LC-MS/MS检测玉米粉中的伏马毒素含量

本文参照GB 5009.240-2016《食品安全国家标准 食品中伏马毒素的测定》，建立了使用岛津三重四极杆液质联用仪LCMS-8045测定玉米粉中伏马毒素B1、伏马毒素B2和伏马毒素B3含量的方法。样品中加入同位素内标，以乙腈-水溶液提取，稀释后过强阴离子交换固相萃取柱净化，以LC-MS/MS检测，内标法定量。结果表明：该方法灵敏度高，重复性好，校准曲线线性良好，适合用作检测玉米粉中的伏马毒素含量。SSL-CA22-486Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-719 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LC-MS/MS 检测玉米粉中的伏马毒素含量 LCMSMS-719 摘要：本文参照GB 5009.240-2016《食品安全国家标准食品中伏马毒素的测定》，建立了使用岛津三重四极杆液质联用仪测定玉米粉中伏马毒素B1、伏马毒素B2和伏马毒素B3含量的方法。样品中加入同位素内标，以乙腈-水溶液提取，稀释后过强阴离子交换固相萃取柱净化，以LC-MS/MS检测，内标法定量。结果表明：该方法灵敏度高，重复性好，校准曲线线性良好，适合用作检测玉米粉中的伏马毒素含量。 关键词： LC-MS/MS3玉米 伏马毒素 伏马毒素 (Fumonisin， FB) 是在自然界存在较广的一类真菌毒素，最早发现于串珠镰刀菌的培养液中。伏马毒素的种类较多，根据结构可划分为A族、B族、C族和P族，其中B族是主要的危害种类，其对人或者动物皆有危害性。在粮食作物中，伏马毒素主要污染的是玉米及其制品。 GB 5009.240-2016《食品安全国家标准食品中伏马毒素的测定》规定了玉米及其制品中伏马毒素B1(FB1)、伏马毒素B2(FB2)和伏马毒素B3(FB3)的检测方法。 本文参照该标准第二法，使用LCMS-8045 建立了玉米粉样品中FB1、FB2 和 FB3 的检测方法。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津超高效液相色谱仪 LC-40 与 LCMS-8045 联用系统，具体配置为： 系统控制器：CBM-40 脱 气 机： DGU-405 输液泵：：LC-40B X3自动进样器：SIL-40C X3柱温箱：CTO-40S质谱检测器：LCMS-8045 色谱工作站： LabSolutions Ver.5.114 1.2分析条件 液相条件 色 谱 柱：：Shim-pack Velox SP-C18 (100 mm x2.1 mml.D.，1.8um) P/N：227-32001-03，岛津(上海)实验器材有限公司 动 相： A相-0.1%甲酸水溶液；B相-甲醇/乙腈=1：1 脱方 式： 梯度洗脱，B相初始浓度为30%，洗脱程序见表1 速： 0.35mL/min 柱 温 30°℃ 样体 积： 2pL 表1 梯度洗脱程序 Time(min) Module Command Value 2.30 泵 B.Conc 70 4.00 泵 B.Conc 70 4.20 泵 B.Conc 100 4.80 泵 B.Conc 100 5.00 泵 B.Conc 30 8.00 Controller Stop 质谱条件 分析仪器：LLCCMMS-8045离子化模式：ESI+接口日电压： 5.0kV雾 化 气：氮气3.0L/min干 燥 气：氮气 10.0 L/min加 热 气：空气10.0 L/min碰 撞 气：氩气接口温度：4400°CDL 温 度：2250°C加热模块温度：500℃扫描模模式：多反应监测(MRM)MRM参 数：见见表2 表2 MRM 优化参数 No. 化合物 CAS NO. 