中药中玉米赤霉烯酮检测方案(固相萃取仪)

LabTech 2020版《中国药典》2351中药玉米赤霉烯酮测定解决方案 北京莱伯泰科仪器股份有限公司 前言 随着我国中医药产业的快速发展，中药材与饮片使用人群范围日益扩大，市场需求不断增长。 由于产地分布广、加工企业多、制备工艺各异及成分复杂多变等，给中药材与饮片的质量控制带来极大的挑战，保障中药材与饮片安全性显得尤为重要。因此，中药材与饮片微生物污染 问题不容忽视，特别是在生产以及加工储运过程中，如不采取有效措施加以控制，极易造成外源微生物的污染，其中可能产生大量致病菌和某些真菌毒素，导致中药材与饮片存在一定的安全性风险隐患，给临床使用带来安全性问题。 玉米赤霉烯酮又称F2毒素，主要由镰刀菌产生，是一种雌激素真菌毒素，广泛存在于霉变的玉米、高粱等谷类作物以及奶类制品中，主要作用于生殖系统，具有较强的生殖毒性和致畸作用，能导致动物不孕或流产，如果在中药存在玉米赤霉烯酮，可能会对患者产生安全隐患。 本文参考2020版《中国药典》2351通则中的玉米赤霉烯酮测定法，使用LabTech SPE 1000 全自动固相萃取系统对常用中药(人参、枸杞、大枣)的玉米赤霉烯酮进行富集净化，采用LC-MS检测，建立了一套中药的玉米赤霉烯酮处理检测方法，采用免疫亲和柱净化样品，此方法回收率及平行性良好，标准曲线R2>0.99，加标回收率为92.8%~94.1%，重复性 RSD 为 1.3%~2.8%，满足检测要求。 ( 北京莱伯泰科仪器有限公司 ) ( 电 话 ： 01 0-80 48 6 450 (总部 )/6 49 73 1 19 ( 市场 ) ) ( 传真：01 0-8 0 4 86354( 总 部)/64 97 4 268 ( 市场) ) 关键词： SPE 10002020版《中国药典》 玉米赤霉烯酮 2351通则MiniLab3000 1仪器设备及试剂 1.11仪器设备 1.1.1 SPE 1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科公司)； 1.1.2 SCIEX Exion LC液相系统+ Triple QuadM 4500质谱系统(SCIEX中国公司)； 1.1.3 MiniLab3000 全自动液体样品处理平台(莱伯泰科公司)； 1.2试剂及耗材 1.2.1甲醇(色谱级)； 1.2.2蒸馏水； 1.2.3赭曲霉毒素免疫亲和柱(3mL， Beacon)； 1.2.4赭曲霉毒素A标品溶液(购自坛墨质检)； 1.2.5氯化钠； 2试验方法 2.1样品处理 分别取人参、枸杞、大枣三种中药进行实验，取供试品粉末约5g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠1g，，精密加入90%乙腈溶液 25mL， 均质2min(11000r/min)，离心10min(4000r/min)，取上清液5mL，用水稀释至25mL，离心10min (4000r/min)，取上清液10mL 作为后续实验样品。 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-80 48 6 450 (总部 )/6 49 73 1 19 ( 市场 ) ) ( 传真：01 0-8 0 4 86354( 总 部)/64 97 4 268 ( 市场) ) 2.2免疫亲和柱净化 将2.1的10mL 样品放入 SPE 1000 全自动固相萃取系统，按照图1所示的方法进行样品的净化步骤，收集净化液，用0.22um滤膜过滤，待后续处理。 图1玉米赤霉烯酮净化流程 2.3基质加标回收率实验 标准曲线配制：取对照品母液至 MiniLab3000 全自动液体样品处理平台上，按图2方法配制标曲。 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ：0 10-8 04 8 645 0(总 部)/ 64 97 3 11 9 (市 场 ) ) ( 传真：01 0-8 0 4 86354( 总 部)/64 97 4 268 ( 市场) ) 图 2 MiniLab3000 全自动液体样品处理平台玉米赤霉烯酮标曲配制流程 按2.1方法准备样品，进行加标实验，按药典所规定的定量限 4ug/kg 进行加标，，然后按照2.2方法进行前处理实验，同时进行3个平行样品，用来测定加标回收率及平行性。 