抑制呕吐、营养神经、促进代谢、预防血栓、治疗贫血……维生素B6的功效你了解过吗?
维生素B6(Vitamin B6)又称吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在体内以磷酸酯的形式存在,是一种水溶性维生素,遇光或碱易破坏,不耐高温。维生素B6为人体内某些辅酶的组成成分,参与多种代谢反应,尤其是和氨基酸代谢有密切关系。
抑制呕吐、营养神经、促进代谢、预防血栓、治疗贫血……维生素B6的功效你了解过吗? 维生素B6(Vitamin B6)又称吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在体内以磷酸酯的形式存在,是一种水溶性维生素,遇光或碱易破坏,不耐高温。维生素B6为人体内某些辅酶的组成成分,参与多种代谢反应,尤其是和氨基酸代谢有密切关系。 在乳粉中,维生素B6作为营养强化剂使用。其添加量应遵循《GB 14880-2012 食品安全国家标准 食品营养强化剂使用标准》中的要求。对于婴幼儿配方乳粉中维生素B6的添加还应遵守其对应的产品标准《GB 10765-2010 食品安全国家标准 婴儿配方食品》及《GB 10767-2010 食品安全国家标准 较大婴儿和幼儿配方食品》。 检验其是否符合标准,可使用悟空K2025高效液相色谱仪测定。02 乳粉中维生素B6的含量测定高效液相色谱法 抑制呕吐、营养神经、促进代谢、预防血栓、治疗贫血……维生素B6的功效你了解过吗? 维生素B6(VitaminB6)又称吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在体内以磷酸酯的 形式存在,是一种水溶性维生素,遇光或碱易破坏,不耐高温。维生素B6为人体内某些辅酶 的组成成分,参与多种代谢反应,尤其是和氨基酸代谢有密切关系。 在乳粉中,维生素B6作为营养强化剂使用。其添加量应遵循《GB14880-2012食品安全国 家标准食品营养强化剂使用标准》中的要求。对于婴幼儿配方乳粉中维生素B6的添加还应 遵守其对应的产品标准《GB10765-2010食品安全国家标准婴儿配方食品》及《GB 10767-2010食品安全国家标准较大婴儿和幼儿配方食品》。 检验其是否符合标准,可使用悟空K2025高效液相色谱仪测定。 01 实验准备 1、原理 样品经水提取,沉淀蛋白后,取上清液,采用液相色谱分离,荧光检测器检测,外标法定量。 2、色谱条件 悟空K2025高效液相色谱仪:K2025P2二元高压输液泵、K2025AS自动进样器、K2025CO 柱温箱、RF-20A荧光检测器、K2025ATD模数转换器、Wookinglab色谱工作站; 色谱柱:C18,4.6×250mm,5μm或者相当的色谱柱; 流动相:流动相A为甲醇,流动相B为辛烷磺酸钠溶液,按下表进行梯度洗脱: 时间 (min) 流速 (mL/min) A (%) B (%) 0.0 1.000 10.0 90.0 3.0 1.000 10.0 90.0 10.0 1.000 35.0 65.0 22.0 1.000 35.0 65.0 23.0 1.000 10.0 90.0 30.0 1.000 10.0 90.0 柱温:35℃; 进样量:10μL; 检测器及波长:荧光检测器,激发波长为293nm,发射波长为395nm。 实验结果 重复性测试 色谱图如图1所示,积分结果如表1所示。 图1维生素B6标准溶液的色谱图 表1维生素B6标准溶液色谱图积分结果 目标物 吡哆醛 吡哆醇 吡哆胺 保留时间 (min) 11.187 15.915 20.920 峰面积 (mAU.s) 102.393 617.887 97.286 峰高 (mAU) 4.959 68.193 12.448 理论塔板数 6758 71697 168237 分离度 - 12.09 22.67 对称/拖尾因子 1.06 1.07 1.12 由表1中数据可知,吡哆醛与吡哆醇的分离度为12.09,吡哆醇与吡哆胺的分离度为22.67,具有较好的分离度。三种物质的拖尾因子范围为1.06~1.12,均有良好的峰型。 将维生素B6标准溶液连续进样7针,叠加的色谱图如图2所示,结果见表2。 图2维生素B6溶液连续进样7针叠加的色谱图 表2维生素B6溶液连续进样7针重复性数据统计 目标物吡哆醛 吡哆醇 吡哆胺 _ 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 11.187 102.393 15.915 617.887 20.920 97.286 2 11.173 102.624 15.908 620.260 20.900 97.216 3 11.173 102.272 15.912 618.631 20.908 97.314 4 11.168 102.193 15.903 618.940 20.888 98.037 5 11.180 102.411 15.907 619.105 20.888 97.824 6 11.162 102.390 15.905 620.355 20.893 97.816 7 11.163 102.484 15.910 619.127 20.895 97.624 平均值11.172 102.395 15.909 619.168 20.899 97.588 RSD% 0.081 0.136 0.026 0.141 0.056 0.328 由表2中数据可知,维生素B6各组分保留时间的RSD范围为0.026%~0.081%,峰面积的 RSD范围为0.136%~0.328%,均具有良好的定性定量重复性。 含量测定 校准曲线 将配制好的维生素B6混合标准工作液在HPLC上进行测定叠加色谱图见图3。维生素B6各 组分混合标准工作液在测定浓度范围内,曲线的确定系数R2≥0.9995,线性关系均良好。 图3维生素B6混合标准工作液浓度系列曲线叠加色谱图 样品含量测定 以市售乳粉为样品,按照流程对样品进行处理,并计算样品中维生素B6各组分的含量。样品 的色谱图如图4所示。 图4乳4粉样品的色谱图 根据计算,此乳粉样品中维生素B6的含量为10.9mg/100g。 03 结论 通过对维生素B6各组分的峰型、重复性、灵敏度、线性的测试以及对乳粉样品中维生素B6的含量进行测定,实验结果表明: 用WookingK2025高效液相色谱仪测定维生素B6,维生素B6各组分峰分离度均大于1.5,三种物质的拖尾因子范围为1.06~1.12,具有良好的分离度及峰型;重复性测试中,将维生 素B6混合标准溶液连续进样7针,维生素B6各组分的保留时间的RSD范围为 0.026%~0.081%,峰面积的RSD范围为0.136%~0.328%,均有良好的定性定量重复性;维 生素B6各组分的仪器检出限均小于4.819ng/mL,仪器定量限均小于16.064ng/mL;在 测定浓度范围内,维生素B6各组分均具有良好的线性关系,确定系数R2均≥0.9995;乳粉 样品中维生素B6的含量为10.9mg/100g。 因此,WookingK2025高效液相色谱仪可以满足《GB5009.154-2016食品安全国家标准食 品中维生素B6的测定(第一法)》中维生素B6含量测定的需求。
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