Copure® MAX 混合阴离子固相萃取柱 | 猪肉中喹乙醇代谢物的UPLC-MS/MS测定

猪肉中喹乙醇代谢物的UPLC-MS/MS测定（Copure® MAX混合阴离子固相萃取柱）《GB/T  20746-2006 牛、猪肝脏和肌肉中卡巴氧、喹乙醇及代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》喹乙醇是一种具有促生长作用的药物性添加剂，具有蓄积毒性，对多数动物有明显的致畸作用，对人也有潜在的危害，因而被禁止用作饲料添加剂。喹乙醇本身并不稳定，在体内短时间内会发生代谢，其主要代谢产物3-甲基喹噁啉-2-羧酸(MQCA)比较稳定，是国际食品法典委员会认定的标示残留物。逗点生物建立了猪肉中MQCA的液相色谱-串联质谱分析方法。样品经前处理提取，过Copure ®MAX固相萃取柱净化，氮吹复溶后，上相色谱-串联质谱测定，内标法定量，测试结果符合标准要求。一、样品提取准确称取搅碎后的猪肉5.00 g（精确至0.01g），置于50 mL离心管中，加入10 mL 0.6 %甲酸溶液，混匀后，置于47℃振荡水浴振摇1 h。先加入3 mL 1.0 mol/L Tris溶液，混匀，再加入0.3 mL 0.01 g/mL蛋白酶水溶液，充分混匀后，置于47℃振荡水浴中酶解16-18 h。冷却至室温，再加入20 mL 0.3 mol/L盐酸溶液，振荡5 min，在10℃下10000 r/min下离心5 min，过滤上清液，待净化。二、样品净化分别用3.0 mL甲醇、3.0 mL水活化Copure ®MAX萃取柱（60 mg/3 mL），然后将上述待净化液加入固相萃取柱，待样液全部流出后，用30 mL 50 mmol/L乙酸钠-甲醇溶液（19+1)清洗离心管后过固相萃取小柱，压干。然后依次用30 mL 0.05 mol/L乙酸钠-甲醇溶液（19+1）、3×3.0 mL甲醇、3.0 mL水、3×3.0mL 0.1 mol/L盐酸溶液、2×3.0 mL甲醇-水溶液（1+4）、2.0 mL乙酸乙酯淋洗，抽干小柱。加入3.0 mL 2%甲酸乙酸乙酯溶液洗脱MQCA至玻璃氮吹管中，于45℃下氮气吹至近干。加入1.0 mL 0.1% 甲酸-甲醇(19+1)溶液，涡旋复溶，0.22 μm滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱仪测定。三、仪器条件3.1 色谱条件仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）色谱柱：Commasil ® AQ-C18（2.1 mm×100 mm，3 μm）流动相：A：0.1 %甲酸水 B：甲醇流速：0.3 mL/min柱温：30℃进样量：10 μL洗脱方式：梯度洗脱，见表1。表1：梯度洗脱程序时间/minA/%B/%080201.080201.160403.040603.120804.020805.580207.080203.2 质谱条件离子源：HESI电喷雾电压：3500 V鞘气压力：40 arb辅气压力：2 arb离子传输管：380 ℃辅气温度：350 ℃表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（*为定量离子）名称保留时间/min母离子子离子喹噁啉-2-羧酸-d43.83179.1133.1*、161.03-甲基-喹噁啉-2-羧酸4.21189.1145.1*、171.0四、实验结果表3 3-甲基-喹恶啉-2-羧酸加标回收实验结果名称添加浓度/μg/kg回收率/%平均回收率/%RSD/%3-甲基-喹噁啉-2-羧酸2.074.177.53.7878.979.4图1 加标水平为2.0 μg/kg时猪肉中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸总离子流图图2 加标水平为2.0 μg/kg时猪肉中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸提取离子色谱图5、 订购信息货号描述包装COMAX360Copure® MAX固相萃取柱，60 mg/3 mL50支/盒CS2110003AQ-C18Commasil®AQ-C18液相色谱柱,2.1 ×100 mm，3 μm1根/盒SDC-3000-Dbiocomma® 多管涡旋混匀仪1台/箱SF130-22-NL尼龙针式过滤器 直径13 mm，孔径0.22 μm100个/盒SC2-12 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425100个/盒V2-AL2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425100个/盒猪肉中喹乙醇代谢物的 UPLC-MS/MS测定 (Copure @ MAX 混合阴离子固相萃取柱) 《GB/TT 20746-2006牛、猪肝脏和肌肉中卡巴氧、喹乙醇及代谢物残留 量 的测定液相色谱-串联质谱法》喹乙醇是一种具有促生长作用的药物性添加剂，具有蓄积毒性，对多数动物有明显的致 畸作用，对人也有潜在的危害，因而被禁止用作饲料添加剂。