2.4 LC-MS分析条件 2.4.1液相色谱条件 色谱柱： Shim-pack Velox C18 (2.7um， 2.1*100mm)； 流动相： A：水；；B：甲醇； 流速： 0.3mL/min；柱温：40℃；进样量： 5pL； 洗脱梯度： 0min， 55%B； 5min， 90%B；7min， 90%B； 7.1min， 55%B；10min， 55%B： 2.4.2质谱条件 离子源： ESI源， MRM模式，负离子模式； 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-80 48 6 450 (总部 )/6 49 73 1 19 ( 市场 ) ) ( 传真：01 0-8 0 4 86354( 总 部)/64 97 4 268 ( 市场) ) 离子源参数： IS电压：-4500V 气帘气 CUR：25 psi； 雾化气 GS1：60 psi 辅助气 GS2：60 psi； 源温度 TEM：550℃ 碰撞气 CAD： 9 psi； 3结果和讨论 3.1各样品色谱图 图3标准工作液 LC-MS MRM 总离子流色谱图(正离子模式) 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-80 48 6 450 (总部 )/6 49 73 1 19 ( 市场 ) ) ( 传真：01 0-8 0 4 86354( 总 部)/64 97 4 268 ( 市场) ) 3.09 图4基质加标 LC-MS MRM 总离子流色谱图(正离子模式) 3.2标准曲线 按2.3中的配制的对照品溶液计算得出标曲(以相对峰面积和浓度作标准曲线)的线性方程、相关系数，见图5。 ( 传真：01 0-8 0 4 86354( 总 部)/64 97 4 268 ( 市场) ) 图5玉米赤霉烯酮标准曲线 3.2加标回收率 加标样品经免疫亲和柱柱化后，分别进行 LC-MS分析、定量，计算得到的加标回收率及相对标准偏差如表1所示。 表1玉米赤霉烯酮加标回收率 中药品种 回收率(%) 平均值(%) RSD 1 2 3 枸杞 93.0% 91.1% 95.1% 93.1% 2.2% 人参 95.3% 93.0% 90.1% 92.8% 2.8% 大枣 94.6% 92.7% 95.0% 94.1% 1.3% 4结论 由图5、表2可知，2020版《中国药典》2351通则中玉米赤霉烯酮测定法的标准曲线R2>0.99，加标回收率为 92.8%~94.1%，重复性RSD 为1.3%~2.8%，满足检测要求。 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 传真：01 0-8 0 4 86354( 总 部)/64 97 4 268 ( 市场) ) 综上所述，莱伯泰科 SPE 1000 全自动固相萃取系统及MiniLab3000全自动液体样品处理平台能够高效、稳定地达到实验的要求，适用于2020版《中国药典》2351通则中规定的玉米赤霉烯酮测定，适用于人参、大枣、枸杞等多种中药样品的前处理实验。 ( 参考文献： ) ( [1] 谭婧，郑润生，王文丽，徐晖.中药饮片中黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的液质联用检测 分析[J].时珍国医国药，2012，23(10)：2469-2472. ) ( [2 ] 中华人民共和国药典2020年版.四部[S].2020：30ChP 2020.Vol Ⅳ[S].2020： 30. ) 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-80 48 6 450 (总部 )/6 49 73 1 19 ( 市场 ) ) ( 传真：01 0-8 0 4 86354( 总 部)/64 97 4 268 ( 市场) ) 地址：北京空港工业区Your Lab， Our Techwww.labtechgroup.com 随着我国中医药产业的快速发展，中药材与饮片使用人群范围日益扩大，市场需求不断增长。由于产地分布广、加工企业多、制备工艺各异及成分复杂多变等，给中药材与饮片的质量控制带来极大的挑战，保障中药材与饮片安全性显得尤为重要。因此，中药材与饮片微生物污染问题不容忽视，特别是在生产以及加工储运过程中，如不采取有效措施加以控制，极易造成外源微生物的污染，其中可能产生大量致病菌和某些真菌毒素，导致中药材与饮片存在一定的安全性风险隐患，给临床使用带来安全性问题。玉米赤霉烯酮又称F2毒素，主要由镰刀菌产生，是一种雌激素真菌毒素，广泛存在于霉变的玉米、高粱等谷类作物以及奶类制品中，主要作用于生殖系统，具有较强的生殖毒性和致畸作用，能导致动物不孕或流产，如果在中药存在玉米赤霉烯酮，可能会对患者产生安全隐患。本文参考2020版《中国药典》2351 通则中的玉米赤霉烯酮测定法，使用LabTech SPE 1000全自动固相萃取系统对常用中药（人参、枸杞、大枣）的玉米赤霉烯酮进行富集净化，采用LC-MS检测，建立了一套中药的玉米赤霉烯酮处理检测方法，采用免疫亲和柱净化样品，此方法回收率及平行性良好，标准曲线R2>0.99，加标回收率为92.8%~94.1%，重复性RSD为1.3%~2.8%，满足检测要求。关键词：SPE 1000 2020版《中国药典》 玉米赤霉烯酮  2351通则