抗体药物中蛋白分析检测方案

东曹LC 数据表No. Bio-015 TSKgel G4000SWxL 色谱柱(尺寸排阻色谱法)对 PEG 化鼠单抗(IgG1)的分析(PEG 分子量：20K) 治疗性蛋白的 PEG化是一种延长蛋白药物体内半衰期的策略。本数据中，介绍了通过混合N-羟基琥珀酰亚胺酯衍生物(IgG：PEG-NHS= 1：1 到1：4)将PEG导入抗体，并使用一款分子尺寸排阻、适合蛋白分析的 TSKgel G4000SWxL色谱柱进行 PEG 化分析的应用。 min 色谱条件 色谱柱 ：TSKgel G4000SWxL(7.8mml.D.x30cm)， 2 columns 流动相 ： 20mmol/L Phosphate+0.3mol/L NaCI (pH7.0) 流速 ：0.25mL/min 检测 ： UV(280nm) 温度 ：25C 进样体积 ：20pL 样品浓度 ：0.5g/L 液相色谱仪：Agilent 1120 Compact LC (gradient auto system) PEG化程序： PEG 化反应是在 20mmol/L 磷酸盐缓冲液 +0.3mol/L NaCI (pH7.0)溶液中、4度下进行的。 将PEG-NHS 酯 (SUNBRIGHT ME-200CS， 分子量：20000， NOF公司，日本)/甲醇的摩尔比分别为1、2、4的混合物加入浓度为 5g/L 的抗体溶液，孵化反应17个小时。 取上述100uL的反应溶液，加入900uL 的20mmol/L 磷酸盐缓冲液 +0.3mol/L NaCI (pH7.0)后进样分析测定。 2