喹乙醇本身并不稳定，在体内 短时间内会发生代谢，其主要代谢产物3-甲基喹噁啉-2-羧酸(MQCA)比较稳定，是国际食品 法典委员会认定的标示残留物。 逗点生物建立了猪肉中 MQCA 的液相色谱-串联质谱分析方法。样品经前处理提取，过 Copure QMAX 固相萃取柱净化，氮吹复溶后，上相色谱-串联质谱测定，内标法定量，测试 结果符合标准要求。 一、样品提取 准确称取搅碎后的猪肉5.00g(精确至0.01g)，置于50 mL离心管中，加入10mL 0.6%甲酸溶液，混匀后，置于47℃振荡水浴振摇1h。先加入3mL 1.0 mol/L Tris 溶液，混匀，再加入 0.3 mL 0.01 g/mL 蛋白酶水溶液，充分混匀后，置于47℃振荡水浴中酶解 16-18h。冷却至室温，再加入20 mL 0.3 mol/L 盐酸溶液，振荡5 min， 在10℃下10000 r/min 下离心 5 min， 过滤上清液，待净化。 二、样品净化 分别用 3.0 mL 甲醇、3.0 mL 水活化 Copure @MAX 萃取柱(60mg/3 mL)，然后将上 述待净化液加入固相萃取柱，待样液全部流出后，用30 mL 50 mmol/L乙酸钠-甲醇溶液(19+1)清洗离心管后过固相萃取小柱，压干。然后依次用 30 mL 0.05 mol/L 乙酸钠-甲醇溶液(19+1)、3×3.0 mL 甲醇、3.0mL水、3×3.0mL 0.1 mol/L 盐酸溶液、2×3.0 mL 甲醇-水溶液(1+4)、2.0 mL 乙酸乙酯淋洗，抽干小柱 。加入 3.0 mL 2%甲酸乙酸乙酯溶液洗脱 MQCA 至玻璃氮 吹管中，于45℃下氮气吹至近干。加入1.0 mL 0.1% 甲酸-甲醇(19+1)溶液，涡旋复溶，0.22um 滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱仪测定。 三、仪器条件 3.11色谱条件 仪器： UPLC-MS/MS (Thermo Fisher TSQ Endura) 色谱柱： CommasilAQ-C18 (2.1mmx100 mm， 3 um) 流动相： A：0.1%甲酸水 B：：甲醇 流速：0.3mL/min 柱温：30℃ 进样量：10uL 洗脱方式：梯度洗脱，见表1。 表1：梯度洗脱程序 时间/min A/% B/% 0 80 20 1.0 80 20 1.1 60 40 3.0 40 60 3.1 20 80 4.0 20 80 5.5 80 20 7.0 80 20 3.2质谱条件 离子源： HESI 电喷雾电压：3500Ⅴ 鞘气压力：40arb 辅 气 压力：2arb 离子传输管：380℃ 辅气温度：350℃ 表2组分名称、保留时间及特征离子 一 览表(*为定 量 离子) 名称 保留时间/min 母离子 子离子 喹噁啉-2-羧酸-d4 3.83 179.1 133.1*、161.0 3-甲基-喹噁啉-2-羧酸 4.21 189.1 145.1*、171.0 四、实验结果 表33-甲基-喹恶啉-2-羧酸加标回收实验结果 名称 添加浓度/ug/kg 回收率/% 平均回收率/% RSD/% 3-甲基-喹噁啉-2-羧酸 2.0 74.1 77.5 3.78 78.9 79.4 图1加标水平为 2.0 ug/kg 时猪肉中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸总离子流图 图2加标水平为 2.0 ug/kg 时猪肉中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸提取离子色谱图 五、订购信息 货号 描述 包装 COMAX360 CopureMAX 固相萃取柱， 60 mg/3 mL 50支/盒 CS2110003AQ-C18 CommasilAQ-C18 液相色谱柱，2.1×100 mm， 3 um 1根/盒 SDC-3000-D biocomma@多管涡旋混匀仪 1台/箱 SF130-22-NL 尼龙针式过滤器直径13mm， 孔径0.22 um 100个/盒 SC2-1 2 mL 蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫， 9-425 100个/盒 V2-AL 2 mL 螺纹棕色样品瓶，带书写处 11.6*32 mm， 9-425 100个/盒