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias (V) CE(V) Q3 Pre Bias (V) 1 伏马毒素B1(FB1) 116355-83-0 722.40 352.30* -20 -35 -24 334.30 -26 -45 -22 2 伏马毒素 B2(FB2) 116355-84-1 706.40 336.30*354.30 -26 -38 -22 -26 -34 -16 3 伏马毒素B3 (FB3) 136379-59-4 706.40 336.30* -26 -41 -22 354.30 -20 -34 -23 4 C34-伏马毒素B1C34-FB1 1324564-22-8 756.40 374.30* -26 -41 -24 356.30 -26 -43 -23 注：*表示定量离子 1.3样品前处理 (1)提取：准确称取玉米粉样品(粒度小于1mm) 5g于50mL离心管中，加入浓度为 250 ng/mL的内标溶液400uL， 加入20 mL的50%乙腈水溶液，振荡提取20 min， 4000 r/min 离心5 min， 取上清液至另一离心管中。 (2)净化：取3mL上清液，加入75%甲醇水溶液8mL， 混合均匀后过强阴离子交换固相萃取柱(使用前按要求活化)，，分别用75%甲醇水溶液8mL和3mL甲醇淋洗，用10mL的1%乙酸甲醇溶液洗脱，55℃下氮气吹干，20%乙腈水溶液复溶， 0.22 um 滤膜过滤，即得。 ■结果与讨论 2.1灵敏度和专属性 标准样品 (FB1：20 ng/mL， 其他 10 ng/mL) 和空白样品的 MRM 色谱图如图1所示，空白样品无干扰，各目标组分在该浓度下(方法要求校准曲线最低浓度点)信噪比均在150以上，以S/N=10对应的浓度计算定量限，均可满足标准要求。 图1 标准样品(蓝)和空白样品(红) MRM色谱图 2.2校准曲线 参照标准，配制系列浓度标准溶液，其中FB1浓度分别为20、80、160、240、320、400 ng/mL， FB2 和FB3 浓度分别为 10、40、80、120、160、200 ng/mL， 内标 13C34-FB1 浓度为 25 ng/mL， 内标法建立校准曲线如图2所示，线性方程、相关系数和准确度如表3所示。 Area Ratio 100- 8 6 4 2- 0 图2校准曲线 表3 校准曲线信息 NO. 化合物 线性范围 (ng/mL) 线性方程 相关系数r 准确度 (%) 1 FB1 20~400 Y=0.027X-0.0005 0.9978 88.7~111.8 2 FB2 10~200 Y=0.048X+0.020 0.9977 85.3~114.4 3 FB3 10~200 Y=0.035X-0.015 0.9983 91.9~111.6 2.3残留考察 ULOQ基质加标样品进样后，空白样品进样分析所得色谱图如图3所示，各目标组分保留时间处无明显色谱峰。 图3残留考察 2.4重复性考察 对不同浓度的标准样品分别连续分析6次，计算保留时间和峰面积的RSD。结果见表4，保留时间RSD均不高于 0.13%，峰面积 RSD 均不高于5.16%，仪器重复性良好。 表4 重复性考察1 NO. 目标物 浓度((ng/mL) 保留时间 RSD (%) 峰面积 RSD (%) 1 FB1 20 0.09 4.85 240 0.13 3.47 2 FB2 10 0.13 5.16 120 0.12 3.58 3 FB3 10 0.11 3.08 120 0.12 3.38 空白样品中添加内标和不同浓度的混标，各自制备2个平行样品，前处理后进样分析，各组分含量两次结果的相对相差，即绝对差值与算数平均值比值，均不超过10%，满足标准要求(低于20%)。 表5 重复性考察2 样品名称 目标物 平行样1结果(ng/g) 平行样2结果(ng/g) 相对相差(%) 加标样品A FB1 24.4 26.5 8.2 FB2 22.1 23.7 7.0 FB3 22.9 25.2 9.6 加标样品B FB1 131.0 140.5 6.9 FB2 120.9 128.6 6.2 FB3 118.3 128.4 8.2 ■结论 本文参照 GB 5009.240-2016《食品安全国家标准食品中伏马毒素的测定》，建立了使用岛津三重四极杆液质联用仪 LCMS-8045 测定玉米粉中伏马毒素B1、伏马毒素B2和伏马毒素B3含量的方法。样品中加入同位素内标，以乙腈-水溶液提取，稀释后过强阴离子交换固相萃取柱净化，以LC-MS/MS检测，内标法定量。结果表明：该方法灵敏度高，重复性好，校准曲线线性良好，适合用作检测玉米粉中的伏马毒素含量。 岛津应用云