 F(0~inf.) 107.2±18.1 91.3±19.3 93.8 +9.4 ( 参考文献： ) 2002，37(5)：367 ( 胡露，王江.加斯清[J].中国新药杂志，2003，12(6)：481 ) ( 刘文华，王颖，盛龙生.构橼酸莫沙必利有关杂质的研究[J]. 中国药科大学学报，2001，32(2)：133 ) ( [4] 李玉兰，黄俊杰.高效液相色谱法测定枸橼酸莫沙必利片含量 及含量均匀度[J].药物分析杂志，2002，22(1) ：76 ) ( [5] 邵泓.枸橼酸莫沙必利及其制剂的 HPLC测定[J].中国药学 杂志，2002，37(5)：367 ) ( 收稿日期：2004-03 ) O Tsinghua Tongfang Optical Disc Co.， Ltd. 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