褐藻胶寡糖中的甘露糖醛酸单糖和古罗糖醛酸单糖含量的测定

褐藻胶寡糖具有多种生物学功能，有整肠和解毒、降血糖血脂、抗凝血、抗炎、免疫调节等作用。在医药、食品领域，褐藻胶寡糖可作为糖尿病、肥胖症、直肠结肠癌、习惯性便秘患者的疗效食品；在饲料领域，褐藻寡糖克服了以往所有抗生素、益生素、酶制剂等的不足，用量少、纯天然、无残留且稳定性强，并能提高动物机体的抗病能力，促进动物生长，增加动物营养，是优良的饲料添加剂。 褐藻胶是由1，4-甘露糖醛酸 (M)和1，4-古罗糖醛酸(G)不规则链接起来的线性长链分子，采用不同的降解方法（酸降解法，酶降解法，氧化降解法）降解褐藻胶，可以得到聚合度20以下的系列褐藻胶寡糖，由β-D-聚甘露糖醛酸(M)和α-L-聚古罗糖醛酸(G)组成的线型低聚合物，有聚甘露糖醛酸（PM）、聚古罗糖醛酸（PG）和杂合褐藻寡糖（PMG）三种类型产品。褐藻胶寡糖是一种淡黄褐色粉末，能溶于水，稳定性强。本实验中使用具有脉冲安培检测器的高效阴离子交换色谱对褐藻胶寡糖中的甘露糖醛酸单糖和古罗糖醛酸单糖进行检测。详情如下：壹仪器和设备表1 实验过程中所使用的仪器设备贰试剂和材料除非另有说明，所用试剂均为优级纯。水：超纯水（18.2MΩ•cm）；50%氢氧化钠：色谱纯；无水乙酸钠：优级纯；古罗糖醛酸单糖（客户提供）：2mmol/L；甘露糖醛酸单糖（客户提供）：2mmol/L。叁样品的制备精密称取褐藻胶G段寡糖0.1088g，用超纯水溶解稀释定容到100mL，经0.22 μm滤膜过滤，直接进样分析。精密称取褐藻胶寡糖0.1049g，用超纯水溶解稀释定容到100mL，经0.22 μm滤膜过滤，直接进样分析。将古罗糖醛酸单糖标准品（客户提供）稀释20倍，直接进样分析。将甘露糖醛酸单糖标准品（客户提供）稀释20倍，直接进样分析。肆分析步骤色谱条件流动相：溶剂A：超纯水；溶剂B：250mM氢氧化钠；溶剂C：250mM氢氧化钠+500mM乙酸钠水溶液。表2 淋洗液梯度变化表流  速：0.5mL/min；柱  温：30℃；进样量：25μL；色谱柱：Dionex CarboPac PA20 Analytical色谱柱，150 mm×3mm，配Dionex CarboPac PA20 Guard保护柱30 mm×3 mm。电化学检测器参数模式：脉冲安培；检测频率：2Hz；反应时长Ts=200ms；Flexcell金电极。表3 检测器波形设置衰减200μA；滤波器0.050Hz标准溶液色谱图0.1mmol/L古罗糖醛酸单糖标准品色谱图0.1mmol/L甘露糖醛酸单糖标准品色谱图空白色谱图空白试样的色谱图样品测定褐藻胶G段寡糖色谱图褐藻胶寡糖色谱图伍结果与计算表4  检测结果（含量%）备注：①ND表明未检出或低于检出限；②测定值已扣除空白值；③不同方法、不同实验室间检测结果会存在差异。0.1mmol/L 甘露糖醛酸单糖标准品色谱图 褐藻胶寡糖色谱图 褐藻胶寡糖中的甘露糖醛酸单糖和古罗糖醛酸单糖含量 的测定 褐藻胶寡糖具有多种生物学功能，有整肠和解毒、降血糖血脂、抗凝血、抗炎、免疫调 节等作用。 在医药、食品领域，褐藻胶寡糖可作为糖尿病、肥胖症、直肠结肠癌、习惯性便秘患者 的疗效食品；在饲料领域，褐藻寡糖克服了以往所有抗生素、益生素、酶制剂等的不足，用 量少、纯天然、无残留且稳定性强，并能提高动物机体的抗病能力，促进动物生长，增加动 物营养，是优良的饲料添加剂。 褐藻胶是由1，4-甘露糖醛酸 (M)和1，4-古罗糖醛酸(G)不规则链接起来的线性长链分 子，采用不同的降解方法(酸降解法，酶降解法，氧化降解法)降解褐藻胶，可以得到聚合 度20以下的系列褐藻胶寡糖，由β-D-聚甘露糖醛酸(M)和α-L-聚古罗糖醛酸(G)组成的线型低 聚合物，有聚甘露糖醛酸(PM)、聚古罗糖醛酸(PG)和杂合褐藻寡糖 (PMG)三 种类型 产品。 