采用TSKgel GMPWXL色谱柱测定广叶绣球菌水溶性多糖分子量分布

广叶绣球菌（Sparassis latifolia）属于绣球菌科真菌。绣球菌中的β-葡聚糖含量丰富，具有抗肿瘤、抗氧化、抗辐射、免疫调节、抗炎、抗病毒、降血糖、降血脂、提高机体造血功能等多种生物活性。这里分享的文献中作者采用了东曹尺寸排阻色谱柱TSKgel GMPWXL及蒸发光散射检测器（ELSD）检测，建立了一套HP-SEC高效尺寸排阻色谱法快速、准确直接测定广叶绣球菌水溶性多糖分子量分布测定方法。采用 TSKgel GMPWxL色谱柱测定广叶绣球菌水溶性多糖分子量分 布 广 叶 绣 球 菌 水溶性多糖 (water-soluble polysaccharide from Sparassis latifolia) 【基本信息】 广叶绣球菌 (Sparassis latifolia) 属于绣球菌科真菌。绣球菌中的β-葡聚糖含量丰富，具有抗肿 瘤、抗氧化、抗辐射、免疫调节、抗炎、抗病毒、降血糖、降血脂、提高机体造血功能等多种生 物活性。这里采用 TSKgel GMPWXL 色谱柱及蒸发光散射检测器(ELSD)检测，建立了 一 套 HP-SEC 高效尺寸排阻色谱法快速、准确直接测定广叶绣球菌水溶性多糖分子量分布测定方法。 【分析条件】 色谱柱 ：： TSKgel GMPWXL (I.D. 7.8 mmx30 cm， 13 um) 流动相： 0.05M乙酸铵(pH7.0) 流速：0.6mL/min 进样体积：20uL 柱温：40℃ 检测器： ELSD(载气：空气；载气压力 4.5 bar； 流量2L/min；漂移管温度60℃) 【广叶绣球菌水溶性多糖成分的制备与纯化】 广叶绣球菌热风干燥品多糖和真空冷冻干燥品多糖的制备方法参照文献[1]，采用热水提取，三氯乙 酸脱蛋白的方法进行。 烘干品水溶性多糖组分SCG-G的纯化：将烘干品多糖用蒸馏水溶解，离心取上清定容为100 mg/mL 的溶液，加入等体积的无水乙醇，混匀后静置过夜，以8 000 r/min 离心 10 min 取上清，收集上清 液减压浓缩至原体积的1/3，用截留分子量1000的透析袋，对蒸馏水透析48 h，透析后冷冻干燥 即为烘干品水溶性多糖 SCG-G。 冻干品水溶性多糖组分 SCG-D 的纯化：冻干品多糖用蒸馏水溶解后离心取上清定容为 100 mg/mL 的溶液，加入等体积的无水乙醇，混匀后静置过夜，以8 000 r/min 离心 10 min 取沉淀部分，沉淀 部分用蒸馏水溶解后以 8 000 r/min 离心 10 min 取上清，用截留分子量14000的透析袋，对蒸馏 水透析48h， 透析后冷冻干燥即为冻干品水溶性多糖 SCG-D。 【分子量标准品溶液及多糖样品配制】 分子量标准品溶液配制：准确称取右旋糖酐标准品(分子量分别为： 2700，5250，13050，64650，135350，300600，922000，1719000)及多糖样品，，以 0.05 mol/L 乙酸铵溶液溶 解约 2 mg/mL。 【测定方法】 以右旋糖酐标准品保留时间对分子量的对数作线性回归制作校正曲线，对多糖样品分析结果进行分 子量计算。 【分析结果】 图 1绣球菌 子 实体烘干品多糖 SCG-G成分的凝胶色谱图 图2绣球菌子实体冻干品多糖 SCG-D成分的凝胶色谱图 表1绣球菌多糖成分 SCG-G 和 SCG-D HPSEC 结果 序号 名称 保留时间/min Mn/Da Mw/Da Mp/Da Mz/Da 多分散性 多糖含量/% 1 SCG-G 14.908 0.92×104 1.48×104 1.20×104 2.22×104 1.60 95.97 2 SCG-D 12.673 1.73×10° 2.14×10° 2.14×105 3.60×10° 1.43 98.40 【结果与讨论】 采用 TSKgel GMPWxL色谱柱建立了广叶绣球菌多糖分子量及分布测定方法，分离谱图见图1、图2， 绣球菌多糖 SCG-G和 SCG-D在色谱图上均呈现单 一 色谱峰。如表1所示，苯酚-硫酸法测得 的多糖含 量 均在95%以上，说明 二 者均为均一多糖。通过重均分子标准曲线得到其重均分子量分别 为 1.48×104 Da 和2.47×10 Da， 最高峰分子量分别为1.20×104 Da 和2.14×10 Da， 多分散性指数表 明2种多糖均具较好的均一性。以上结果说明该方法适合绣球菌多糖分子量及分布测定。 【参考资料】 1.王宏雨 ，张迪，罗 贝 贝，翁 梦 婷，曾辉，林 衍 铨 2种广 叶 绣球 菌 多糖分子量分布及抗炎 活 性比较食品工 业 .2023，44(2)：156-160