LC-MSMS测定植物源食品中咪鲜胺及其代谢产物

本文建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪测定植物源性食品中咪鲜胺及其代谢物残留量的方法。目标物在线性范围在10~160 μg/L间，相关系数R≥0.99。在空白青菜基质中添加低、中、高三个浓度（0.01、0.02、0.1 mg/kg）的混标，回收率在71.1-107%之间，RSD在1.18~3.88%。本方法实现了正负离子模式的一针分析，可满足植物源性食品中咪鲜胺及其代谢物快速检测的需要。SSL-CA23-046Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-751 LC-MSMS 测定植物源食品中咪鲜胺及其代 谢产物 LCMSMS-751 摘要：本文建立了使用岛津三重四极杆液质联用技术测定植物源性食品中咪鲜胺及其代谢物残留量的方法。实验采用外标法建立基质匹配校准曲线，在10~160 ug/L 浓度范围内，目标物线性关系良好，相关系数均大 于 0.99。对空白青菜基质进行了低、中 、高(0.01、0.02、0.1 mg/kg) 三个浓度水平的加标回收实验，回收 率 在71.6-107%之 间 ， RSD 在1.18~3.88%之间。相较于标准方法，该方法可实现 ESI正负离子模式下的一 针分析，同时通过对2，4，6-三 氯苯酚特征离子对的优化，提升了原方法抗基质干扰能力。 关键词：三重四极杆液质联用仪 植物源性食品 咪 鲜胺 技术特点： 心实现ESI 正负离子模式同时分析，提高检 测 效率。 小在标准的基础上优化了2，4，6-三氯苯酚特征离子对，提升了原方法抗基质干扰能力。 咪鲜胺是一种咪唑类广谱高效杀菌剂，主要是通 过抑制雄激素的分泌来破坏真菌的生殖发育，具有保 鲜和杀菌防腐的双 重 功效，被广泛用于经济作物的种 植与保藏过程。 有研究表明，咪鲜胺在环境中首先降解为N-丙 基-N-[2-(2，4，6-三氯苯氧基)和N-醛基-N-丙基-N-[2-(2，4，6-三氯苯氧基)乙基]脲，最后降解为2，4，6-三氯 苯酚。虽然咪鲜胺属于低毒性杀 菌 剂 ，但其最终代谢 产物可能会对环境以及人类产生长期不良影响。因此， 我国 GB 2763-2021《食品安全国家标准食品 中 农药最 大残留限量》对不同食品中咪鲜胺及其代谢物限量做 了明确要求。 本文参考 SN/T 5444-2022《出口植物源食品中咪 鲜胺及其代 谢 产物的测定液相色谱 -质谱/质谱法》，使用岛津三重四极杆液质联用仪，建立了植物源性食 品中咪鲜胺及其代谢物的检测 方 法，可为相关从业人 员提供参考。 实验部分 1.1仪器 岛津三重四极杆液质联用仪 LCMS-8050，配置信息如下： 系统 控 制器 ： CBM-20A 脱气机：：DGU-20A 5R 输 液 泵 LC-30AD×2 柱温 箱：CTO-20AC 自动进样器 ： SIL-30AC 质 谱 仪：：LCMS-8050 色谱工作站： Labsolutions Ver. 5.109 1.2分析条件 液相色谱条件 色 谱 柱： Shim-pack GIST C18-AQ HP (100 mmx2.1 mml.D.， 1.9 um，岛津 (上海)实验器材有限公司， P/N： 227-30807-02) 流 云 动 相： A-水；B-甲醇 进样体积： 5uL 温 40°℃流 速 0.4 mL/min 柱 洗 针液： 甲醇/水=1：1 (v：v) 洗脱方式： 梯度洗脱，B相起始浓度为 30%，时间程序如表1所示。 表1 梯度洗脱程序 时间 (min) 单元 处理命令 值 1.00 泵 B Conc 30 2.00 泵 B Conc 100 5.00 泵 B Conc 100 5.10 泵 B Conc 30 7.50 控制器 STOP 质谱条件 离子化模式：ESI± 雾化气流速：33.0 L/min 接口电压：4kV 干燥气流速：10.0 L/min 接口 温温度：300°℃ 加热气流速：10.0 L/min DL 温度：250°℃ 碰 撞 气：氩气 加热模块温 度 ：400°C 扫描模式：：多反应监测 (MRM) MRM 参 数：见 见表2 表2 MRM 参数 序号 中文名称 英文名 CAS 号 前体离子 产物离子 Q1 PreBias(V) CE Q3 Pre Bias(V) 1 咪鲜胺 Prochloraz 67747-09-5 376.00 266.00308.00* -14-14 -18-13 -29-13 2 N-丙基-N-[2-(2，4，6- BTS44595 139520-94-8 327.00 129.15 -23 -21 -21 三氯苯氧基) 284.00* -12 -16 -17 3 N-醛基-N- 