褐藻胶寡糖是一种淡黄褐色粉末，能溶于水，稳定性强。本实验中使用具有脉冲安培检 测器的高效阴离子交换色谱对褐藻胶寡糖中的甘露糖醛酸单糖和古罗糖醛酸单糖进行检测。详情如下： 壹 仪器和设备 表1实验过程中所使用的仪器设备 仪器名称。 型号。 生产厂家。 电子天平。 METTLER TOLEDO XS204DR。 梅特勒-托利多(上海)有限公司。 自动进样器。 SHA-17。 青岛盛瀚色谱技术有限公司。 四元泵。 SHP-12。 青岛盛瀚色谱技术有限公司。 电化学检测器。 SHE-8 ECD. 青岛盛瀚色谱技术有限公司。 贰 试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为优级纯。 水：超纯水(18.2MQ·cm)； 50%氢氧化钠：：色谱纯； 无水乙酸钠：优级纯； 古罗糖醛酸单糖(客户提供)： 2mmol/L； 甘露糖醛酸单糖(客户提供)： 2mmol/L。 叁 样品的制备 精密称取褐藻胶 G 段寡糖 0.1088g， 用超纯水溶解稀释定容到 100mL， 经 0.22 um 滤膜过滤，直接进样分析。 精密称取褐藻胶寡糖 0.1049g， 用超纯水溶解稀释定容到100mL， 经 0.22 um 滤膜过滤，直 接进样分析。 将古罗糖醛酸单糖标准品(客户提供)稀释20倍，直接进样分析。将甘露糖醛酸单糖标准品(客户提供)稀释20倍，直接进样分析。 肆 分析步骤 色谱条件 流动相： 溶剂A：超纯水； 溶剂B： 250mM 氢氧化钠； 溶剂 C： 250mM氢氧化钠+500mM 乙酸钠水溶液。 表2淋洗液梯度变化表 时间(min)。 A(%)。 B(%)。 C(%)。 0.0. 70.0. 30.0. 0.0. 5.0. 70.0. 30.0 0.0. 40.0. 0.0. 0.0. 100. 70.0. 0.0. 0.0 100 70.1。 70.0. 30.0. 0.0. 85. 70.0. 30.0 0.0. 流 速： 0.5mL/min； 柱：温：30℃； 进样量：25pL； 色谱柱： Dionex CarboPac PA20 Analytical 色谱柱， 150mmx3mm， 配 Dionex CarboPac PA20Guard 保护柱 30mmx3mm。 电化学检测器参数 模式：脉冲安培；检测频率：2Hz； 反应时长 Ts=200ms； Flexcell 金电极。 表3检测器波形设置 时间/s。 电压/V。 积分状态。 0.00. 0.10。 一 0.20. 0.10. 开始。 0.40. 0.10. 结束。 0.41。 -2.0 一 0.42。 -2.0. 一 0.43. 0.6. 一 0.44。 -0.10 一 0.50. -0.10. 一 衰减200pA；滤波器 0.050Hz 标准溶液色谱图 0.1mmol/L 古罗糖醛酸单糖标准品色谱图 nim 空白色谱图 空白试样的色谱图 色 谱 测 量 数据 4500 样品测定 褐藻胶G 段寡糖色谱图 色 谱 测量数据 色 谱测 量 楼 据 伍 结果与计算 表4检测结果(含 量 %) 样品名称。 G标(古罗糖醛酸单糖)。 M标(甘露糖醛酸单糖)。 褐藻胶G段寡糖。 3.92. 4.54。 褐藻胶寡糖。 0.075。 0.110. 备注：：①ND表明未检出或低于检出限；②测定值已扣除空白值；③不同方法、不同实验室间检测结果会存在差异。