丙基-N-[2- (2，4，6-三氯苯氧基)乙基]脲 BTS44596 139542-32-8 355.00 268.00 -25 -19 -29 310.00* -18 -15 -13 4 BTS45186 88-06-2 194.95 35.05* 11 22 12 2，4，6-三氯苯酚 196.95 35.05 16 29 10 *代表定量离子对 ■样品前处理 图1 样品前处理图 结果与讨论 3.1 BTS45186 离子对的优化 标准中 BTS45186选用的离子对为(196.95>161.00) 和(196.95>95.00)，但在实际应用中发现，其 定量离子对 (196.95>161.00) 容易受到样品基质影响，背景干扰较大(如图2左图所示)。本文考虑到该化 合物含有3个氯离子，可以形成具有不同质量数的同位素峰，考察了其同位素峰的二级质谱碎裂情况，发现主 要二级碎片均为氯离子。通过质谱参数优化，选择碎片离子 m/z 35.05 丰度最高的 m/z 194.95 和 m/z 196.95作为母离子，采用两个不同的母离子分别找一个子离子的方式获得5个得分点，以满足欧盟 EC 657/2002 中化 合物定量的鉴别点数要求。相比标准方法， BTS45186的离子对通道基线较低，专属性更强(如图2右图所示)。 图2 BTS4518 在不同基质(青菜 、桔 子 、萝卜、芹 菜 、生 姜)中 定 量离 子 对优化 前后 的 MRM 色谱图 3.2标准样品谱图 图3 10 ug/L 青 菜 基质标准溶液的 MRM 色谱图 3.3校准曲线和定量限 分别配制10、20、50、100、160 ug/L的青菜基质匹配标准溶液按1.2中的分析条 件 进行 测 定，外标法定量。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线。根据 10 ug/L标 样 数据，以3倍信噪比、10倍信噪比计算 检出限、定量限。各化合物线性方程、相关系数、检出限以及定量限如表3所示。 表3 线 性 方程及灵敏度 序号 组分名称 校准曲线 相关系数r 检出限(ug/L) 定量限 (ug/L) 1 咪鲜胺 Y=3220X+2917 0.9954 0.37 1.22 2 BTS44595 Y=11406X+10789 0.9992 0.10 0.34 3 BTS44596 Y=150866X-55268 0.9999 0.07 0.22 4 BTS45186 Y=1388X-3698 0.9984 0.28 0.92 3.4重复性实验 取 10 ug/L 青 菜基质匹配标准溶液，连续进样6次，考察仪器的重复性。结果如表4所示。 表4峰面积和保留时间重复性结果 (n=6) 序号 组分名称 峰面积 RSD(%) 保留时间 RSD (%) 序号 组分名称 峰面积 RSD((%) 保留时间 RSD (%) 1 咪鲜胺 4.32 0.08 3 BTS44596 1.63 0.09 2 BTS44595 3.97 0.10 4 BTS45186 5.23 0.11 3.5加标回收率 将 青 菜 空 白样品进行低、中、高三个浓度水平加标，按照上述前处理方法处理后上机，每个水平重复测定4次。结果如表5所示：平均回收率在71.6%~90.7%之间， RSD 在1.18%~3.88% 之间。 表5添加 回 收率结果 (n=4) 序号 名称 低浓度 (0.01 mg/kg) 中浓度 (0.02 mg/kg) 高浓度 (0.1 mg/kg) 平均回收率(%) RSD(%) 平均回收率(%) RSD(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 咪鲜胺 93.9 3.88 93.0 3.86 80.3 3.54 2 BTS44595 100 1.46 91.1 2.82 78.3 1.23 3 BTS44596 92.7 1.54 78.9 1.55 71.6 1.18 4 BTS45186 107 3.39 90.3 1.35 78.1 1.32 结论 本文建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪测定植物源性食品中咪鲜胺及其代谢物残留量的方法 。目标 物在线性范围在10~160ug/L间，相关系数R≥0.99。在空白 青 菜基质中添加低、中、高三个浓度(0.01、0.02、0.1 mg/kg) 的混标，回收率在71.1-107% 之间， RSD 在1.18~3.88%。本方法实现了正负离子模式的一针分析，可满足植物源性食品中咪鲜胺及其代谢物快速检测的需要。 岛津应用云 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心